一種國產(chǎn)全自動(dòng)輸血相容性檢測(cè)儀器的性能驗(yàn)證分析研究

何欣，劉思琪，陳麟鳳

首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院 輸血科，北京 100038

引言

血型檢測(cè)和交叉配血是輸血相容性檢測(cè)中的重要實(shí)驗(yàn)，結(jié)果準(zhǔn)確性是臨床用血安全的保障[1-4]。而檢測(cè)儀器、試劑國產(chǎn)化，降低檢測(cè)耗占比也是醫(yī)院發(fā)展的趨勢(shì)之一[5]。目前微柱凝膠法是全國各三甲醫(yī)院進(jìn)行血型鑒定和交叉配血的主要檢測(cè)方法，實(shí)際工作中進(jìn)口全自動(dòng)分析儀已引入國內(nèi)十幾年[6-9]。為了滿足本院臨床備血檢測(cè)和大量血型初篩及復(fù)檢的需要，提高臨床輸血的安全性、高效性、精準(zhǔn)性，同時(shí)實(shí)現(xiàn)儀器國產(chǎn)化的目的，本科室引進(jìn)力博全自動(dòng)血型配血儀，開展血型檢測(cè)，Rh分型和交叉配血。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室管理要求設(shè)計(jì)全自動(dòng)血型配血儀的性能驗(yàn)證計(jì)劃，根據(jù)力博全自動(dòng)血型分析儀（AISEN120）的功能組成，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的ABO正定型、ABO反定型、Rh(D)血型、交叉配血等4個(gè)項(xiàng)目與已有的WADiana儀器進(jìn)行符合性、重復(fù)性驗(yàn)證，以證實(shí)該檢測(cè)體系是否能夠滿足臨床工作的要求。此外還對(duì)其軟件連接，結(jié)果的通訊傳輸進(jìn)行升級(jí)，以減少人為差錯(cuò)。本研究首次將力博全自動(dòng)血型配血儀器投入使用過程中的問題發(fā)現(xiàn)、處理流程進(jìn)行報(bào)告，為引入或使用相關(guān)儀器的醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血相容性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室提供新儀器性能驗(yàn)證方法，同時(shí)也為儀器生產(chǎn)廠家優(yōu)化設(shè)備功能提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

臨床符合輸血適應(yīng)癥患者，由醫(yī)護(hù)人員抽取患者新鮮抗凝全血送至輸血科，審核后進(jìn)行輸血相容性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。本研究共進(jìn)行了300例血型和100例交叉配血的比對(duì)實(shí)驗(yàn)。根據(jù)《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》要求，每位患者抽取4 mL EDTA抗凝血。標(biāo)本排除條件：① EDTA抗凝管，采血量低于4 mL，離心后的標(biāo)本，血漿、紅細(xì)胞高度低于1.0 cm；② 存在乳糜血、溶血、凝塊等有可能影響結(jié)果的標(biāo)本；③ 因病人本身疾病因素血型和交叉配血有問題而無特殊抗體的患者；④ 懷疑細(xì)菌污染的標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器

WaDaina全自動(dòng)配血儀（Diagnostic Grifols，S.A.，西班牙）和力博醫(yī)藥專用機(jī)（AISEN120）（煙臺(tái)艾德康生物科技有限公司，中國）

1.2.2 試劑

兩臺(tái)儀器均使用配套試劑耗材。

WADiana：DaniaDG Gel Sol血型分析用稀釋液，0.8%人ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑，0.8%紅細(xì)胞抗體篩選細(xì)胞，抗人球蛋白檢測(cè)卡（微住凝膠），ABO-Rh血型檢測(cè)卡（微柱凝膠），洗液A和洗液B。

AISEN120：2%～4% ABO血型定型紅細(xì)胞試劑，2%～4%不規(guī)則抗體篩選紅細(xì)胞試劑，血型分析用稀釋液，Rh血型分型檢測(cè)卡（柱凝集法），抗人球蛋白（抗IgG+C3d）檢測(cè)卡，ABO/Rh血型定型檢測(cè)試劑卡（微柱凝膠法）、一次性吸頭，96深孔板。血型鑒定和抗體篩查質(zhì)控品。

1.3 試驗(yàn)方法

兩臺(tái)儀器每日開機(jī)后分別檢測(cè)質(zhì)控品，進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.3.1 WADiana 檢測(cè)

血型分析用稀釋液，人ABO血型反定型用紅細(xì)胞試劑盒，紅細(xì)胞抗體篩選細(xì)胞室溫放置30 min，DG Ge Coombs卡抗人球蛋白檢測(cè)卡，DG Gel ABO-Rh血型檢測(cè)卡（微柱凝膠法）離心后使用。按照儀器操作要求進(jìn)行血型，抗體篩查和交叉配血試驗(yàn)。

1.3.2 AISEN120檢測(cè)

ABO血型定型紅細(xì)胞試劑，使用前進(jìn)行稀釋，即1 mL細(xì)胞+2 mL生理鹽水配制終濃度為1%的細(xì)胞溶液。上機(jī)前再次檢查標(biāo)本量符合要求，無乳糜溶血和凝集，每份標(biāo)本分別在兩臺(tái)儀器進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.3 手工試管法

本研究僅限實(shí)驗(yàn)室內(nèi)結(jié)果的兩種儀器比對(duì)，血型結(jié)果不符情況均以手工試管法復(fù)檢作為判斷標(biāo)準(zhǔn)。試管法血型檢測(cè)按照《實(shí)用血液免疫學(xué)血型理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)》相關(guān)操作進(jìn)行。

1.4 雙向傳輸設(shè)置

艾德康全自動(dòng)血庫系統(tǒng)的配套軟件與我院檢驗(yàn)之星和佰利亞軟件相連接，設(shè)置兩個(gè)軟件的雙向功能。即：計(jì)算機(jī)與儀器之間的雙向通信，可通過條碼識(shí)別和項(xiàng)目核收，既可以提高工作效率，也可以降低人工錯(cuò)誤率。但是這些儀器和軟件來自不同的廠商，存在著數(shù)據(jù)傳輸方式和數(shù)據(jù)格式不同的問題，所以本研究的雙向設(shè)置依托兩個(gè)軟件共同完成。在使用雙向功能時(shí)只可以開一個(gè)軟件識(shí)別項(xiàng)目，實(shí)驗(yàn)完成傳輸時(shí)兩個(gè)軟件可以同時(shí)使用。

2 結(jié)果

2.1 血型比對(duì)結(jié)果

連續(xù)1周檢測(cè)患者和獻(xiàn)血員血型，累計(jì)檢測(cè)300例標(biāo)本。WADiana和AISEN120結(jié)果比對(duì)結(jié)果，見表1。

表1 Diana和AISEN120血型檢測(cè)結(jié)果比對(duì)

將AISEN120儀器與Diana結(jié)果不符標(biāo)本進(jìn)行試管法復(fù)查并分析原因，結(jié)果顯示照相判讀、血型卡和反定標(biāo)本干擾所占比例最大，分別為57%，24%和12%，其他原因如表2所示。

表2 AISEN120“問題”樣本血型不符原因分析

2.2 交叉配血結(jié)果對(duì)比

連續(xù)1周對(duì)兩臺(tái)儀器進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)比對(duì)，共檢測(cè)樣本100例，結(jié)果及分析如表3～4所示。

表3 Diana和力博AISEN120交叉配血結(jié)果比對(duì)

表4 AISEN120與WADiana交叉配血不符原因分析

2.3 問題處理

兩臺(tái)儀器都是微柱凝膠方法，過儀器比對(duì)試驗(yàn)，本研究認(rèn)為導(dǎo)致AISEN120儀器臨床實(shí)驗(yàn)與WADiana不符的原因主要集中在照相判讀、強(qiáng)度判讀標(biāo)準(zhǔn)、血清加樣量等幾個(gè)方面，具體分析如下：① 照相判讀，判讀儀過于敏感，肉眼觀測(cè)不到也會(huì)報(bào)出“？”或者“陽性”；② 血清加樣量，標(biāo)本反定的反應(yīng)凝集強(qiáng)度達(dá)不到判讀標(biāo)準(zhǔn)。檢查儀器血清和紅細(xì)胞的加樣量，發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞和血清的加樣量均為50 μL；③ 試劑原因，用低離子配制反定細(xì)胞會(huì)加強(qiáng)反應(yīng)體系，結(jié)果會(huì)有溶血導(dǎo)致判讀結(jié)果為“？”；④ 耗材原因，試劑卡中有氣泡和保養(yǎng)液分布不均；⑤ 纖維蛋白，凝塊，標(biāo)本中有纖維蛋白的影響，或者有凝集的樣本加樣槍吸走凝塊影響結(jié)果；⑥ 抗體減弱，患者自身原因?qū)е卵头炊瘡?qiáng)度偏弱。

分析原因后處理如下：① 協(xié)調(diào)儀器工程師根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整判讀系統(tǒng)；② 檢查各個(gè)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，按照儀器要求參數(shù)設(shè)置了實(shí)驗(yàn)相對(duì)應(yīng)的加樣量（紅細(xì)胞懸液50 μL+血清25 μL）；③ 使用生理鹽水稀釋國產(chǎn)反定試劑紅細(xì)胞；④ 在使用前，實(shí)驗(yàn)室工作人員檢查ABO血型卡和抗人球蛋白卡，離心后方可使用；⑤ 標(biāo)本離心前和上機(jī)前，確認(rèn)是否含凝塊和纖維蛋白絲，避免影響儀器的判讀造成的假陽性。

調(diào)整儀器和實(shí)驗(yàn)干擾因素后，本實(shí)驗(yàn)室分別進(jìn)行了50例血型檢測(cè)和交叉配血實(shí)驗(yàn)，兩臺(tái)儀器檢測(cè)結(jié)果符合率分別為99%和100%，具體情況見表5～6。

表5 調(diào)整后血型鑒定比對(duì)結(jié)果

表6 調(diào)整后交叉配血比對(duì)結(jié)果

交叉配血驗(yàn)證50例標(biāo)本，主次側(cè)不一致5例均為次側(cè)不一致，次側(cè)不一致是因?yàn)閮膳_(tái)儀器對(duì)凝集強(qiáng)度判讀的原理不同造成，但并不影響對(duì)配血實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷及臨床用血安全，故認(rèn)為調(diào)整后AISEN120配血結(jié)果與WADiana相符率為100%。

3 討論

西班牙Diagnostic Grifols，S.A.公司的WADiana全自動(dòng)配血儀因操作方便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，作為輸血相容性檢測(cè)儀器在不同級(jí)別醫(yī)療機(jī)構(gòu)輸血科廣泛使用[10]。但由于進(jìn)口儀器，尤其是試劑細(xì)胞在運(yùn)輸時(shí)間和檢測(cè)成本等方面的限制，醫(yī)療機(jī)構(gòu)選擇引入適用于本機(jī)構(gòu)日常工作需要的性能穩(wěn)定的國產(chǎn)儀器和試劑，成為亟需解決的問題[11-13]。但新儀器引進(jìn)投入臨床使用過程中通常會(huì)遇到各種問題，本研究分類記錄下遇到的問題，并分析判斷問題是否可控以及如何對(duì)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

在本研究中，發(fā)現(xiàn)儀器照相判讀是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的最大問題（分別占血型鑒定、交叉配血與WADiana不一致結(jié)果的57%和25.6%）。WADiana的照相系統(tǒng)判讀儀組成包括透鏡、透鏡光源，卡支架、卡/微板照相機(jī)，卡/微板光源，檢測(cè)器，玻璃微板支架，圖像卡。原理如下：通過拍照反應(yīng)圖譜保存到計(jì)算機(jī)并自動(dòng)判讀。判讀的敏感可設(shè)定，判讀在膠卡中的免疫血清，凝血反應(yīng)，通過條形碼識(shí)別膠卡。AISEN120照相系統(tǒng)結(jié)果判讀原理與其不同，為底部掃描成像，CCD數(shù)碼相機(jī)記錄反映圖像，通過調(diào)節(jié)透鏡光源讀取圖像體積面積反映凝集程度和敏感度，這可能導(dǎo)致凝集強(qiáng)度相似，而結(jié)果判讀不一致的問題。與AISEN120工程師溝通后精準(zhǔn)調(diào)節(jié)儀器照相系統(tǒng)解決了這一問題。

由于儀器報(bào)出的結(jié)果中“？”較多，與實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有成熟進(jìn)口儀器相比，使得檢測(cè)結(jié)果一致性較低。分析結(jié)果表明儀器報(bào)出的結(jié)果中“？”的原因有兩種，一種就是判讀不出結(jié)果，判讀儀出現(xiàn)問題，另一種是出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，導(dǎo)致結(jié)果判讀“？”，手工復(fù)檢和WADiana均未發(fā)生溶血，分別從儀器實(shí)驗(yàn)參數(shù)、加樣量、試劑等方面進(jìn)行分析。由于試管法鑒定血型中使用玻璃（試劑瓶中的吸頭）或塑料移液器（塑料吸管），均未經(jīng)校準(zhǔn)而難以精確加樣。加樣量可能會(huì)隨著施加到吸頭的壓力或滴管/移液器的加樣角度改變而發(fā)生根本變化。全自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)要求血清與細(xì)胞比例在規(guī)定的范圍內(nèi)。如果使用不正確的試劑加樣的方式，結(jié)果不可靠。例如，對(duì)于使用低離子強(qiáng)度鹽水的測(cè)試系統(tǒng)，血清與細(xì)胞比例至少應(yīng)為40：1（血清體積×100/紅細(xì)胞體積×濃度）。本研究發(fā)現(xiàn)，AISEN120全自動(dòng)檢測(cè)體系中使用低離子液配制反定細(xì)胞，并且血漿加樣量為50 μL（儀器出廠默認(rèn)體積），有加強(qiáng)反應(yīng)強(qiáng)度效應(yīng)，導(dǎo)致溶血，從而影響了判讀結(jié)果。隨后本研究改為使用生理鹽水稀釋國產(chǎn)反定細(xì)胞，將血清加樣量調(diào)整25 μL，血型正反定結(jié)果不一致問題得以解決。

實(shí)驗(yàn)用耗材問題分析顯示：試劑與耗材在運(yùn)輸過程中，會(huì)有不可避免的磕碰，凝膠卡就會(huì)產(chǎn)生氣泡與保養(yǎng)液的散落，甚至保養(yǎng)液濺落在外。通過一段時(shí)間的觀察，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)血型和抗人球卡確實(shí)會(huì)有干裂和氣泡的問題，導(dǎo)致結(jié)果假陽性，提示工作人員在實(shí)驗(yàn)中必須仔細(xì)的去檢查耗材質(zhì)量，不僅檢查實(shí)驗(yàn)耗材的有效期，還要檢查外觀是否完整，凝膠卡保養(yǎng)液是否足量，是否存在干裂，是否有氣泡。通過離心卡片后，這些問題是可以避免的。

另外，本研究增設(shè)了儀器的雙向功能，由機(jī)器來識(shí)別所需實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，雙向功能不僅可以識(shí)別項(xiàng)目，還可以核收條碼信息所需要的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目，減少人工差錯(cuò)，降低成本浪費(fèi)[14-15]。在使用過程中，AISEN120全自動(dòng)血型配血儀可以快速進(jìn)行患者血型鑒定和交叉配血試驗(yàn)，并可以準(zhǔn)確進(jìn)行Rh血型分型，實(shí)現(xiàn)患者精準(zhǔn)輸血。具有如下：① 檢測(cè)速度快，每小時(shí)360T測(cè)試，兩針加樣通道，雙離心機(jī)；② 國產(chǎn)配套試劑成本低，降低我科耗占比；③ 可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè)，一個(gè)標(biāo)本可同時(shí)運(yùn)行多個(gè)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目（抗體篩查，血型檢測(cè)，Rh分型檢測(cè)，DAT的檢測(cè)，交叉配血試驗(yàn)）；④ 樣本可連續(xù)裝載，可同時(shí)裝載120（24×5）個(gè)樣本，12（2×6）瓶試劑，96張微柱凝膠卡，采樣一次性加樣吸頭。只要有空余樣本裝載架，可隨時(shí)加入樣本進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)；⑤ 可插入急診樣本；⑥ 保養(yǎng)操作簡(jiǎn)便。

綜上所述，經(jīng)過實(shí)際應(yīng)用比對(duì)、查找問題、分析原因和優(yōu)化檢測(cè)關(guān)鍵點(diǎn)，本科室AISEN120全自動(dòng)血型配血儀從儀器性能的穩(wěn)定性，與進(jìn)口儀器比對(duì)的重復(fù)性及每日檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性均得到了切實(shí)改進(jìn)，可以替代進(jìn)口儀器與試劑，保障臨床用血安全。本研究中的新儀器性能驗(yàn)方法和問題處理流程能有效驗(yàn)證全自動(dòng)血型分析系統(tǒng)的性能是否滿足臨床需求，可作為同類檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證和改進(jìn)操作流程。