我國茶毛蟲及其布尼亞病毒（EpBYV）的遺傳多樣性分析

摘要：茶毛蟲是一種危害茶葉生產(chǎn)的重要害蟲和人類皮膚致敏原，布尼亞病毒在茶毛蟲的不同地理種群中廣泛分布，研究茶毛蟲與茶毛蟲布尼亞病毒（Euproctis pseudoconspersa bunyavirus，EpBYV）遺傳背景可為更好地防治茶毛蟲和開發(fā)利用病毒資源提供理論支撐。采集了15個地理種群共148個茶毛蟲幼蟲樣本，測定了茶毛蟲的COI、ND5序列及EpBYV的RdRp序列，利用軟件DnaSP 6.12.03、Arlequin 3.5.2.2和MEGA 7.0.26等進行遺傳多樣性分析。合并COI、ND5序列分析發(fā)現(xiàn)，茶毛蟲的15個地理種群具有較高的單倍型多樣性（h=0.880 68）和較低的核苷酸多樣性（π=0.003 17），99個種群對間遺傳分化顯著較高（FST＞0.290，P＜0.05），AMOVA分析顯示遺傳變異主要來自于種群之間（87.12%），且組間分化與我國地勢第二、三級階梯分界吻合，種群歷史動態(tài)分析推測茶毛蟲總?cè)后w在近期較為穩(wěn)定。EpBYV的RdRp序列在除重慶城口種群外的138個樣本中成功擴增，具有較高的單倍型多樣性（h=0.935 26）和相對較低的核苷酸多樣性（π=0.017 95），93個種群對間遺傳分化顯著較高（FST＞0.257，P＜0.05），遺傳變異主要來自于種群之間（62.13%），種群歷史動態(tài)分析支持EpBYV種群近期經(jīng)歷了種群擴張事件。綜合研究結(jié)果表明，我國茶毛蟲總?cè)后w在近期將較為穩(wěn)定，但在重慶城口和福建寧德有種群擴張風(fēng)險；EpBYV群體經(jīng)歷了種群擴張，EpBYV在茶毛蟲群體中的感染率和種群擴張能力都較高，具有應(yīng)用于茶毛蟲生物防治的潛力。

關(guān)鍵詞：茶樹；茶毛蟲；布尼亞病毒；EpBYV；遺傳多樣性

中圖分類號：S571.1；S435.711 文獻標識碼：A 文章編號：1000-369X（2024）05-793-14

Genetic Diversity Analysis of Euproctis pseudoconspersa and Its Bunyavirus （EpBYV） in China

CHEN Shichun1， JIANG Hongyan1， LIAO Shuran1， CHEN Tingxu1， NIU Jinzhi2， WANG Xiaoqing1*

1. Tea Research Institute of Chongqing Academy of Agricultural Sciences， Chongqing 402160， China;

2. College of Plant Protection， Southwest University， Chongqing 400715， China

Abstract： Tea tussock moth， Euproctis pseudoconspersa， is an important pest which damages tea plants and causes human dermatitis. Euproctis pseudoconspersa bunyavirus， EpBYV， is a bunyavirus that widely distributed in different geographical populations of E. pseudoconspersa. In order to control the E. pseudoconspersa and utilize the virus resources， it is necessary to fully understand the genetic background of E. pseudoconspersa and EpBYV. In this study， 148 samples of E. pseudoconspersa larvae from 15 geographic populations were collected. COI and ND5 gene sequences of E. pseudoconspersa and RdRp sequences of EpBYV were determined. The genetic diversities of E. pseudoconspersa and EpBYV were analyzed by DnaSP 6.12.03， Arlequin 3.5.2.2 and MEGA 7.0.26. Sequence analysis of the combined sequences of COI and ND5 genes shows that 15 geographic populations have high haplotype diversity （h=0.880 68） and low nucleotide diversity （π=0.003 17）. Significantly high genetic differentiation among 99 population pairs （FST>0.290， P<0.05） was identified. Molecular variance analysis （AMOVA） shows that the genetic differentiation of E. pseudoconspersa was mainly among populations （87.12%）， and the differentiation among groups was consistent with the second and third ladder boundaries in China. Demographic history analysis suggests that the population of E. pseudoconspersa is relatively stable. RdRp sequences were successfully amplified in the 138 samples except CK population. RdRp sequence analysis reveals that the 14 geographic populations of EpBYV had high haplotype diversity （h=0.935 26） and relatively low nucleotide diversity （π=0.017 95）. The 93 population pairs had significantly higher genetic differentiation （FST>0.257， P<0.05）. AMOVA analysis shows that the genetic differentiation of EpBYV was mainly between populations （62.13%）. Demographic history analysis reveals that EpBYV might have undergone population expansions in the past. Based on the analysis of this study， the population of E. pseudoconspersa in China is relatively stable， and there is a risk of population expansion in Chengkou， Chongqing and Ningde， Fujian. The population of EpBYV has experienced population expansion. The infection rate and population expansion ability of EpBYV in E. pseudoconspersa are high， which has good potential for biological control of E. pseudoconspersa.

Keywords： tea plant， Euproctis pseudoconspersa， bunyavirus， EpBYV， genetic diversity

茶毛蟲（Euproctis pseudoconspersa Strand），又名茶黃毒蛾，隸屬于鱗翅目（Lepidoptera）毒蛾科（Lymantriidae），是一種遍布我國各大茶區(qū)的重要害蟲，以幼蟲咀食葉片為害，嚴重時可致茶叢光禿，造成茶葉產(chǎn)量嚴重受損，且各蟲態(tài)的茶毛蟲毒毛觸及人體均易引起皮炎，嚴重影響茶園農(nóng)事活動及周邊居民健康[1-5]。昆蟲病毒廣泛應(yīng)用于鱗翅目害蟲的防治[6-7]，目前茶毛蟲的病毒研究和應(yīng)用主要是茶毛蟲核型多角體病毒（Euproctis pseudoconspersa nuclear polyhedrosis virus，EpNPV）[8-11]，其蘇云金桿菌（Bacillus thuringiensis，BT）混劑已實現(xiàn)了商品化[12-14]。EpNPV對茶毛蟲控制效果較好，但在田間調(diào)控存在滯后、株系間毒力差異[8]，以及不同地理種群茶毛蟲對同株EpNPV敏感性不同等問題[15]。進一步收集并研究其他病毒，對茶毛蟲生物防治資源的儲備及生物防治效果的增強具有重要意義。茶毛蟲布尼亞病毒（Euproctis pseudoconspersa bunyavirus，EpBYV）屬于布尼亞病毒目（Bunyavirales）白纖病毒科（Phenuiviridae），是一種新鑒定的感染茶毛蟲的負鏈RNA病毒[16]。已有研究證實，布尼亞病毒目的費拉病毒（Ferak virus，F(xiàn)ERV）可通過蚊子產(chǎn)卵進行垂直傳播，并可能具有影響宿主傳播其他病毒的能力[17-19]。茶毛蟲感染EpBYV雖無明顯感染癥狀，但EpBYV可在茶毛蟲體內(nèi)復(fù)制并誘發(fā)體內(nèi)的RNAi抗病毒免疫反應(yīng)[15]。因此，研究EpBYV可為構(gòu)建基于RNA病毒的茶毛蟲綠色防控體系提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

茶毛蟲作為一種全國茶區(qū)均有分布且在部分茶區(qū)屢有暴發(fā)的害蟲，近年來對其研究主要集中在田間防控方面[20-21]。對茶毛蟲開展遺傳多樣性研究，可更全面地從分子水平了解其種群遺傳結(jié)構(gòu)，解析其生態(tài)適應(yīng)機制和成災(zāi)規(guī)律，為各茶區(qū)制定有效的防控策略提供基礎(chǔ)信息。此前，已有學(xué)者對茶小綠葉蟬[22]、茶網(wǎng)蝽[23]、茶棍薊馬[24]開展了相關(guān)研究。因此，本研究采集了我國四大茶區(qū)11個省份共15個地區(qū)茶園的茶毛蟲幼蟲樣本，擴增茶毛蟲的線粒體COI和ND5序列，以及EpBYV的RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）編碼基因序列，聯(lián)合分析茶毛蟲和EpBYV的種群遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)特征，探討茶毛蟲種群歷史動態(tài)，評估其近期在全國茶區(qū)的成災(zāi)風(fēng)險，明確EpBYV對茶毛蟲的感染率、遺傳變異和種群發(fā)展動態(tài)歷史，評估其未來用于生物防治的潛力。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗所用茶毛蟲幼蟲樣本于2020年6月至2023年9月采集自我國四大茶區(qū)（江南茶區(qū)、江北茶區(qū)、西南茶區(qū)、華南茶區(qū)）11個省份的15個茶園，具體信息如表1所示。

1.2 試驗方法

1.2.1 DNA、RNA提取及cDNA合成

取PBS緩沖液清洗后的茶毛蟲幼蟲，縱切后取半頭經(jīng)液氮速凍、研磨，使用血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒[天根生化科技（北京）有限公司]提取DNA，﹣20 ℃保存，用于茶毛蟲線粒體基因序列擴增；取另半頭茶毛蟲經(jīng)速凍研磨后采用TRIzol法提取總RNA，使用RQ1 RNase-Free DNase試劑盒（Promega）去除RNA樣品中的基因組DNA，再使用PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒（TAKARA）反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，﹣20 ℃保存，用于EpBYV的RdRp序列擴增。

1.2.2 PCR擴增及測序

茶毛蟲線粒體基因COI、ND5，以及EpBYV病毒中RdRp序列的PCR擴增引物如表2所示。使用Taq HS DNA聚合酶（TaKaRa）進行PCR擴增，總反應(yīng)體積為25 μL。擴增條件為95 ℃預(yù)變性3 min；95 ℃變性30 s，按表2中的退火溫度退火30 s，72 ℃延伸1 min，34

個循環(huán)；72 ℃終延伸10 min。擴增完成后取2 μL PCR產(chǎn)物進行1%的瓊脂糖凝膠電泳，檢測成功后將PCR產(chǎn)物送至北京六合華大基因有限責(zé)任公司進行雙向測序。測序得到的序列使用DNAMAN軟件拼接，序列翻譯后在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行BLAST比對，驗證序列的準確性。

1.2.3 數(shù)據(jù)整理與分析

利用DnaSP 6.12.03軟件[27-28]計算茶毛蟲不同地理種群的單倍型多樣性（Haplotype diversity，h）、核苷酸多樣性（Nucleotide diversity，π）等遺傳多樣性指標。基因流（Nm）依據(jù)公式Nm=（1－FST）/4FST計算[29]。在Arlequin 3.5.2.2軟件[30]中使用Tajima’s D[31]和Fu’s Fs[32]統(tǒng)計進行中性檢驗，并進行種群的分子遺傳變異方差分析（Analysis of molecular variance，AMOVA），計算種群對間的遺傳分化指數(shù)FST和誤配等。基于Kimura 2-Parameter模型使用MEGA 7.0.26軟件[33]計算種群間的遺傳距離。采用Network 10.2軟件[34]繪制單倍型之間的網(wǎng)絡(luò)進化圖（Median-joining network），單倍型的最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹使用PhyML3.0（www.atgc-montpellier.fr/phyml）構(gòu)建[35]。

2 結(jié)果與分析

2.1 序列變異和遺傳多樣性

本研究共采集到15個地理種群共148頭茶毛蟲幼蟲，均擴增獲得644 bp的COI序列和715 bp的ND5序列。將同一樣本的兩個序列片段分別合并，獲得148條長度為1 359 bp的序列，其中保守位點1 327個，變異位點32個，未發(fā)現(xiàn)堿基缺失或插入現(xiàn)象。在32個變異位點中自裔位點5個，簡約信息位點27個，均為兩堿基變異位點，共含有22個單倍型（表3），將M1中的COI和ND5序列上傳GenBank，獲得登錄號分別為PQ097955和PQ096005。遺傳多樣性分析顯示（表3），總?cè)后w的核苷酸多樣性指數(shù)為0.003 17，單倍型多樣性指數(shù)為0.880 68。15個地理種群中，永川、武隆、六盤水、無錫、恩施、杭州、桂林、清遠等地的8個種群不具有多態(tài)性位點，各項指數(shù)均為0，表明其種群內(nèi)部序列保守，遺傳多樣性極低；其余7個種群的核苷酸多樣性指數(shù)為0.000 34～0.001 96，單倍型多樣性指數(shù)為0.200 00～0.755 56，各種群間遺傳多樣性差異較為明顯，其中信陽和安康兩個種群的遺傳多樣性較高。

EpBYV的RdRp序列擴增結(jié)果顯示，除重慶城口10個樣本外，其他138個樣本均成功獲得488 bp的RdRp序列，擴增成功率為93.24%。獲得的138條RdRp序列中均無堿基缺失或插入現(xiàn)象，其中保守位點有402個，變異位點86個，約占全長的17.62%，無堿基缺失或插入現(xiàn)象。86個變異位點中有自裔位點49個，簡約信息位點37個，其中兩堿基變異位點82個，三堿基變異位點4個，形成單倍型47個（表3），將R1序列上傳GenBank獲得登錄號為PQ096006。遺傳多樣性參數(shù)顯示（表3），總?cè)后w的核苷酸多樣性指數(shù)（0.017 95）和單倍型多樣性指數(shù)（0.935 26）均大于前文中茶毛蟲遺傳多樣性的相應(yīng)指標。相對于茶毛蟲線粒體序列無突變位點的8個種群，EpBYV的RdRp序列僅在桂林和恩施種群中無突變位點，表明EpBYV種群內(nèi)部的遺傳多樣性較高。13個EpBYV有突變位點的種群中，核苷酸多樣性指數(shù)為0.000 41～0.018 67，單倍型多樣性指數(shù)為0.200 00～1.000 00，其中杭州和永川兩個種群的單倍型多樣性指數(shù)均為1.000 00，遺傳多樣性最高，對應(yīng)的每個樣本單獨成為1個單倍型。

2.2 單倍型及進化關(guān)系

在茶毛蟲線粒體基因序列的22個單倍型中，種群間共享的單倍型有3個，占比較少（13.64%），表明茶毛蟲線粒體基因序列在種群間的遺傳分化程度較高。共享單倍型中M7的出現(xiàn)頻率最高（44次），占所有個體的29.73%，其次是M1（11次）和M11（9次）。從種群來看，永川、武隆、六盤水、無錫、恩施、杭州、桂林、清遠等地的8個種群內(nèi)部均無突變位點，各自僅有1種單倍型，其中六盤水、恩施、桂林和清遠4個地區(qū)的種群共享單倍型M7，此外信陽種群有5個單倍型，安康種群4個，遺傳分化程度相對較大。單倍型的進化網(wǎng)絡(luò)圖顯示，大部分來自相同種群的單倍型聚在一起（開州、城口、安康、信陽、安慶）。進化網(wǎng)絡(luò)圖在結(jié)構(gòu)上呈現(xiàn)明顯的兩個分枝（圖1A），上部一枝有9個單倍型，包含永川、開州、城口、安康4個種群的38個樣本；下部一枝有13個單倍型，由其他11個種群110個樣本組成。安康在傳統(tǒng)茶區(qū)劃分中被分在江北茶區(qū)，但在地理位置上與上部一枝上的開州、城口共同位于秦巴山區(qū)，而武隆雖隸屬于重慶市，但在地理位置上與恩施、銅仁共同位于武陵山區(qū)，表明茶毛蟲線粒體基因序列的變異與種群的地理位置有一定的關(guān)系。采用最大似然法構(gòu)建22個單倍型的系統(tǒng)發(fā)育樹，顯示其分枝結(jié)構(gòu)與網(wǎng)絡(luò)進化圖相吻合，進化網(wǎng)絡(luò)圖中的上下兩枝在進化樹均形成單系群，并互為姊妹群（圖1B）。

不同種群EpBYV的RdRp序列的47個單倍型中有7個共享單倍型，占比較?。?4.89%）。共享單倍型中R13出現(xiàn)的頻率最高（25次），占所有個體的18.12%，其次是R30（15次）。種群方面，桂林種群僅有1個單倍型，其他種群的單倍型數(shù)在2～10個，其中杭州和永川種群均是1個樣本為1個單倍型，與之對應(yīng)的是兩個種群的茶毛蟲線粒體基因序列在種群內(nèi)部無突變位點，由此可見EpBYV的RdRp序列比茶毛蟲線粒體序列的突變速率更快，種群內(nèi)遺傳分化更大。RdRp序列的單倍型數(shù)量較大，相對于茶毛蟲線粒體序列單倍型的進化網(wǎng)絡(luò)圖，其進化網(wǎng)絡(luò)圖結(jié)構(gòu)更為復(fù)雜，難以通過地理種群明確劃分枝系。大部分來自相同種群的單倍型較好地聚在一起，但永川、開州、安慶、六盤水種群的單倍型在圖中分布距離較遠（圖1C），表明這4個種群內(nèi)部出現(xiàn)較大的遺傳分化。此外，地理種群間的進化關(guān)系也更為復(fù)雜，在圖1A中，茶毛蟲的武隆種群與重慶的其他3個種群的進化距離較遠，在圖1C中，EpBYV的永川、開州種群的部分單倍型與武隆種群距離較遠，但另一些單倍型與武隆種群聚在一起（R4、R5、R9、R10、R12、R15）。47個單倍型的最大似然法系統(tǒng)發(fā)育樹與網(wǎng)絡(luò)進化圖結(jié)構(gòu)相似，在進化圖上聚在一起的單倍型也以較高的支持率在進化樹上聚為一枝（圖1D）。

2.3 種群遺傳結(jié)構(gòu)分析

多個水平的AMOVA分析均顯示茶毛蟲存在顯著的遺傳分化（表4），兩級水平分析顯示茶毛蟲具有顯著的遺傳結(jié)構(gòu)（ΦST=0.871 18，P<0.001），其中87.12%的變異來自于種群之間，僅12.88%的變異來自于種群內(nèi)部。105個種群對間的遺傳分化指數(shù)FST值有99個達到顯著水平，數(shù)值為0.290～1.000（表5），支持茶毛蟲多數(shù)地理種群間存在顯著的遺傳分化，與之對應(yīng)的是多數(shù)種群對間基因流Nm水平較低（表5）。三級水平AMOVA分析將地理種群按傳統(tǒng)茶區(qū)（表1）分成4個組時，茶毛蟲不具有顯著的遺傳結(jié)構(gòu)（ΦCT=0.024 09，P>0.05），遺傳變異主要來自于組內(nèi)種群間，即各地理種群之間的差異；但根據(jù)進化網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)圖中上下兩枝分為2個組時，茶毛蟲存在顯著的遺傳結(jié)構(gòu)（ΦCT=0.421 23，P<0.01），茶毛蟲在兩個組之間顯著分化，組間變異占42.12%。對EpBYV二級水平AMOVA分析顯示其遺傳結(jié)構(gòu)顯著（ΦST=0.621 32，P<0.001），遺傳變異大部分來自于種群之間（62.13%），種群內(nèi)部的遺傳變異較?。?7.87%），但仍大于茶毛蟲各種群內(nèi)部的遺傳變異占比（12.88%）。與茶毛蟲類似，EpBYV種群對間的遺傳分化指數(shù)FST值大多數(shù)達到了顯著水平（表6），Nm值大多數(shù)小于1（表6），支持EpBYV的地理種群間具有顯著的遺傳分化，基因交流較少。三級水平AMOVA分析顯示，EpBYV無顯著的遺傳結(jié)構(gòu)，兩種分組下ΦCT的P值均大于0.05，組間的遺傳變異占比均為負值。種群間遺傳距離與地理距離的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，茶毛蟲（R2=0.010，P=0.305）和EpBYV（R2=0.012，P=0.296）的遺傳距離與地理距離的相關(guān)性不顯著（圖2），且多數(shù)EpBYV種群間的遺傳距離較茶毛蟲種群間更大。進一步計算發(fā)現(xiàn)，EpBYV種群間的遺傳距離與茶毛蟲對應(yīng)種群

間遺傳距離的相關(guān)性不顯著（R2=0.006，P=0.461），表明EpBYV進化方向不受茶毛蟲的影響。

2.4 種群歷史動態(tài)分析

采用中性檢驗和誤配分析進行茶毛蟲和EpBYV歷史動態(tài)分析。茶毛蟲7個有多態(tài)性位點的種群中，城口和寧德種群的Tajima’s D值顯著小于0，可能是種群擴張引起種群偏離了遺傳平衡狀態(tài)，但Fu’s Fs值未達到顯著水平；其他種群的中性檢驗值均不顯著，說明群體處于較穩(wěn)定狀態(tài)；總?cè)后w的中性檢驗雖均為負值，但未達到顯著水平（表3）。茶毛蟲總?cè)后w的誤配分布表現(xiàn)為單峰（圖3A），且誤配分布統(tǒng)計參數(shù)粗糙度指數(shù)（Raggedness index，rg）為0.036 97，期望與觀測錯配分布之間的平方和（SSD）為0.013 21，兩個值均較小，且未達到顯著水平，推測我國茶毛蟲群體可能經(jīng)歷了較弱的突然增長過程。EpBYV地理種群的中性檢驗顯示，六盤水種群的Tajima’s D值和Fu’s Fs值均顯著小于0，武隆、安慶種群的Tajima’s D值和杭州種群的Fu’s Fs值均顯著小于0，推測這4個種群可能經(jīng)歷了不同程度擴張。EpBYV總?cè)后w的Tajima’s D值和Fu’s Fs值均顯著小于0，其中Fu’s Fs值達到了極顯著水平，且誤配分布圖表現(xiàn)為明顯的單峰（圖3B），rg值為0.020 78（P=0.01），SSD值為0.011 51（P=0.07），表明EpBYV可能經(jīng)歷了突然增長過程。

3 討論

本研究采集并提取了茶毛蟲的DNA和RNA，以此為模板分別擴增茶毛蟲的線粒體COI、ND5和EpBYV的RdRp編碼序列，其中茶毛蟲線粒體兩個基因的擴增及比對成功率均為100%，表明所采集樣本均為茶毛蟲；而EpBYV的RdRp序列擴增成功率為93.24%，在城口種群10個樣本中未能成功擴增，原因可能是茶毛蟲城口種群未感染EpBYV或體內(nèi)病毒量極低。因此，148個茶毛蟲樣本的EpBYV感染率大于或等于93.24%，表明該病毒廣泛分布于茶毛蟲的田間種群中。

基于線粒體COI和ND5合并序列分析茶毛蟲的種群遺傳結(jié)構(gòu)，二級水平的AMOVA分析結(jié)果和遺傳分化指數(shù)ΦST值均支持茶毛蟲的遺

傳變異主要來自于地理種群之間，種群之間遺傳分化極顯著。三級水平AMOVA分析顯示，我國傳統(tǒng)茶區(qū)劃分不能指示茶毛蟲地理種群間的遺傳分化程度，參考進化網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)圖能較為正確地指示種群間的分化程度。將該分組置于我國地勢中可以發(fā)現(xiàn)，圖1A中上部一枝的4個地理種群（永川、開州、城口、安康）位于我國地勢的第二階梯，而下部一枝的地理種群均位于第三階梯及第二、三階梯的分界上，推測茶毛蟲在兩個區(qū)域的顯著分化可能是兩個階梯海拔和氣候差異引起的。突變、自然選擇、基因流和隨機遺傳漂變（Random genetic drift）被公認為是物種進化的四大動力[29]。其中，突變、自然選擇和隨機遺傳漂變加大種群間的遺傳分化，基因流則可以阻止種群間的分化，因此茶毛蟲種群間低水平的基因流與高水平的遺傳分化相吻合，由此推測茶毛蟲擴散能力不強。同樣不具備長距離傳播能力的茶小綠葉蟬、茶網(wǎng)蝽和茶棍薊馬均顯示出較高的遺傳分化[22-24]。地理種群間的顯著遺傳分化也可能是造成不同地理種群茶毛蟲對同株EpNPV敏感性不同的原因。基于RdRp編碼序列分析EpBYV的種群遺傳結(jié)構(gòu)，ΦST值顯示EpBYV種群之間遺傳分化顯著，二級水平AMOVA分析支持遺傳變異主要來自于地理種群之間，但種群內(nèi)部的遺傳變異占比（37.87%）明顯大于茶毛蟲種群內(nèi)部的遺傳變異占比（12.88%），遺傳多樣性參數(shù)（h=0.935 26、π=0.017 95）也支持EpBYV的種群具有更大的遺傳變異（表3），表明EpBYV與茶毛蟲的進化差異明顯，這與茶毛蟲成蟲飛翔能力較弱，對病毒水平傳播不足相關(guān)。病毒毒株的遺傳分化可能影響其對宿主的毒力水平[8]，EpBYV的顯著遺傳分化和快速突變有利于進化出對茶毛蟲產(chǎn)生致病力的毒株。

本研究的種群歷史動態(tài)分析采用中性檢驗和誤配分析相結(jié)合，當(dāng)中性檢驗Tajima’s D和Fu’s Fs值均為顯著負值時，說明所研究的種群可能經(jīng)歷了突然擴張事件[32]，誤配分布表現(xiàn)為單峰表示種群在近期出現(xiàn)過群體擴張事件或持續(xù)增長模式[36-37]。茶毛蟲地理種群中，城口和寧德種群的Tajima’s D值顯著小于0，推測近期經(jīng)歷了群體擴張事件。茶毛蟲總?cè)后w的中性檢驗均為不顯著的負值，誤配分布表現(xiàn)為單峰，推測茶毛蟲總?cè)后w可能經(jīng)歷了較弱的群體擴張。EpBYV總?cè)后w的Tajima’s D值和Fu’s Fs值均顯著小于0，其中Fu’s Fs值達到了極顯著水平，誤配分布圖為明顯的單峰，表明EpBYV群體可能經(jīng)歷了突然增長過程，近似星狀分布的單倍型進化網(wǎng)絡(luò)圖也佐證EpBYV在近期經(jīng)歷了種群有效數(shù)量突然增長的過程。此外，RdRp序列具有較高水平的單倍型多樣性（0.935 26）和相對較低的核苷酸多樣性（0.017 95），也支持EpBYV種群經(jīng)歷了種群擴張事件[38]。EpBYV群體擴張事件主要出現(xiàn)在六盤水、武隆、安慶、杭州4個地理種群中。

綜上所述，采自我國四大茶區(qū)15個地區(qū)的148個樣本均確認為茶毛蟲，且其群體相對穩(wěn)定，近期可能僅經(jīng)歷了較弱的群體擴張事件，僅城口和寧德種群經(jīng)歷了較明顯的群體擴張，表明茶毛蟲在部分茶區(qū)的適宜環(huán)境條件下也具有潛在暴發(fā)的風(fēng)險；在茶毛蟲總?cè)后w相對穩(wěn)定的背景下，EpBYV種群經(jīng)歷了明顯的種群擴張事件，說明EpBYV即使在經(jīng)歷種群萎縮后，仍可以迅速由少量個體建立龐大的種群。同時，EpBYV的種群擴張將增加病毒在復(fù)制時的突變機率，這有利于進化出對茶毛蟲產(chǎn)生致病力的毒株。EpBYV在茶毛蟲群體中的感染率和種群擴張能力均較高，用于茶毛蟲生物防治具有較好的潛力。

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