茶樹一種新枝條枯萎病病原菌鑒定及防治藥劑篩選

摘要：在浙江省瑞安市茶園種植的嘉茗1號茶樹上，夏秋季大面積發(fā)生一種未見報道的枝條枯萎病，發(fā)病枝條出現(xiàn)褐色不規(guī)則病斑，病斑可擴大蔓延至芽葉，造成茶芽枯萎，葉片卷曲皺縮，進而整個枝條枯萎死亡。利用組織分離法從發(fā)病枝條上分離得到1株真菌，結(jié)合菌株的形態(tài)特征以及ITS、TUB2和TEF1-α序列構(gòu)建的多基因系統(tǒng)發(fā)育樹分析，鑒定該菌株為梭孢葡萄座腔菌（Botryosphaeria fusispora）。室內(nèi)致病力測試表明，B. fusispora通過傷口侵染茶樹枝條造成枯萎病的發(fā)生。以上結(jié)果表明，作為新紀錄種，B. fusispora是引起茶樹該新病害發(fā)生的病原菌。采用室內(nèi)菌絲生長速率抑制法測定了3種殺菌劑（百菌清、甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯）對病原菌的抑制效果。結(jié)果表明，甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯對B. fusispora均有較強的毒力，EC50值分別為1.91 μg·mL-1和2.25 μg·mL-1。

關鍵詞：茶樹；枝條枯萎??；葡萄座腔菌屬；室內(nèi)毒力測定

中圖分類號：S571.1；R435.711 文獻標識碼：A 文章編號：1000-369X（2024）05-807-09

Identification of the Pathogen Causing New Twig Wilting on Tea Plants and Screening of Control Chemicals

WANG Juan1， TU Yiyi1， Lü Wuyun1， CHEN Yijia1， LI Shipu2， WANG Yuchun1*， CHEN Yanan1*

1. College of Tea Science and Tea Culture， Zhejiang A & F University， Hangzhou 311300， China;

2. Zhejiang Wanfu Tea Industry Development Co. Ltd.， Wenzhou 325200， China

Abstract： During summer and autumn， serious new twig wilting occurs on a large scale in ‘Jiaming No. 1’ tea gardens of Ruian City， Wenzhou， Zhejiang Province， China. The disease initially appears as irregular brown spots on the twigs， which later spread to shoots and leaves， causing the tea shoots to wilt and the leaves to curl and shrink， and eventually the whole branch to die. In this study， a strain was isolated and purified using the tissue isolation method. Combining the morphological characteristics with the phylogenetic analyses based on the sequenyx68PXNA42hSJfz8Am0gaQ==ces of the internal transcribed spacer regions （ITS）， β-tubulin （TUB2）， and the translation elongation factor1 alpha （TEF1-α）， the isolated strain was identified as Botryosphaeria fusispora. Laboratory pathogenicity tests show that B. fusispora was the pathogen causing the twig wilting disease present on ‘Jiaming No. 1’. These results indicate that B. fusispora can be a new record species causing twig wilting on tea plants. In addition， mycelial growth inhibition tests were conducted to examine the sensitivity of the pathogen to three commercial fungicides， including chlorothalonil， thiophanate-methyl and pyraclostrobin. Among the tested fungicides， thiophanate-methyl was found to be the most effective in suppressing the radial growth of the strain， with an EC50 of 1.91 μg·mL-1， followed by pyraclostrobin， with an EC50 of 2.25 μg·mL-1.

Keywords： tea plants， twig wilting， Botryosphaeria spp.， indoor toxicity test

茶樹[Camellia sinensis （L.） O. Kuntze]屬于山茶科山茶屬植物[1]，是我國重要的經(jīng)濟作物。2023年我國干毛茶總產(chǎn)量達333.95萬t，同比增長4.98%[2]。我國茶園主要分布在氣候溫暖、雨量充沛的地區(qū)，這為病害的發(fā)生提供了有利環(huán)境。據(jù)統(tǒng)計，目前我國茶樹病害約有140種，包括茶炭疽病、茶餅病、茶云紋葉枯病等葉部病害；茶枝梢黑點病、茶黑痣病、茶粗皮病等枝條病害；茶根癌病、茶紅根腐病、茶苗白絹病等根部病害[3-5]。近年來，由于茶園種植面積不斷擴大、茶樹品種更替以及氣候變暖和濕度增高等因素，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)一些新的茶樹病害。Jiang等[6]在安徽茶園中首次發(fā)現(xiàn)Muyocopron laterale能夠引起茶樹葉枯??；Chen等[7]對發(fā)生于重慶二圣地區(qū)的茶葉斑病樣本進行分離，并結(jié)合形態(tài)特征和系統(tǒng)發(fā)育分析，鑒定病原菌為附球菌屬真菌（Epicoccum layuense）；Yang等[8]在湖北省恩施首次發(fā)現(xiàn)灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）在中國引起茶樹灰霉病。2023年秋季，筆者在浙江省瑞安市高樓鎮(zhèn)茶園嘉茗1號枝條上發(fā)現(xiàn)一種從未報道過的新病害，該病害多發(fā)于未木質(zhì)化的枝條嫩梢，嚴重時蔓延至茶芽和葉片上，造成葉片卷曲皺縮和枝條枯萎，對茶葉產(chǎn)量和品質(zhì)造成一定影響。然而，該病害的病原菌尚不清楚。

葡萄座腔菌科（Botryosphaeriaceae）真菌分布廣泛，能夠侵染多種寄主植物造成枝干腐爛、潰瘍、流膠和枯死等癥狀，嚴重時甚至會導致植株死亡[9]。該科真菌最早由Theissen等[10]作為假球殼科（Pseudosphaeriaceae）的一個亞科引入，之后，Schoch等[11]通過構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹，提出了一個新的葡萄座腔菌目（Botr-yosphaeriales），且只容納葡萄座腔菌科這一單獨的科。Slippers等[12]根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育分析發(fā)現(xiàn)葡萄座腔菌科共包含17個屬（Botryosphaeria spp.），之后Phillips等[13]詳細描述了各個屬的形態(tài)特征并作為分類鑒定依據(jù)。根據(jù)Rathnayaka等[14]報道，早在1983年就有研究發(fā)現(xiàn)葡萄座腔菌科真菌侵染山茶屬（Camellia spp.）植物。2016年，Jayawardena等[15]首次從我國福建省漳州市茶樹壞死葉片上分離并鑒定了兩株葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）；張永樂等[16]從山東日照東港區(qū)茶區(qū)茶樹葉部發(fā)現(xiàn)一種茶褐枯病，結(jié)合形態(tài)學、多基因序列分析及柯赫氏法則等，驗證其病原菌為圍小叢殼菌山茶?；停℅lomerella cingulata f. sp. camelliae）和B. dothidea。2020年，李力等[17]收集福建省武夷山地區(qū)茶園茶樹葉斑病病葉樣品進行分離培養(yǎng)，根據(jù)多位點序列和聚類分析鑒定其病原真菌為B. dothidea。目前，Botryosphaeria屬真菌主要引起茶樹葉部病害，尚未報道可引起枝條發(fā)病。因此，本研究在新病害癥狀的基礎上，對病原菌進行分離培養(yǎng)、鑒定、致病性測定，以及藥劑敏感性檢測，明確該病害病原菌并提出候選防控藥劑，為未來該茶樹枝條病害的科學防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2023年9月27日，未木質(zhì)化的發(fā)病枝條嫩梢采自浙江省溫州市瑞安市高樓鎮(zhèn)茶園（27°45′ N，120°17′ E），樹齡為20 a的嘉茗1號（Jiaming No. 1，JM1）茶樹品種。室內(nèi)致病性測試茶樹品種為龍井43（Longjing43，LJ43）、中茶108（Zhongcha108，ZC108）、中茶302（Zhongcha302，ZC302）及JM1。

1.2 試驗方法

1.2.1 病原菌的分離與純化

采用常規(guī)組織分離法分離病原菌[18]。從發(fā)病枝條病健交界處切取組織接種至馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato dextrose agar，PDA）培養(yǎng)基上，放入25 ℃培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)3 d。長出菌落后，挑取不同形態(tài)菌落邊緣的菌絲轉(zhuǎn)移到新的PDA平板上進行純化，獲得菌落形態(tài)一致的菌株。將分離純化的菌株轉(zhuǎn)移至PDA斜面培養(yǎng)后于4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 形態(tài)學觀察

將各菌株在25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)3 d后，利用滅菌的打孔器從菌落邊緣打取直徑為5 mm的菌餅，分別接種至新的PDA及2%麥芽汁瓊脂（Malt extract agar，MEA）培養(yǎng)基平板中央，25 ℃避光培養(yǎng)，14 d后觀察菌落形態(tài)特征，并采用十字交叉法測量菌落直徑。菌落生長速率以測量菌落直徑除以培養(yǎng)天數(shù)表示。每個試驗設置5個生物學重復，并獨立重復5次。菌落生長速率測定試驗重復5次。將各菌株接種至含茶樹幼嫩枝條的2%水瓊脂（Water agar，WA）培養(yǎng)基上，25 ℃避光培養(yǎng)4周，于SOPTOP-

CX40RFL顯微鏡下觀察分生孢子形態(tài)，并拍照記錄。

1.2.3 DNA提取及PCR擴增和測序

將保存在4 ℃冰箱中的菌株接種到PDA平板上，25 ℃黑暗條件下培養(yǎng)7 d，用DEB法[19]少量快速提取菌絲基因組DNA，于﹣20 ℃冰箱保存。

選取核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spacer，ITS）、β-微管蛋白2（β-tubulin，TUB2）和翻譯延伸因子（Translation elongation factor 1-alpha，TEF1-α）3個DNA片段進行PCR擴增，所用引物及序列[20]見表1。

PCR反應體系（25 μL）：12 μL 2×Taq Master Mix，1 μL 10 μmol·L-1上游引物，1 μL 10 μmol·L-1下游引物，10 μL ddH2O和1 μL基因組DNA。PCR反應程序：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，32個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。取7 μL PCR產(chǎn)物采用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測，將目的條帶樣品送至杭州有康生物科技有限公司進行純化測序。

1.2.4 系統(tǒng)發(fā)育分析

測序獲得的基因序列在NCBI網(wǎng)站（www.ncbi.nlm.nih.gov）進行BLAST比對。利用MAFFT v. 7和MEGA v. 5軟件進行多序列比對、拼接和手動矯正[21-22]。利用最大似然法在FastTree軟件上構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[23]。

1.2.5 致病性測定

以LJ43、JM1、ZC302和ZC108的健康新生一芽四葉枝條為材料，進行表面消毒后，挑取PDA平板上培養(yǎng)7 d的菌落邊緣菌餅（直徑為5 mm），接種于茶樹枝條。接種方式采用有傷接種和無傷接種兩種，每個菌株設置3個重復，對照組用無菌瓊脂塊處理。接種樣品置于人工氣候培養(yǎng)箱中25 ℃黑暗保濕培養(yǎng)3 d，觀察發(fā)病情況。若觀察到相似病斑，則對其重新分離并確認分離物與接種體是否為同一菌株，以完成柯赫氏法則。致病性試驗重復2次。

1.2.6 殺菌劑敏感性測定

采用菌絲生長速率抑制法測定病原菌對3種殺菌劑的敏感性，包括75%可濕性粉劑百菌清、25%懸浮劑吡唑醚菌酯和70%可濕性粉劑甲基硫菌靈。在PDA培養(yǎng)基中分別加入不同濃度的殺菌劑，其中百菌清的質(zhì)量濃度梯度設置為0.1、1、10、50、100、500、1 000 μg·mL-1；甲基硫菌靈的質(zhì)量濃度梯度設置為0.01、0.1、1、2、5、10、20 μg·mL-1；吡唑醚菌酯濃度梯度為0.01、0.1、1、2、5、10、20 μg·mL-1。將各菌株接種至殺菌劑不同濃度梯度的PDA平板（Treated，T）以及不含有殺菌劑的PDA平板（Control，C）上，25 ℃黑暗培養(yǎng)3 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，按照以下公式計算抑菌率（Inhibition，I）：

I=（C－T）/（C－0.5）×100%

其中，I為菌絲生長抑菌率（%），C為對照組菌落直徑平均值（mm），T為試驗組菌落直徑平均值（mm）。使用SPSS軟件求取毒力回歸方程并計算得出半數(shù)效應濃度（Median effect concentration，EC50）值。每個濃度梯度試驗設置3個重復，并獨立重復3次。

2 結(jié)果與分析

2.1 病害癥狀觀察

該病害多發(fā)于未木質(zhì)化的枝條嫩梢（圖1），

發(fā)病部位初期呈現(xiàn)褐色不規(guī)則病斑（圖1a），隨后病斑不斷擴大，可蔓延至發(fā)病枝條的茶芽和葉片上（圖1b～1d），從葉片基部擴散至整個葉片，造成葉片卷曲皺縮，最終形成大面積枯萎組織（圖1e～1f）。此外，在濕度較高時，病害枝條表面出現(xiàn)白色霉層（圖1g）。

2.2 病原菌形態(tài)學特征描述

通過對發(fā)病枝條進行組織分離，純化后獲得菌株YCW2213。該菌株在培養(yǎng)基上的菌落蓬松，邊緣不規(guī)則，氣生菌絲最初為白色，培養(yǎng)10～14 d后顏色逐漸變深直至深灰色，并團成絮狀，背面呈暗棕色（圖2a～2d）。普通光學顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)生長后期菌絲可膨大呈結(jié)節(jié)狀

（圖2e）。在MEA平板上生長速率為10 mm·d-1，在PDA平板上生長速率為15 mm·d-1。PDA和MEA平板上未觀察到分生孢子，但在WA平板培養(yǎng)4周后可觀察到極少量分生孢子。分生孢子透明，無分隔，呈橢圓形，兩端尖（圖2f）。

2.3 病原菌系統(tǒng)發(fā)育學分析

對測序獲得的YCW2213菌株的ITS、TUB2和TEF1-α序列，首先在NCBI上進行BLAST，根據(jù)BLAST結(jié)果下載相近種的序列作為參考菌株，以Cophinforma atrovirens為外類群構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明，YCW2213與B. fusispora聚為1枝，且自展值達到94%（圖3）。結(jié)合其形態(tài)學特征，最終將病原真菌YCW2213

鑒定為梭孢葡萄座腔菌（B. fusispora）。

2.4 致病性分析

將YCW2213菌株分別接種至LJ43、JM1、ZC302和ZC108新生健康枝條上，進行室內(nèi)致病性試驗。結(jié)果顯示，有傷接種YCW2213處理3 d后，茶樹枝條上均出現(xiàn)褐色病斑，且隨著侵染時間延長，病斑不斷擴大（圖4）。此外，相較于其他品種，LJ43枝條病斑更大，且病斑表面出現(xiàn)白色霉層（圖4d），發(fā)病癥狀與田間發(fā)病情況一致。

對發(fā)病枝條進行再分離，獲得的菌株在PDA培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)特征和2.2章節(jié)中B. fusispora的一致，而對照處理的枝梢未能分離

獲得與B. fusispora一致的菌落。再分離菌株的ITS、TUB2和TEF1-α序列也與B. fusispora一致。B. fusispora能夠引起健康茶樹枝條發(fā)病，且在發(fā)病枝條病組織上能夠再分離到該菌，以上結(jié)果表明，此病害是由B. fusispora通過傷口侵染所致。

2.5 殺菌劑敏感性測定

為了篩選田間防治該病害的藥劑，本研究測試了B. fusispora菌株YzccGPr9+dnfAGH4bKvqL1g==CW2213對75%百菌清、70%甲基硫菌靈和25%吡唑醚菌酯等3種常用殺菌劑的敏感性。結(jié)果顯示，YCW2213對5 μg·mL-1以上的甲基硫菌靈最敏感（圖5）。通過測量處理組和對照組的菌落生長直徑，得出3種殺菌劑的毒力回歸方程及EC50值（表2）。3種殺菌劑的EC50值由小到大的順序為70%甲基硫菌靈（1.91 μg·mL-1）、25%吡唑醚菌酯（2.25 μg·mL-1）、75%百菌清（31.26 μg·mL-1）。結(jié)果表明，70%甲基硫菌靈對B. fusispora菌株YCW2213的抑菌效果最好，其次是25%吡唑醚菌酯，抑菌效果較弱的是75%百菌清。

3 討論

在浙江省瑞安市高樓鎮(zhèn)茶園，從大面積出現(xiàn)的茶樹嘉茗1號枯萎壞死枝條上分離得到1株真菌，其菌落形態(tài)不規(guī)則，且隨著生長菌落從白色逐漸變深至深灰色（圖2a～2d），分生孢子單孢、透明、無隔、橢圓形、兩端尖（圖2f），這與前人報道的B. fusispora形態(tài)特征一

致[24-25]，結(jié)合構(gòu)建的多基因系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果（圖3），明確該菌株為B. fusispora。我們嘗試在PDA或MEA培養(yǎng)基上誘導YCW2213產(chǎn)孢均未成功，而利用含茶樹幼嫩枝條的2%水瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)，可誘導其產(chǎn)孢，但產(chǎn)孢數(shù)量仍較少，這與葡萄座腔菌屬真菌（Botryosphaeria spp.）在自然及人工培育條件下不易產(chǎn)生無性或有性生殖結(jié)構(gòu)有關[26]。由于通過多種方法誘導均無法產(chǎn)生大量孢子，故通過菌餅接種進行室內(nèi)致病性測試，研究結(jié)果表明，該真菌可造成與田間表型一致的病狀，且再分離的菌株與侵染菌株一致，說明B. fusispora是本次茶樹新病害的病原菌。Botryosphaeria屬真菌是世界范圍內(nèi)最廣泛、最重要的樹木枝干枯死病病原菌之一[27]。B. fusispora最早由Liu等[28]在泰國清萊黎敦山Entada spp.的干樹皮中分離獲得。隨后Li等[27]發(fā)現(xiàn)B. fusispora在中國亞熱帶和熱帶地區(qū)種植的桉樹上廣泛分布，侵染枝干引起莖潰瘍病、莖點枯病和枝枯病。此外，有報道從廣東、廣西、海南、福建、云南和四川等地的荔枝病果[26]、獼猴桃病果[29]、藍莓腐爛莖[30]以及香榧病果[31]中分離到B. fusispora，這表明B. fusispora不僅寄主廣泛還能夠在較大溫度范圍內(nèi)生存?？梢?，B. fusispora可能并非本研究新發(fā)現(xiàn)茶樹病害的唯一病原菌，且僅在瑞安市高樓鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)該病害的暴發(fā)，其他地區(qū)茶園是否已經(jīng)出現(xiàn)，亦或茶樹其他組織是否已經(jīng)受到危害，需要進一步取樣分析，提早做好風險控制。

化學防治仍是當前茶樹病害的主要防治措施，室內(nèi)毒力測定可為大田防治提供一定的理論基礎。研究發(fā)現(xiàn)與B. fusispora同屬的B. dothidea對百菌清[32-33]、甲基硫菌靈[33-34]、吡唑醚菌酯[35]均具有敏感性。因此，本研究采用菌絲生長速率抑制法分析測定了茶樹枯萎病菌B. fusispora對這3種殺菌劑的敏感性。結(jié)果表明，75%百菌清、70%甲基硫菌靈和25%吡唑醚菌酯對B. fusispora均有毒力，EC50分別為31.26、1.91 μg·mL-1和2.25 μg·mL-1，其中70%甲基硫菌靈抑制效果最好，其次為25%吡唑醚菌酯（表2），這與胡沖等[33]和李誠等[34]的研究結(jié)果基本一致。

綜上所述，本研究首次發(fā)現(xiàn)B. fusispora危害茶樹枝條，引起茶樹枝條枯萎?。煌ㄟ^室內(nèi)毒力測定試驗發(fā)現(xiàn)甲基硫菌靈和吡唑醚菌酯對B. fusispora的抑菌效果較好，可用于田間藥效試驗研究。本研究結(jié)果為預防和控制該茶樹枝條枯萎病奠定了理論基礎。

參考文獻

[1] 馬建強， 姚明哲， 陳亮. 茶樹種質(zhì)資源研究進展[J]. 茶葉科學， 2015， 35（1）： 11-16.

Ma J Q， Yao M Z， Chen L. Research progress on germ-plasms of tea plant （Camellia sinensis） [J]. Journal of Tea Science， 2015， 35（1）： 11-16.

[2] 梅宇， 梁曉. 2023年我國茶葉產(chǎn)銷及進出口形勢分析[J]. 中國茶葉， 2024， 46（4）： 18-26.

Mei Y， Liang X. Analysis of China's tea production， sales， import and export situation in 2023 [J]. China Tea， 2024， 46（4）： 18-26.

[3] 徐云， 梅紅， 林莉， 等. 茶樹病害診斷與防治專家系統(tǒng)研制[J]. 農(nóng)業(yè)系統(tǒng)科學與綜合研究， 2003（2）： 93-96， 100.

Xu Y， Mei H， Lin L， et al. The study and exploitation of diagnosed and controlled tea disease's expert system [J]. System Sciences and Comprehensive Studies in Agriculture， 2003（2）： 93-96， 100.

[4] 陳宗懋， 陳雪芬. 世界茶樹病原名錄（續(xù)）[J]. 茶葉科學， 1989， 29（1）： 73-88.

Chen Z M， Chen X F. A world list of pathogens reported on tea plant [J]. Journal of Tea Science， 1989， 29（1）： 73-88.

[5] 陳雪芬. 我國茶樹病害的發(fā)生趨勢與綠色防控[J]. 中國茶葉， 2022， 44（6）： 7-14.

Chen X F. The occurrence trend and green control of tea diseases in China [J]. China Tea， 2022， 44（6）： 7-14.

[6] Jiang H， Zhang M， Zhou Y， et al. First report of Muyocopron laterale causing a new leaf disease of Camellia sinensis in China [J]. Beverage Plant Research， 2022， 2（1）： 1-4. doi：10. 48130/bpr-2022-0010.

[7] Chen Y J， Wan Y H， Zou L J， et al. First report of leaf spot disease caused by Epicoccum layuense on Camellia sinensis in Chongqing， China [J]. Plant Disease， 2020， 104（7）： 2029. doi： 10.1094/PDIS-09-19-1906-PDN.

[8] Yang D， Yao J， Wang B， et al. First report of Botrytis cinerea causing gray mold on tea （Camellia sinensis） in China [J]. Plant Disease， 2024， 108（1）： 203. doi： 10.1094/PDIS-01-23-

0022-PDN.

[9] López-Mora. Etiology of branch dieback and shoot blight of English Walnut caused by Botryosphaeriaceae and Diaporthe species in Southern Spain [J]. Plant Disease， 2020， 104（2）： 533-550.

[10] Theissen F， Sydow H. Vorentwürfe zu den Pseudosphaeriales [J]. Annales Mycologici， 1918， 16（1/2）： 1-34.

[11] Schoch C L， Shoemaker R A， Seifert K A， et al. A multigene phylogeny of the Dothideomycetes using four nuclear loci [J]. Mycologia， 2006， 98（6）： 1041-1052.

[12] Slippers B， Boissin E， Phillips A， et al. Phylogenetic lineages in the Botryosphaeriales： a systematic and evolutionary framework [J]. Studies in Mycology， 2013， 76（1）： 31-49.

[13] Phillips A J， Alves A， Abdollahzadeh J， et al. The Botryosphaeriaceae： genera and species known from culture [J]. Studies in Mycology， 2013， 76（1）： 51-167.

[14] Rathnayaka A R， Chethana K W T， Phillips A J， et al. First report of Botryosphaeriaceae species on Camellia sinensis from Taiwan with a global checklist of Botryosphaeriaceae species on this host [J]. Chiang Mai Journal of Science， 2021， 48（5）： 1199-1223.

[15] Jayawardena R S， Li X H， Xu W， et al. First report of Botryosphaeria dothidea causing leaf necrosis of Camellia sinensis in Fujian Province， China [J]. Plant Disease， 2016， 100（4）： 854-854.

[16] 張永樂， 劉會香， 許永玉， 等. 圍小叢殼菌山茶?；团c葡萄座腔菌復合侵染引致茶褐枯病[J]. 茶葉科學， 2018， 38（1）： 87-93.

Zhang Y L， Liu H X， Xu Y Y， et al. The tea brown blight disease caused by co-infection of Glomerella cingulata f. sp. camelliae and Botryosphaeria dothidea [J]. Journal of Tea Science， 2018， 38（1）： 87-93.

[17] 李力， 張渤， 范俐， 等. 侵染茶樹的葡萄座腔菌分離鑒定及其拮抗菌篩選[J]. 寧德師范學院學報（自然科學版）， 2023， 35（1）： 75-80.

Li L， Zhang B， Fan L， et al. Isolation， identification and antagonistic bacterium screening of a fungal pathogen Botryosphaeria dothidea isolate infecting tea plant leaves [J]. Journal of Ningde Normal University （Natural Science）， 2023， 35（1）： 75-80.

[18] Cai L， Hyde K D， Taylor P W J， et al. A polyphasic approach for studying Colletotrichum [J]. Fungal Diversity， 2009， 39（1）： 183-204.

[19] 呂務云. 禾谷鐮刀菌細胞自噬途徑相關基因的功能分析 [D]. 杭州： 浙江大學， 2019.

Lü W Y. Functional analysis of autophagy-related genes in Fusarium graminearum [D]. Hangzhou： Zhejiang University， 2019.

[20] Yukako H， Yuho A， Atsuko S， et al. Taxonomical study of noteworthy species of Botryosphaeria in Japan [J]. Mycobiology， 2021， 49（2）： 122-132.

[21] Katoh K， Standley D M. MAFFT multiple sequence alignment software version 7： improvements in performance and usability [J]. Molecular Biology and Evolution， 2013， 30（4）： 772-780.

[22] Tamura K， Peterson D， Peterson N， et al. MEGA5： molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood， evolutionary distance， and maximum parsimony methods [J]. Molecular Biology and Evolution， 2011， 28（10）： 2731-2739.

[23] Minh B Q， Schmidt H A， Chernomor O， et al. Corrigendum to： IQ-TREE 2： new models and efficient methods for phylogenetic inference in the genomic era [J]. Molecular Biology and Evolution， 2020， 37（5）： 1530-1534.

[24] Li G Q， Liu F F， Li J Q， et al. Botryosphaeriaceae from Eucalyptus plantations and adjacent plants in China [J]. Persoonia， 2018， 40（1）： 63-95.

[25] Crous P W， Slippers B， Wingfield M J， et al. Phylogenetic lineages in the Botryosphaeriaceae [J]. Studies in Mycology， 2006， 55（1）： 235-253.

[26] 凌金鋒. 荔枝病果相關的四屬菌物鑒定及分子系統(tǒng)發(fā)育分析 [D]. 廣州： 華南農(nóng)業(yè)大學， 2019.

Ling J F. Identification and phylogenetic analysis of four fungal genera isolates associated with diseased litchi fruits in China [D]. Guangzhou： South China Agricultural University， 2019.

[27] Li G Q， Slippers B， Wingfield M J， et al. Variation in Botryosphaeriaceae from Eucalyptus plantations in Yunnan Province in southwestern China across a climatic gradient [J]. IMA Fungus， 2020， 11（22）： 1-49. doi： 10. 1186/s43008-020-00043-x.

[28] Liu J K， Phookamsak R， Doilom M， et al. Towards a natural classification of Botryosphaeriales [J]. Fungal Diversity， 2012， 57（1）： 149-210.

[29] 劉平平， 莫權輝， 葉開玉， 等. 廣西獼猴桃果實病害病原菌分離與鑒定[J]. 中國南方果樹， 2023， 52（4）： 92-99.

Liu P P， Mo Q H， Ye K Y， et al. lsolation and identification of fruit diseases pathogens of kiwifruit in Guangxi [J]. South China Fruits， 2023， 52（4）： 92-99.

[30] 褚睿天， 豆志鵬， 賀偉， 等. 引起藍莓莖潰瘍病的葡萄座腔菌屬Botryosphaeria二新種[J]. 菌物學報， 2021， 40（3）： 473-486.

Chu R T， Dou Z P， He W， et al. Two novel species of Botryosphaerla causing stem canker of blueberries from China [J]. Mycosystema， 2021， 40（3）： 473-486.

[31] 葉碧歡， 沈建軍， 李海波， 等. 植物提取物對香榧病原真菌的抑菌活性研究[J]. 中國森林病蟲， 2023， 42（1）： 1-5.

Ye B H， Shen J J， Li H B， et al. Antifungal activity of plant extracts against pathogenic fungi of Torreya grandis ‘Merrillii’ [J]. Forest Pest and Disease， 2023， 42（1）： 1-5.

[32] 周英， 歐陽慧， 蔣軍喜， 等. 10種殺菌劑對葡萄座腔菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 中國南方果樹， 2016， 45（6）： 124-125， 130.

Zhou Y， Ouyang H， Jiang J X， et al. Indoor toxicity determination of 10 fungicides to Botryosphaeria dothidea [J]. South China Fruit， 2016， 45（6）： 124-125， 130.

[33] 胡沖， 吳道軍. 殺菌劑對櫻花枝枯病菌葡萄座腔菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 農(nóng)業(yè)與技術， 2020， 40（23）： 19-20.

Hu C， Wu D J. Indoor toxicity determination of fungicides on Botryosphaeria dothidea of Cerasus cladosporioides [J]. Agriculture and Technology， 2020， 40（23）： 19-20.

[34] 李誠， 蔣軍喜， 冷建華， 等. 6種殺菌劑對獼猴桃主要腐爛病菌的室內(nèi)毒力測定[J]. 中國南方果樹， 2012， 41（1）： 27-29.

Li C， Jiang J X， Leng J H， et al. Indoor toxicity test of six fungicides to main pathogenic fungi causing fruit rot of kiwifruit [J]. South China Fruits， 2012， 41（1）： 27-29.

[35] 趙江， 余知和， 李其利， 等. 芒果葡萄座腔菌對3種殺菌劑的敏感性測定[J]. 南方農(nóng)業(yè)學報， 2021， 52（4）： 984-994.

Zhao J， Yu Z H， Li Q L， et al. Susceptibility of Botryosphaeriaceous isolates from mango to three fungicides [J]. Journal of Southern Agriculture， 2021， 52（4）： 984-994.