傳染性鮭魚貧血癥研究進(jìn)展

張麗文 丁鈺潔 張秀梅 徐惠章 魏進(jìn) 陳坤

摘要：通過對(duì)傳染性鮭魚貧血癥研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，介紹了傳染性鮭魚貧血癥病理學(xué)、傳播途徑、流行情況、檢測(cè)方法等，并提出在實(shí)際中應(yīng)采取的預(yù)防措施，為傳染性鮭魚貧血癥的進(jìn)一步研究提供參考。

關(guān)鍵詞：傳染性鮭魚貧血癥病毒;傳染性鮭魚貧血癥;檢測(cè)方法;預(yù)防措施

中圖分類號(hào)：S94 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

傳染性鮭魚貧血癥（Infectious Salmon Anaemia，ISA），是一種由傳染性鮭魚貧血癥病毒（Infectious Salmon Anaemia Virus，ISAV）感染大西洋鮭魚等魚類并可能引起其死亡的病毒性傳染病。該疾病于1984年在挪威首次被發(fā)現(xiàn)，隨后在1996年加拿大的新布朗斯威克省、1998年蘇格蘭、2000年法羅群島、2001年智利等地相繼爆發(fā)。該病淘汰了數(shù)百萬條鮭魚，并給養(yǎng)殖戶造成了極大的損失。

1 ?傳染性鮭魚貧血癥

1.1 ?病理學(xué)

ISAV作為該病的病原，是正粘病毒科（Orthomyxoviridae）傳染性鮭魚貧血病毒屬的成員。該病毒直徑100～130 nm，由8條負(fù)鏈RNA片段組成，編碼10種功能蛋白，其中編碼血凝素酯酶（Hemaglutinin esterasc，HE）的基因節(jié)段6和編碼神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase，NA）的基因節(jié)段8常用于不同ISAV毒株的分類[1]。根據(jù)ISAV基因節(jié)段6高度多態(tài)性區(qū)域（Highly polymorphic region，HPR）的缺失情況，可將ISAV分為HPR缺失型和HPR非缺失型兩類。根據(jù)地域位置分布，ISAV主要可分為歐洲型（基因型Ⅰ）和北美型（基因型Ⅱ）。

1.2 ?傳播途徑

ISAV傳播途徑有多種，一是可以通過魚與魚之間血液、尿液、排泄物和體液等的密切接觸傳播。通過在鮭魚體內(nèi)接種該病毒研究發(fā)現(xiàn)，血液和組織中存在ISAV病毒，被感染的魚的殘留組織具有傳染性，ISAV可以在鮭魚繁殖（5℃～15℃）的寒冷溫度下更好地復(fù)制，在15℃下放置10天或在4℃下放置14天仍保持感染性;當(dāng)溫度高于25℃時(shí)，不會(huì)復(fù)制。二是可以通過間接的方式進(jìn)行傳播，比如養(yǎng)殖環(huán)境、中間媒介、加工過程等。如果鮭魚接觸到存在ISAV病毒的水域，那么通過被感染的魚會(huì)將該病毒攜帶到新的水域。同時(shí)可以通過一些中間媒介傳播，比如海虱等，這些寄生蟲可以增加魚類的易感性。在網(wǎng)箱中養(yǎng)殖的鮭魚，并非與其他野生物種完全隔離，可以與其他小到穿網(wǎng)的動(dòng)物接觸，野生魚可以充當(dāng)中間媒介傳播該病毒。在高密度的養(yǎng)殖區(qū)域，對(duì)鮭魚進(jìn)行屠宰加工，如果不對(duì)宰割設(shè)備和養(yǎng)殖網(wǎng)箱進(jìn)行全面徹底的清潔消毒，攜帶的ISAV病毒可以感染這些區(qū)域，并將病毒傳播到另一個(gè)新的區(qū)域，最終造成該疾病的爆發(fā)。

2 ?傳染性鮭魚貧血癥流行情況與檢測(cè)方法

2.1 ?流行情況

傳染性鮭魚貧血癥可能在一年四季隨時(shí)發(fā)生，初夏和秋季是死亡率的高峰季節(jié)。主要在海水魚或接觸到海水的魚中發(fā)現(xiàn)。疾病通常開始于一或兩個(gè)網(wǎng)塘，爆發(fā)開始時(shí)，可能只有幾條魚受到影響，最初的每日死亡率通常為0.5%～1%。如果病毒的傳播不受控制，死亡率會(huì)逐漸增加或者突然增加，累計(jì)死亡率從可忽略不計(jì)到中等或嚴(yán)重，高毒力的毒株可以在幾個(gè)月內(nèi)殺死90%的魚類。多種魚類對(duì)該病易感，包括大西洋鮭魚、銀大馬哈魚、褐鱒、虹鱒等。

2.2 ?檢測(cè)方法

首先通過臨床癥狀做初步診斷，然后通過細(xì)胞分離、免疫學(xué)與分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)一步檢查，以判斷魚類是否感染傳染性鮭魚貧血癥。

2.2.1 ?臨床癥狀

該病發(fā)病初期出現(xiàn)致死性全身臨床癥狀，貧血、腹水、肝脾腫大變黑，腹膜上出現(xiàn)瘀斑，眼前方可見出血。

2.2.2 ?實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法

目前ISAV的主要檢測(cè)方法是病毒細(xì)胞分離并鑒定、間接免疫熒光檢測(cè)（Indirect immunoinfluore-scene assay， IFA）、RT-PCR技術(shù)等。ISAV能夠從SHK-1（大西洋鮭頭腎）或ASK（大西洋鮭頭腎白細(xì)胞）細(xì)胞系或其他易感系分離出來，但細(xì)胞分離鑒定費(fèi)時(shí)費(fèi)力，分離率低，有時(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不準(zhǔn)確，難以滿足緊急情況下應(yīng)急反應(yīng)的要求。RT-PCR、Real-time RT-PCR是目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的主要檢測(cè)方法。杜雄偉[2]等建立了實(shí)時(shí)熒光RT-PCR探針檢測(cè)方法，針對(duì)ISAV基因序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物和一條特異性探針，進(jìn)行特異性、敏感性、重復(fù)性檢測(cè)，檢出ISAV最小拷貝數(shù)為13拷貝。該方法操作簡(jiǎn)單，花費(fèi)時(shí)間短。史秀杰[3]等建立ISAV實(shí)時(shí)熒光環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法，根據(jù)ISAV的基因保守序列，利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增LAMP（Loop-mediated isothermal amplification）Designer軟件設(shè)計(jì)了6條引物，采用新型的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增設(shè)備進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，分析所建立方法的特異性和靈敏度。研究表明，最適反應(yīng)溫度為64℃，反應(yīng)10min可觀察到明顯的擴(kuò)增。該檢測(cè)方法比常規(guī)RT-PCR靈敏度高100倍，適用于無癥狀的ISA監(jiān)測(cè)或者對(duì)可疑魚組織的檢測(cè)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)?zāi)軐?duì)整個(gè)擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，可防止由于開蓋跑電泳或加染料而導(dǎo)致的污染。徐淑菲[4]等建立SYBR-Green I實(shí)時(shí)熒光PCR方法，根據(jù)ISAV Y10404的序列合成部分基因片段，將其插入到T載體中，構(gòu)建陽性質(zhì)控品，并設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物，利用陽性質(zhì)控品構(gòu)建該檢測(cè)方法，進(jìn)行特異性和敏感性分析，該方法能夠特異地檢測(cè)出ISAV，靈敏度比傳統(tǒng)RT-PCR高1000倍，且簡(jiǎn)單、快速。

3 ?傳染性鮭魚貧血癥預(yù)防措施

3.1 ?控制

良好的管理和生物安全措施可以減少感染該病的風(fēng)險(xiǎn)?？刂拼?、魚類、物資和人員的流動(dòng)，隨時(shí)清潔船只、設(shè)備和工具。定期從網(wǎng)箱中清除死魚，加強(qiáng)水質(zhì)管理，每天排污、換水，正確處理廢物、污水。鮭魚養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)保持一定距離，禁止從發(fā)病區(qū)運(yùn)出魚和卵，一旦發(fā)病，將全場(chǎng)魚銷毀。

3.2 ?消毒

鮭魚養(yǎng)殖常用工具消毒十分重要，病魚用過的工具（如網(wǎng)箱等）不經(jīng)過消毒而使用就會(huì)把病毒帶入新的魚池，造成病毒的再次傳播?？捎枚喾N消毒劑將ISAV滅活，例如次氯酸鈉，氯胺T，二氧化氯，碘伏，氫氧化鈉，甲酸，甲醛和過氧一硫酸鉀（Virkon?S）（2%的 溶液/10分鐘），然后用水沖洗。同時(shí)需要對(duì)魚池進(jìn)行消毒，用一定濃度的生石灰或者漂白粉對(duì)魚池進(jìn)行消毒，以殺死病菌和有害微生物[5]。

4 ? 結(jié)語

傳染性鮭魚貧血癥病毒是一種傳播較慢的弱性病毒，該病毒多方面與流感病毒類似。近年來，我國(guó)從國(guó)外進(jìn)口的冰凍魚類種類越來越多，ISAV病毒可存在于鮭魚的鰓、貨物包裝材料、被接觸的冰等中，成為該病毒傳入我國(guó)的潛在危險(xiǎn)因素。本文通過對(duì)傳染性鮭魚貧血癥的病因?qū)W、傳播途徑、流行情況、檢測(cè)方法等研究進(jìn)展的綜述，讓大眾對(duì)該疾病有更深入的了解和掌握預(yù)防措施，并為進(jìn)一步的研究提供參考。

參考文獻(xiàn)

[1]Tello M， Vergara F， Spencer E. Genomic adaptation of the ISA virus to Salmo salar codon usage [J]. Viral J. 2013，10：223.

[2]杜雄偉，李葉，龐艷華. ISAV實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法的建立.食品與發(fā)酵工業(yè)，2013，39（6）：205-207.

[3]史秀杰，于力，王津津，等.傳染性鮭魚貧血癥病毒實(shí)時(shí)熒光環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法的建立.[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展. 2014，4：51-58.

[4]徐淑菲，孔繁德，高隆英，等. SYBR-Green I實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)傳染性鯉魚貧血病[J].檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2007，117 （5） 27-30.

[5]田潔莉，楊成輝.幾種鮭鱒魚類養(yǎng)殖過程中的病害綜合防治.[J]黑龍江水產(chǎn). 2004，1：30-32.