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      基于微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的肉制品中鴨源性成分的定量檢測

      2021-06-15 16:34:18劉立兵員麗娟陳敏娜王金鳳付琦孫曉霞王建昌
      肉類研究 2021年3期
      關(guān)鍵詞:微滴鴨肉肉制品

      劉立兵 員麗娟 陳敏娜 王金鳳 付琦 孫曉霞 王建昌

      摘? 要:為實(shí)現(xiàn)肉制品中鴨源性成分的定量檢測,基于微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR),以鴨生長激素(growth hormone,GH)基因?yàn)榘谢?,建立肉制品中鴨源性成分的定量檢測方法。結(jié)果表明:所建立的ddPCR方法能特異性檢測鴨源性成分,靈敏性為11.1 copies/μL;根據(jù)鴨肉質(zhì)量(mg)與DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)、DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL)之間的線性關(guān)系,建立鴨肉質(zhì)量(x)與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(y)之間的關(guān)系式為 ;模擬混合樣本中鴨肉粉質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%~100%時(shí),鴨源性成分檢測的絕對誤差均小于±1.52%,變異系數(shù)均小于10.38%,回收率為98.35%~125.32%;在88 份商品化肉制品中,11 份肉制品中檢出鴨源性成分,檢出率為12.5%,且鴨源性成分含量為18.6%~87.4%。本研究所建立的鴨源性成分ddPCR方法有較好的準(zhǔn)確性和較強(qiáng)的適用性,能夠應(yīng)用于肉制品中鴨源性成分的定量檢測。

      關(guān)鍵詞:肉制品;鴨源性成分;生長激素基因;微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);定量檢測

      Quantitative Detection of Duck-Derived Ingredients in Meat Products by Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

      LIU Libing1, YUAN Lijuan2, CHEN Minna1, WANG Jinfeng1, FU Qi1, SUN Xiaoxia1, WANG Jianchang1,*

      (1.Technology Center of Shijiazhuang Customs, Shijiazhuang? ?050051; 2.Technology Center of Xian Customs, Xian? ?710075)

      Abstract: A droplet digital polymerase chain reaction assay (ddPCR) based on the duck growth hormone gene (GH) as the target gene was developed for the quantitative detection of duck-derived ingredients in meat products. The results showed that the assay was highly specific for the detection of duck derived ingredients, but not the other tested animal components, and its limit of detection was 11.1 copies/μL. According to the linear relationship between the mass of duck meat (mg) and DNA concentration (ng/μL), and that between DNA concentration (ng/μL) and the number of GH gene copies (copies/μL), the linear equation between the mass of duck meat (X) and the number of GH gene copies (Y) was established as follows: . When the percentage of duck meat powder ranged from 5% to 99% in simulated mixed samples, the absolute error was less than ± 1.52%, and the coefficient of variation was less than 8.30% with a recovery between 98.35% and 108.78%. Duck -derived ingredients were detected at levels of 18.6%–87.4% in 11 out of 88 samples of commercial meat products, with a detection rate of 12.5%. The developed ddPCR assay demonstrated good accuracy and applicability for the quantitative determination of duck-derived component in commercial meat products.

      Keywords: meat products; duck-derived ingredients; growth hormone gene; droplet digital polymerase chain reaction; quantitative determination

      DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210119-013

      中圖分類號(hào):TS207.3? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A? ? ? ? ? ? ? ?文章編號(hào):

      引文格式:

      劉立兵, 員麗娟, 陳敏娜, 等. 基于微滴式數(shù)字聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的肉制品中鴨源性成分的定量檢測[J]. 肉類研究, 2021, 35(3):? . DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210119-013.? ? http://www.rlyj.net.cn

      LIU Libing, YUAN Lijuan, CHEN Minna, et al. Quantitative detection of duck-derived ingredients in meat products by droplet digital polymerase chain reaction[J]. Meat Research, 2021, 35(3):? . DOI:10.7506/rlyj1001-8123-20210119-013.? ? http://www.rlyj.net.cn

      肉制品是我國居民食品消費(fèi)的重要組成部分,主要以豬肉、雞肉、牛肉、羊肉和鴨肉為主。一些不法商販為獲得高額利潤,使用低價(jià)優(yōu)質(zhì)肉冒充高價(jià)優(yōu)質(zhì)肉,如根據(jù)鴨肉的紋理色澤和牛羊肉更為接近,采用牛羊肉精、肉粉或香精等對鴨肉進(jìn)行浸泡,以此掩蓋其摻假行為,用鴨肉冒充牛羊肉進(jìn)行銷售[1-3]。以廉價(jià)的鴨肉冒充牛肉、羊肉進(jìn)行生產(chǎn)經(jīng)營欺騙消費(fèi)者的做法,不僅損害了消費(fèi)者的經(jīng)濟(jì)利益,同時(shí)也存在諸多的安全隱患,如過敏體質(zhì)的人群因食用摻假的食品而造成過敏損傷等問題。因此,對于食品監(jiān)管部門,建立快速、有效的鴨源性成分檢測方法對肉制品行業(yè)的監(jiān)督和管理有重要意義。

      目前國內(nèi)外主要采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)和熒光PCR方法對肉制品中動(dòng)物源性成分進(jìn)行定性檢測[4-6]?;诰€粒體和核基因組特異性靶基因建立的系列PCR檢測技術(shù),已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)化并廣泛應(yīng)用于肉制品中豬、牛、羊、馬等動(dòng)物源性成分的檢測[7-8]。實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便、快速高效等特點(diǎn)[9-10],使用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)進(jìn)行摻假肉成分的定量分析時(shí),需要建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣本循環(huán)閾(circulation threshold,Ct)值粗略計(jì)算DNA含量,是一種相對定量的方法,而無法滿足絕對定量的要求[11-15]。微滴式數(shù)字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)通過對樣品進(jìn)行微滴化處理,經(jīng)PCR擴(kuò)增后逐個(gè)對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測,有熒光信號(hào)的微滴判讀為1,沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。ddPCR能夠?qū)崿F(xiàn)對靶序列核酸的絕對定量,在精確性、準(zhǔn)確性和靈敏度方面效果優(yōu)于普通PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR[16]。同時(shí)ddPCR技術(shù)不依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線,不受PCR抑制物及PCR擴(kuò)增效率的影響,通過單分子計(jì)數(shù)方式實(shí)現(xiàn)外源基因拷貝數(shù)絕對定量分析,更適合食品等基質(zhì)復(fù)雜樣本中摻假成分的準(zhǔn)確定量檢測[11]。

      生長激素(growth hormone,GH)基因是一種重要的功能基因,對生長激素的合成和分泌有調(diào)節(jié)和控制作用,對動(dòng)物的生長發(fā)育有重要意義,其次,GH基因?yàn)閱慰截惢?,有利于ddPCR反應(yīng)核酸的準(zhǔn)確定量,故本研究以鴨GH基因?yàn)榘谢?,建立鴨源性成分ddPCR檢測方法,實(shí)現(xiàn)肉制品中鴨源性成分的定量檢測。

      1? ?材料與方法

      1.1? ?材料與試劑

      鴨、雞、鵝、鵪鶉、鴿子、鴕鳥、袋鼠、綿羊、山羊、牛、牦牛、豬、馬、驢、貓、狗、兔、狐貍和貉子肉粉由本實(shí)驗(yàn)室保存;羊肉卷(片)、烤羊肉串、肥牛卷、牛肉松、牛柳、豬肉、豬肉餡、香腸等88 份肉制品為本實(shí)驗(yàn)保存的客戶送檢樣品。

      食品基因組DNA提取試劑盒? ?美國Promega公司;微滴式數(shù)字PCR預(yù)混液(不含dUTP)、微滴反應(yīng)板、微滴發(fā)生蓋、微滴式數(shù)字PCR機(jī)油? ?美國Bio-Rad公司。

      1.2? ?儀器與設(shè)備

      PCR儀(T100TM Thermal cycler)、QX200 ddPCR微滴生成儀、微滴生成卡、QX200TM Droplet Reader、熱封儀? ?美國Bio-Rad公司;NanoDrop2000C超微量分光光度計(jì)? ?美國Thermo Fisher公司;三孔電熱恒溫水槽? ?上海一恒生物有限公司;MM400混合型球磨儀? ?德國萊馳公司;SL202電子天平? ?德國賽多利斯公司;1-14臺(tái)式離心機(jī)? ?德國Sigma公司;SQ2119N料理機(jī)? ?慈溪市西貝樂電器有限公司。

      1.3? ?方法

      1.3.1? ?引物和探針設(shè)計(jì)

      根據(jù)GenBank上收錄的鴨物種的基因序列,以鴨GH基因(JN408702.2、EF521443.1)保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物和TaqMan探針,序列見表1。引物探針由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

      1.3.2? ?肉粉的制備與基因組DNA的提取

      稱取500 g肉制品,放入料理機(jī)進(jìn)行攪拌打碎,攪拌成肉泥。收集肉泥,于65 ℃烘干箱烘干16 h,將烘干的肉粉放入混合型球磨儀中充分研磨,收集肉粉。密封,置于4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

      使用食品基因組DNA提取試劑盒,按照說明書進(jìn)行不同肉樣的基因組DNA提取,使用超微量分光光度計(jì)測定提取DNA質(zhì)量濃度,將其稀釋至100 ng/μL,放置于-20 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

      1.3.3? ?鴨源性成分ddPCR方法的建立

      以提取鴨肉基因組DNA為模板,采用設(shè)計(jì)的引物和探針建立ddPCR方法。反應(yīng)體系為20 μL:ddPCR反應(yīng)預(yù)混液10 μL、Duck-F、Duck-R各0.8 μL、Duck-P 0.4 μL、模板DNA 2 μL、補(bǔ)水至20 μL。

      將上述反應(yīng)體系利用微滴生成器進(jìn)行微滴化,并轉(zhuǎn)移至96 孔板中,封膜進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增條件:95 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性15 s,60 ℃退火及延伸60 s,49 個(gè)循環(huán);98 ℃加熱10 min,10 ℃保存。擴(kuò)增過程中,升降溫速率為1 ℃/s。PCR擴(kuò)增結(jié)束后,將96 孔板取出,置于微滴讀取儀中進(jìn)行微滴熒光讀取。采用FAM/HEX通道收集微滴信號(hào),讀取陽性微滴數(shù)和陰性微滴數(shù)。

      1.3.4? ?鴨源性成分ddPCR方法的特異性和靈敏性測定

      取30 mg鴨、雞、鵝、鵪鶉、鴿子、鴕鳥、袋鼠、綿羊、山羊、牛、牦牛、豬、馬、驢、貓、狗、兔、狐貍和貉子肉粉樣品,提取基因組DNA,最終以100 μL無菌水溶解DNA,采用超微量分光光度計(jì)測定其質(zhì)量濃度,并將其稀釋至10~100 ng/μL,進(jìn)行ddPCR擴(kuò)增,根據(jù)1.3.3節(jié)的擴(kuò)增體系和擴(kuò)增程序進(jìn)行鴨GH基因檢測,同時(shí)以ddH2O為空白對照,驗(yàn)證引物探針的特異性。

      將提取的鴨基因組DNA稀釋至質(zhì)量濃度為100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5、0.625 0、0.212 5、0.012 5 ng/μL,根據(jù)建立的ddPCR方法進(jìn)行擴(kuò)增,計(jì)算各質(zhì)量濃度樣本中鴨GH基因的拷貝數(shù),確定所建立方法的靈敏性。

      1.3.5? ?肉粉質(zhì)量與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度線性關(guān)系的建立

      以3.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0 mg鴨肉粉質(zhì)量(x1,mg)為橫坐標(biāo),提取的DNA質(zhì)量濃度平均值(y1,ng/μL)為縱坐標(biāo),建立肉粉質(zhì)量-DNA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系式: ;以100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5、0.625 0 ng/μL的鴨肉粉DNA質(zhì)量濃度(x2,ng/μL)為橫坐標(biāo),反應(yīng)體系中鴨GH基因拷貝數(shù)濃度的平均值為縱坐標(biāo)(y2,copies/μL),建立DNA質(zhì)量濃度-鴨GH基因拷貝數(shù)濃度的線性關(guān)系式: ,每個(gè)反應(yīng)進(jìn)行3 次重復(fù)。

      由于ddPCR反應(yīng)體系中模板中目的基因含量需≤105拷貝,而在實(shí)際樣品檢測過程中,提取的部分樣品核酸質(zhì)量濃度過高,需要將樣本DNA稀釋至合適質(zhì)量濃度再進(jìn)行ddPCR檢測。設(shè)樣品質(zhì)量濃度的稀釋倍數(shù)為n,則 ;由以上關(guān)系式可以推出鴨肉粉質(zhì)量(x1,mg)、鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(y2,copies/μL)和樣品稀釋倍數(shù)(n)之間的關(guān)系,即: 。

      1.3.6? ?鴨源性成分ddPCR方法的檢測限分析

      將鴨肉粉質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為1%、5%、10%、20%、50%、60%、80%、99%、100%的混合肉粉(鴨、牛、羊)進(jìn)行DNA提取,并以之作為模板,進(jìn)行鴨源性成分GH基因ddPCR檢測,每個(gè)樣品做3 個(gè)重復(fù),計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)。以ddPCR檢測所得GH基因拷貝數(shù)濃度,根據(jù)1.3.5節(jié)鴨肉粉質(zhì)量、GH基因拷貝數(shù)濃度和樣品稀釋倍數(shù)之間的關(guān)系式,計(jì)算鴨肉粉質(zhì)量分?jǐn)?shù),并計(jì)算回收率。參照國際食品法典委員會(huì)標(biāo)準(zhǔn)CAC/GL 74—2010《檢測、鑒定和量化食品中特定基因序列和蛋白質(zhì)的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)和方法確認(rèn)準(zhǔn)則》[17],以回收率和RSD評價(jià)本方法的準(zhǔn)確度和精密度,以回收率為80%~120%和RSD≤25%作為質(zhì)量分?jǐn)?shù)有效定量數(shù)據(jù)的判斷依據(jù)。

      1.3.7? ?市售商業(yè)化肉制品中鴨源性成分的定量檢測

      將本實(shí)驗(yàn)室保存的羊肉卷(片)、烤羊肉串、豬肉餡、肥牛卷、牛肉松、香腸等88 份肉制品,按照1.3.2節(jié)進(jìn)行樣品處理。用建立的鴨源性成分ddPCR方法,對肉制品中鴨源性成分進(jìn)行定量分析。同時(shí)采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 3731.5—2013《食品及飼料中常見畜類品種的鑒定方法 第5部分:馬成分檢測 實(shí)時(shí)熒光PCR法》中的PCR方法對88 份肉制品進(jìn)行鴨源性成分檢測,對檢測結(jié)果進(jìn)行分析,進(jìn)一步驗(yàn)證所建立方法的準(zhǔn)確性和實(shí)際應(yīng)用效果。

      2? ?結(jié)果與分析

      2.1? ?鴨源性成分ddPCR特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

      以鴨、雞、鵝、豬、牛、羊、貉子、兔和鴿子等基因組DNA為模板,以ddH2O為空白對照,進(jìn)行ddPCR檢測。由圖1可知,空白對照未出現(xiàn)擴(kuò)增,說明反應(yīng)體系未受污染,且每個(gè)樣品產(chǎn)生的總微滴數(shù)大于12 000 個(gè),符合泊松分布的統(tǒng)計(jì)要求。僅鴨基因組DNA有特異性微滴擴(kuò)增,豬、雞、牛、羊、兔等其他異源基因組DNA無任何擴(kuò)增,表明所建立的ddPCR具有良好的特異性。

      1~10. 鴨基因組DNA質(zhì)量濃度分別為100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5、0.625 0、0.212 5、0.012 5 ng/μL。

      將鴨基因組DNA質(zhì)量濃度分別稀釋為100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.562 5、0.625 0、0.212 5、0.012 5 ng/μL,進(jìn)行ddPCR擴(kuò)增檢測。由圖2可知,當(dāng)模板質(zhì)量濃度稀釋至0.625 0 ng/μL時(shí),檢測到的GH基因拷貝濃度為11.1 copies/μL(儀器自動(dòng)讀?。?,表明所建立的ddPCR方法檢測鴨GH基因具有良好的靈敏性。

      2.2? ?鴨肉粉質(zhì)量與DNA質(zhì)量濃度線性相關(guān)性分析

      以鴨肉粉質(zhì)量為橫坐標(biāo)(x1,mg),DNA質(zhì)量濃度為縱坐標(biāo)(y1,ng/μL),得到二者的線性關(guān)系式為y1=40.873x1-6.273(R2=0.989 2);以DNA質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x2,ng/μL),鴨GH基因拷貝數(shù)濃度為縱坐標(biāo)(y2,copies/μL),得到二者的線性關(guān)系式為y2=17.739x2+0.5505(R2=0.999 9)。

      由此可以推出鴨肉粉質(zhì)量(x1,mg)、鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(y2,copies/μL)和檢測前樣品稀釋倍數(shù)(n)之間的關(guān)系式為 。

      2.3? ?鴨源性成分ddPCR方法的檢測限

      由表2可知,當(dāng)模擬混合樣品中鴨肉粉質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%~100%時(shí),計(jì)算不同鴨肉粉質(zhì)量分?jǐn)?shù)樣品3 次重復(fù)測定的絕對誤差均小于±1.52%,相對誤差均小于±3.15%,變異系數(shù)均小于10.38%,回收率為98.35%~125.32%,測量值接近實(shí)際值。所建立ddPCR方法檢測肉制品中鴨肉成分的最低檢測限為5%,最高檢測限為100%。

      2.4? ?市售商業(yè)化肉制品中鴨源性成分的定量檢測

      由表3可知,采用ddPCR方法在11 份肉制品中檢出鴨源性成分,檢出率為12.5%,鴨肉含量為18.6%~87.4%。采用SN/T 3731.5—2013方法在11 份肉制品中檢出鴨源性成分,結(jié)果與ddPCR方法一致。上述結(jié)果表明,所建立的ddPCR方法能夠?qū)θ庵破分续喸葱猿煞诌M(jìn)行良好的定量檢測。

      3? ?討? 論

      肉類摻假問題越來越受到公眾的關(guān)注,建立有效的動(dòng)物源性成分定量檢測方法是檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)研究的熱點(diǎn)問題[18-20]。建立有效的檢測手段是執(zhí)法監(jiān)管部門的技術(shù)支撐和保障。ddPCR技術(shù)通過微滴數(shù)進(jìn)行判讀,實(shí)現(xiàn)對起始樣品的絕對定量,已經(jīng)應(yīng)用到生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,在動(dòng)物源性成分定量檢測方面發(fā)揮了重要作用[21-24],在動(dòng)物源性成分定量檢測中已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用[25-29]。苗麗等[30]建立肉制品中牛源和豬源成分的ddPCR檢測方法,通過對肉制品中豬源和牛源性成分的定量檢測甄別肉制品是“無意沾染”還是“故意摻假”;王強(qiáng)等[31]根據(jù)單拷貝基因建立鵝源性成分的ddPCR檢測方法,并應(yīng)用于市售商品的檢測;任君安等[32]根據(jù)復(fù)制蛋白A1基因建立羊源和豬源性成分的ddPCR方法,通過二者基因拷貝數(shù)固定比值對14 份羊肉制品進(jìn)行定量檢測,具有很好的定量準(zhǔn)確性;史艷宇等[33]以鴨線粒體基因建立鴨源性成分微滴式數(shù)字PCR檢測方法,靈敏性高于熒光PCR方法,該研究以多拷貝基因?yàn)榘谢?,在定量檢測的靈敏性方面低于以單拷貝基因?yàn)榘谢蚪⒌姆椒ā?/p>

      本研究以鴨單拷貝GH基因作為靶基因,建立鴨源性成分ddPCR檢測方法,通過構(gòu)建肉粉質(zhì)量(mg)與DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)、DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)與GH基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL)之間的線性關(guān)系,確定了鴨肉粉質(zhì)量(mg)與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL)之間的關(guān)系式,能夠?qū)喨赓|(zhì)量進(jìn)行準(zhǔn)確定量檢測,ddPCR方法檢測肉制品中鴨肉成分的最低檢測限為5%,最高檢測限為100%。定量結(jié)果同模擬樣品真實(shí)值基本一致,表明所建立的ddPCR具有較好的準(zhǔn)確性和較強(qiáng)的抗干擾能力。對88 份商業(yè)化肉制品的鴨源性成分進(jìn)行定量檢測結(jié)果表明,11 份肉制品中鴨源性成分含量為18.6%~87.4%,說明該方法能夠用于肉制品中鴨源性成分的有效檢測和精準(zhǔn)定量檢測。同時(shí),所建立的ddPCR方法也存在一定的不足。在鴨源性成分定量檢測中,只能選取紅肉部分進(jìn)行樣品前處理,不能選取皮膚、脂肪或內(nèi)臟等部分進(jìn)行檢測。在今后的研究中將對此不足之處進(jìn)行進(jìn)一步的研究和探索。

      本研究基于鴨單拷貝GH基因建立了鴨源性成分ddPCR檢測方法,通過分析鴨肉質(zhì)量(mg)和鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL)之間的線性關(guān)系,實(shí)現(xiàn)了肉制品中鴨源性成分的定量檢測,可以有效區(qū)分“無意沾染”和“蓄意摻假”,為有效打擊非法肉制品制假售假、規(guī)范市場秩序和保障食品安全提供了技術(shù)保障。

      4? ?結(jié)? 論

      本研究以鴨GH基因?yàn)榘谢颍Ⅷ喸葱猿煞侄繖z測的微滴式數(shù)字PCR方法,該方法特異性強(qiáng),靈敏性可達(dá)1.1 copies/μL,并通過鴨肉質(zhì)量(mg)與DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)、DNA質(zhì)量濃度(ng/μL)與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(copies/μL)之間的線性關(guān)系,建立鴨肉質(zhì)量(x)與鴨GH基因拷貝數(shù)濃度(y)之間的關(guān)系式為 ;建立ddPCR方法檢測肉制品中鴨肉成分的最低檢測限為5%,最高檢測限為100%。本研究所建立的鴨源性成分ddPCR方法有較好的準(zhǔn)確性和較強(qiáng)的適用性,能夠應(yīng)用于肉制品中鴨源性成分的定量檢測。

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