云南景邁山不同生境茶園根際土壤微生物群落多樣性初步研究

楊瑞娟 王橋美 彭文書(shū) 龔?fù)瘳? 趙苗苗 嚴(yán)亮

摘? 要：為了探究景邁山普洱茶區(qū)不同生境茶園根際土壤微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性和差異性，對(duì)景邁山普洱茶區(qū)的微生物進(jìn)行溯源，更好地保證景邁山原產(chǎn)地生產(chǎn)的普洱茶微生物的一致性。采用平板涂布分離技術(shù)，對(duì)從3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園（TS-A、TS-B、TS-C）和景邁山古茶園（GS-D）采集的根際土壤微生物進(jìn)行培養(yǎng)，并利用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定其種類。在茶園根際土壤微生物中經(jīng)分離純化共得到417株細(xì)菌和143株真菌，分別歸類于27個(gè)細(xì)菌屬和18個(gè)真菌屬，4個(gè)茶園根際微生物多樣性不同，細(xì)菌多樣性和真菌多樣性的排序分別為：GS-D>TS-A>TS-C>TS-B和TS-A>TS-B>TS-C>GS-D。4個(gè)茶園的微生物群落均含有節(jié)細(xì)菌屬（Arthrobacter）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、桿菌屬（Lysinibacillus）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）、曲霉屬（Aspergillus）和青霉菌屬（Penicillium），其中芽孢桿菌屬（Bacillus）和青霉菌屬（Penicillium）為優(yōu)勢(shì)菌屬。結(jié)果表明，景邁山不同生境下的根際土壤微生物群落組成有差異性，3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園的細(xì)菌多樣性低于古茶園，但真菌多樣性高于古茶園。3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園的規(guī)律如下：茶樹(shù)品種一樣，套種品種多的茶園的細(xì)菌和真菌多樣性都高于套種品種少的茶園，套種品種相似的茶園，茶樹(shù)品種越多，細(xì)菌的多樣性更高，而真菌多樣性更低。

關(guān)鍵詞：景邁山;茶園;根際微生物

中圖分類號(hào)：S571.1? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

A Preliminary Study on the Distribution Diversity of Rhizosphere Soil Microbial Community in Tea Plantations with Different Habitats of Jingmai Mountain， Yunnan， China

YANG Ruijuan1，2，3， WANG Qiaomei2，3，4， PENG Wenshu2，3， GONG Wanying2，3， ZHAO Miaomiao2，3，

YAN Liang2，3*

1. College of Food Science and Technology， Yunnan Agricultural University， Kunming， Yunnan 650201， China; 2. College of Tea （Puer）， West Yunnan University of Applied Sciences， Puer， Yunnan 665000， China; 3. Puer Institute of Pu-erh Tea， Puer， Yunnan 665000， China; 4. College of Plant Protection， Yunnan Agricultural University， Kunming， Yunnan 650201， China

Abstract： To explore the diversity and difference of rizosphere soil microbial community structure in tea gardens of different habitats in Pu-erh tea area of Jingmai Mountain， so as to better ensure the consistency of microorganisms in Pu-erh tea production in the original place of Jingmai Mountain， the plate coating separation technology was used to culture the microorganisms collected from three organic terraced tea gardens （TS-A， TS-B， TS-C） and Jingmai Mountain ancient tea garden （GS-D）， and the molecular biology technology was used to identify the species. A total of 417 strains of bacteria and 143 strains of fungi were isolated and purified， respectively distributed in 27 bacterial genera and 18 fungal genera. The rizosphere microbial diversity of the four tea gardens was different， the order of bacterial diversity and fungal diversity was GS-D>TS-A>TS-C>TS-B and TS-A>TS-B>TS-C>GS-D， respectively. The soil rizosphere microbial communities of the four tea gardens all contained Arthrobacter， Bacillus， Lysinibacillus， Paenibacillus， Aspergillus and Penicillium， Bacillus and Penicillium were the dominant genera. The results showed that the composition of the rizosphere soil microbial community in different habitats of Jingmai Mountain was different. The bacterial diversity of the three terraced tea gardens was lower than that of the ancient tea garden， but the fungal diversity was higher than that of the ancient tea garden. More intercropped plants would result in higher bacterial diversity and fungal diversity in organic terraced tea gardens. More varieties of tea trees would lead to higher bacterial diversity and lower fungal diversity in terraced tea gardens.

Keywords： Jingmai Mountain; tea garden; rhizosphere microorganism

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2021.04.039

景邁山位于中國(guó)云南省的西南邊陲，坐落于普洱市瀾滄拉祜族自治縣惠民鄉(xiāng)，地處北緯221205.8，東經(jīng)1000202.5，以普洱茶盛名，是有名的幾大普洱茶山之一，有成片的現(xiàn)代有機(jī)茶園，也有占地面積1867 hm2的古茶園。在世界物質(zhì)文化遺產(chǎn)申報(bào)的版圖上，景邁山是唯一以古茶林為主體申遺的茶山，這里山高谷深、云霧彌漫、氣候溫和濕潤(rùn)、土壤肥沃、植被豐富，極適合大葉茶樹(shù)的自然生長(zhǎng)[1]。

土壤中有機(jī)質(zhì)的分解、土壤元素的循環(huán)、土壤的礦化等都離不開(kāi)土壤微生物的作用，土壤微生物維持著農(nóng)業(yè)土壤的健康和生產(chǎn)力[2-4]。根際土壤微生物對(duì)植物的生長(zhǎng)有很重要的作用，如Walters等[5]發(fā)現(xiàn)細(xì)菌分泌的激素可提高植物的適應(yīng)性。根際微生物與根系之間存在適應(yīng)性協(xié)同進(jìn)化關(guān)系，并形成植物-微生物之間的互惠關(guān)系[6-7]。茶樹(shù)根際土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)及生態(tài)分布對(duì)茶葉的生長(zhǎng)與質(zhì)量的影響至關(guān)重要，茶樹(shù)的不同栽培環(huán)境和不同的人為管理活動(dòng)可能造成微生物群落的特殊性，進(jìn)而影響茶樹(shù)的生長(zhǎng)[7]。近幾年來(lái)，部分研究者采用稀釋平板涂布法、Biolog微平板分析法、微生物定量測(cè)定法、磷脂脂肪酸分析法[8-10]，對(duì)不同海拔、不同生長(zhǎng)年限的茶樹(shù)根際土壤微生物群落展開(kāi)研究[11-12]，初步探索了真菌、細(xì)菌、放線菌等微生物大類群與土壤性狀、茶樹(shù)樹(shù)齡、茶樹(shù)品種的關(guān)系。

目前，植物根際微生物的研究很多，但是茶樹(shù)根際微生物群落的組成及具體分布的研究比較少。本研究選取景邁山3個(gè)不同的有機(jī)臺(tái)地茶園和景邁山古茶園為對(duì)象，應(yīng)用純培養(yǎng)和測(cè)序技術(shù)對(duì)景邁山普洱茶區(qū)的土壤根際微生物群落結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行初探，為進(jìn)一步研究土壤微生物的功能和開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)和菌株資源。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 樣品? 土壤樣品來(lái)自4個(gè)茶園。茶園A：茶樹(shù)品種為傳統(tǒng)的普洱茶種，茶園套種20多種不同植物（香樟樹(shù)、旱冬瓜、西南樺、燈臺(tái)、金雞納、金絲楠、海南黃花梨、橡膠、印度紫檀、柚木櫻桃、荔枝、桃子、芒果、小葉紫薇等）;茶園B：茶樹(shù)品種為傳統(tǒng)的普洱茶種，套種近10種不同植物（香樟樹(shù)、旱冬瓜、西南樺、燈臺(tái)、芒果、桃子、小葉紫薇等）;茶園C：茶樹(shù)品種比較多（傳統(tǒng)的普洱茶種、‘雪芽100號(hào)‘云抗10號(hào)‘矮豐‘烏龍‘長(zhǎng)葉白毫等），套種品種與茶園B相似。茶園D：景邁山萬(wàn)畝古茶園，為當(dāng)?shù)夭祭首濉⒋鲎逑让袼Z化、栽培，基本為上千年的茶樹(shù)，是名副其實(shí)的千年萬(wàn)畝古茶園。

1.1.2? 試劑? ExTaq（TaKaRa，大連），KOD-fx（TOYOBO，日本），PCR引物由北京睿博興科生物技術(shù)有限公司合成，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2? 方法

1.2.1? 根際土壤樣品的采集? 采樣時(shí)間分別為2018年4月2—8日，2018年8月8—14日，2018年10月25—31日和2019年1月24—30日。在茶園內(nèi)隨機(jī)選擇健康的茶樹(shù)植株，以茶樹(shù)莖為中心，從橫向半徑20 cm，深度30 cm的土壤中將茶樹(shù)的部分須根拔出，輕輕搖動(dòng)去除松散的土壤，采集緊密附著在根表面的土壤即獲得1份根際土壤樣品。每3份土樣混合成1個(gè)土壤混合樣（1 kg左右），每個(gè)茶園采集10個(gè)土壤混合樣備用。茶園A、B、C均為景邁山的有機(jī)臺(tái)地茶園，采集的根際土壤樣品標(biāo)記為T(mén)S-A、TS-B、TS-C;茶園D為古樹(shù)茶園，采集的根際土壤樣品標(biāo)記為GS-D。

1.2.2? 微生物菌株的分離? 先制備以下4種培養(yǎng)基。

LB培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g/L，酵母提取物5 g/L，氯化鈉10 g/L，瓊脂18 g/L。

YEPD培養(yǎng)基：酵母粉10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂18 g/L。

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯300 g/L，葡萄糖20 g/L，瓊脂15～20 g/L。

高氏培養(yǎng)基：可溶性淀粉20 g/L，氯化鈉0.5 g/L，硝酸鉀1 g/L，磷酸氫二鉀0.5 g/L，硫酸鎂0.5 g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01 g/L，瓊脂15～20 g/L。

將所采土壤樣品置于滅菌的培養(yǎng)皿中自然風(fēng)干7 d，取10 g于90 mL的無(wú)菌水中，振蕩20 min，使其中微生物充分分散，得到10?1倍樣品稀釋液。用無(wú)菌移液槍吸取10?1菌懸液1 mL，加入裝有9 mL無(wú)菌生理鹽水的試管中，振蕩混勻，配制10?2、10?3、10?4、10?5梯度菌懸液，把10?3、10?5兩個(gè)梯度的土懸液各取100 μL分別均勻涂于LB、YEPD、PDA和高氏培養(yǎng)基平板中，28、37 ℃倒置恒溫培養(yǎng)72 h，挑取培養(yǎng)性狀不同的微生物單菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)，備用。

1.2.3? 微生物菌株的分子鑒定? 將純化的細(xì)菌制成菌懸液，細(xì)菌PCR體系為[13]：10×PCR buffer for ExTaq 5 ?L、2 mm dNTP mixture 4 ?L、ExTaq（5.0 U/?L）0.5 ?L、上游引物27F（20 ?mol/L）1 ?L、下游引物1492R（20 ?mol/L）1 ?L（使用的引物見(jiàn)表1）、菌懸液1 ?L、水37.5 ?L。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min;96 ℃變性30 s，52 ℃復(fù)性（退火）30 s，72 ℃延伸50 s，循環(huán)34次;72 ℃ 10 min。4 ℃保溫。

將純化的真菌制成菌懸液，真菌PCR體系為[14]：2×PCR buffer for KOD FX 25 ?L、2 mm dNTP mixture 10 ?L、KOD-fx（1.0 U/?L）1?L、上游引物ITS1（20 ?mol/L）0.75 ?L、下游引物ITS4（20 ?mol/L）0.75 ?L（使用的引物見(jiàn)表1）、菌懸液2.5 ?L、水10 ?L。PCR反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min;98 ℃變性10 s，50 ℃復(fù)性（退火）30 s，68 ℃延伸2 min，循環(huán)45次。4 ℃保溫。

將擴(kuò)增成功的樣品送至北京睿博興科生物技術(shù)有限公司測(cè)序。根據(jù)測(cè)序結(jié)果，在GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)分析，篩選出同源性最高的參考菌株序列，進(jìn)行分子鑒定。

用多序列對(duì)比軟件Clustal X 1.81進(jìn)行同源性比較并匹配排序，然后用系統(tǒng)發(fā)育分析MEGA5.1軟件包分析，構(gòu)建鄰接（Neighbor-joining，NJ）樹(shù)進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。NJ樹(shù)構(gòu)建采用HKY85距離矩陣，啟發(fā)式搜索，Bootstrap（1 000次重復(fù)）檢驗(yàn)，制作系統(tǒng)樹(shù)[15]。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 基于16S rRNA基因系統(tǒng)進(jìn)化的細(xì)菌群落組成分析

對(duì)純化得到的417株細(xì)菌菌株進(jìn)行16S rRNA基因測(cè)序、比對(duì)，挑取代表序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)見(jiàn)圖1。茶園土壤中的根際細(xì)菌可歸類到無(wú)色桿菌屬（Achromobacter）、節(jié)細(xì)菌屬（Arthrobacter）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、短芽孢桿菌屬（Brevibacillus）、短桿菌屬（Brevibacterium）、腸桿菌屬（Enterobacter）、桿菌屬（Lysinibacillus）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）、嗜冷芽孢桿菌屬（Psychrobacillus）、土壤芽孢桿菌屬（Solibacillus）、鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium）、鏈霉菌屬（Streptomyces）等屬中。

2.2? 基于ITS基因系統(tǒng)進(jìn)化的真菌群落組成分析

對(duì)純化得到的143株真菌菌株進(jìn)行ITS基因測(cè)序、比對(duì)，挑取代表序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖2所示。茶園土壤中的根際真菌可以歸類到Apiotrichum、Aseptatum、曲霉屬（Aspergillus）、Blastobotrys、Buckleyzyma、毛殼菌屬（Chaetomium）、Chloridium、Hamigera、馬拉色氏霉菌屬（Malassezia）、Meyerozyma、毛霉屬（Mucor）、Paramyrothecium、青霉菌屬（Penicillium）TSX、GSX分別代表有機(jī)臺(tái)地茶園和古茶園的根際土壤細(xì)菌。TSX、GSX represent the rhizosphere soil bacteria of the organic terraced tea garden and the ancient tea garden， respectively.

2.3? 不同生境茶園根際土壤細(xì)菌群落的屬間特征

由表2可知，TS-A、TS-B、TS-C、GS-D 4個(gè)生境下的細(xì)菌群落均含有芽孢桿菌屬（Bacillus）、節(jié)細(xì)菌屬（Arthrobacter）、桿菌屬（Lysinibacillus）和類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）。以芽孢桿菌屬為優(yōu)勢(shì)類群，其相對(duì)分離頻率分別為45.83%、27.00%、43.75%、38.61%;其次是節(jié)細(xì)菌屬，其相對(duì)分離頻率分別為10.83%、6.00%、13.54%、8.91%;再次是桿菌屬（Lysinibacillus），其相對(duì)分離頻率分別為6.67%、8.00%、8.33%、8.91%。4個(gè)生境下的類芽孢桿菌屬含量差異比較大，其相對(duì)分離頻率分別為5.00%、16.00%、6.25%、5.94%。

除去3個(gè)共有的細(xì)菌屬，TS-A茶樹(shù)根際土壤生境以鏈霉菌屬（Streptomyces）（10.83%）、土壤芽孢桿菌屬（Solibacillus）（4.17%）、鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium）（4.17%）為主要類群;TS-B茶樹(shù)根際土壤生境以短桿菌屬（Brevibacterium）（14.00%）、鏈霉菌屬（Streptomyces）（12.00%）、無(wú)色桿菌屬（Achromobacter）（5.00%）、Sphingobacterium（5.00%）為主要類群;TS-C茶樹(shù)根際土壤生境以不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）（7.29%）、Sinomonas（6.25%）、短芽孢桿菌屬（Brevibacillus）（5.21%）、Sphingobacterium（5.21%）為主要類群;GS-D茶樹(shù)根際土壤生境以鏈霉菌屬（Streptomyces）（7.92%）、產(chǎn)堿桿菌屬（Advenella）（6.93%）、無(wú)色桿菌屬（Achromobacter）（4.95%）、短芽孢桿菌屬（Brevibacillus）（4.95%）、類節(jié)桿菌屬（Paenarthrobacter）（3.96%）為主要類群。

TS-A分離得到細(xì)菌120株，TS-B分離得到細(xì)菌100株，TS-C分離得到細(xì)菌96株，GS-D分離得到細(xì)菌101株，從細(xì)菌的分離數(shù)量來(lái)說(shuō)，TS-A>GS-D>TS-B>TS-C。TS-A分離得到細(xì)菌15個(gè)屬，TS-B分離得到細(xì)菌10個(gè)屬，TS-C分離得到細(xì)菌11個(gè)屬，GS-D分離得到細(xì)菌16個(gè)屬，從細(xì)菌的屬的多樣性來(lái)說(shuō)，GS-D>TS-A>TS-C> TS-B。由此可知，茶樹(shù)品種一致，套種植物種類多的TS-A的細(xì)菌多樣性和細(xì)菌數(shù)量均大于套種植物種類少的TS-B，套種植物種類相似，茶樹(shù)品種多的TS-C的細(xì)菌多樣性大于茶樹(shù)品種單一的TS-B，但是分離得到的細(xì)菌數(shù)量上更少一些。古茶園GS-D細(xì)菌多樣性大于有機(jī)臺(tái)地茶園TS-A、TS-B和TS-C。

2.4? 不同生境茶園根際土壤真菌群落的屬間特征

由表3可知，TS-A、TS-B、TS-C、GS-D 4個(gè)生境下的真菌群落均含有青霉菌屬（Penicillium）和曲霉屬（Aspergillus）。以青霉

菌屬為優(yōu)勢(shì)類群，其相對(duì)分離頻率分別為45.45%、10.71%、34.62%、23.53%，其次是曲霉屬，其相對(duì)分離頻率分別為4.55%、7.14%、7.69%、35.29%。除去兩個(gè)共有的真菌屬，TS-A茶樹(shù)根際土壤生境以木霉屬（Trichoderma）（20.45%）、Paramyrothecium（6.82%）、Blastobotrys（4.55%）、Meyerozyma（4.55%）為主要類群;TS-B茶樹(shù)根際土壤生境以木霉屬（Trichoderma）（32.14%）、毛殼菌屬（Chaetomium）（16.07%）、毛霉屬（Mucor）（14.29%）、Meyerozyma（10.71%）為主要類群;TS-C茶樹(shù)根際土壤生境以籃狀菌屬（Talaromyces）（19.23%）、Meyerozyma（11.54%）、Purpureocillium（11.54%）、擬青霉屬（Paecilomyces）（7.69%）為主要類群;GS-D茶樹(shù)根際土壤生境種類比較單一，除了與其他3個(gè)生境共有的真菌屬，只剩下Blastobotrys（29.41%）和毛孢子菌屬（Trichosporon）（11.76%）兩個(gè)屬。

TS-A分離得到真菌44株，TS-B分離得到真菌56株，TS-C分離得到真菌26株，GS-D分離得到真菌17株，從真菌的分離數(shù)量來(lái)說(shuō)，TS-B>TS-A>TS-C>GS-D。TS-A分離得到真菌12個(gè)屬，TS-B分離得到真菌9個(gè)屬，TS-C分離得到真菌8個(gè)屬，GS-D分離得到真菌4個(gè)屬，從真菌的屬的多樣性來(lái)說(shuō)，TS-A>TS-B>TS-C>GS-D。由此可知，有機(jī)臺(tái)地茶園TS-A、TS-B、TS-C的真菌數(shù)量和多樣性都要高于古茶園GS-D。

3? 討論

研究表明，由于不同茶園種植模式的不同，茶園間的茶樹(shù)根際微生物種群產(chǎn)生了較大的差異。景邁古茶園的古樹(shù)茶樹(shù)齡古老，沒(méi)有經(jīng)過(guò)人工矮化，大部分生長(zhǎng)在原始叢林之中，在綠水青山、藍(lán)天白云和清新空氣的滋潤(rùn)下，全靠自然肥力生長(zhǎng)，遠(yuǎn)離了農(nóng)藥化肥的污染，其土壤細(xì)菌種群多樣性高于3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園。盧開(kāi)陽(yáng)等[7]也研究發(fā)現(xiàn)南糯山古茶山的細(xì)菌多樣性高于臺(tái)地茶，與本研究結(jié)論一致。本研究還發(fā)現(xiàn)3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園的真菌多樣性要高于古茶園，這說(shuō)明人為干預(yù)對(duì)茶樹(shù)根際土壤微生物種群的組成起到了一定的選擇作用。對(duì)3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園的研究結(jié)果表明，不同茶樹(shù)品種不同套種植物的茶園土壤微生物多樣性的差異較大，這說(shuō)明植物套種對(duì)土壤微生物有顯著影響[16]，賀國(guó)強(qiáng)等[17]在對(duì)煙草套種的研究中也得出相似的結(jié)論。

TS-A、TS-B、TS-C 3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園含有鞘氨醇桿菌屬（Sphingobacterium）、Meyerozyma、Purpureocillium、木霉屬（Trichoderma），而古茶園GS-D沒(méi)有。產(chǎn)堿桿菌屬（Advenella）、博代氏桿菌屬（Bordetella）、棒狀桿菌屬（Coryneb act erium）、魯梅爾芽胞桿菌屬（Rummeliibacillus）、單胞菌屬（Stenotrophomonas）、Tetrathiobacter、綠芽孢桿菌屬（Viridibacillus）、毛孢子菌屬（Trichosporon）是古茶園GS-D獨(dú)有的，TS-A、TS-B、TS-C 3個(gè)有機(jī)臺(tái)地茶園中沒(méi)有。TS-A、TS-B、TS-C、GS-D 4個(gè)生境下的微生物群落均含有節(jié)細(xì)菌屬（Arthrobacter）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、桿菌屬（Lysinibacillus）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）、曲霉屬（Aspergillus）和青霉菌屬（Penicillium），其中芽孢桿菌屬（Bacillus）里的蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis）可產(chǎn)生特異性殺蟲(chóng)蛋白，對(duì)多種農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)具有特異的殺蟲(chóng)活性，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中極具開(kāi)發(fā)潛力[18]，解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）對(duì)引起黑斑病病原菌有很好的拮抗作用，抑制率達(dá)到66.67%[19]，具有一定的肥效功能，可用于促生菌劑的研制[20]，本研究獲得了一批潛在的生防微生物菌株，為下一步的篩選利用提供了菌株資源。

本研究利用平板稀釋涂布分離，獲取純的培養(yǎng)物（微生物菌株），再通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)及分類鑒定等手段進(jìn)行鑒定，進(jìn)而分析確定純培養(yǎng)物歸屬。在研究得到4個(gè)不同生境微生物群落組成和差異的同時(shí)，保存了大量微生物菌種資源，這與免培養(yǎng)方法相比具有極大優(yōu)勢(shì)。后續(xù)研究將通過(guò)檢索相關(guān)微生物資源信息及應(yīng)用，進(jìn)一步探究人為干預(yù)與無(wú)干預(yù)古樹(shù)茶生境下具有特定功能的微生物變化對(duì)茶樹(shù)生長(zhǎng)及品質(zhì)的影響。如曲霉屬（Aspergillus）是普洱茶發(fā)酵過(guò)程中的優(yōu)勢(shì)微生物，對(duì)普洱茶品質(zhì)的影響很關(guān)鍵[21-22]，且黑曲霉（Aspergillus niger）可以促進(jìn)茶多糖的高效產(chǎn)出[23]，研究過(guò)程中在4個(gè)不同生境茶園中都分離得到了曲霉屬菌株，這些菌株是否參與普洱茶的發(fā)酵作用并對(duì)品質(zhì)有重要影響，也將是下一步的研究要點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)

[1]陳耀華， 張? 歐. 世界遺產(chǎn)視野下普洱景邁山古茶林的價(jià)值探究[J]. 熱帶地理， 2015， 35（4）： 541-548.

[2]Leff J W， Jones S E， Prober S M， et al. Consistent responses of soil microbial communities to elevated nutrient inputs in grasslands across the globe[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 2015， 112（35）： 10967-10972.

[3]Carini P， Marsden P J， Leff J W， et al. Relic DNA is abundant in soil and obscures estimates of soil microbial diver sity[J]. Nature Microbiology， 2017， 2（3）： 16242.

[4]Lange M， Eisenhauer N， Sierra C A， et al. Plant diversity increases soil microbial activity and soil carbon storage[J]. Nature Communications， 2015， 6： 6707.

[5]Walters W A， Jin Z， Youngblut N， et al. Large-scale repli cated field study of maize rhizosphere identifies heritable microbes[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 2018， 115（28）： 7368-7373.

[6]Bakker M G， Chaparro J M， Manter D K， et al. Impacts of bulk soil microbial community structure on rhizosphere mi crobiomes of Zea mays[J]. Plant and Soil， 2015， 392（1-2）： 115-126.

[7]盧開(kāi)陽(yáng)， 張?jiān)品澹?賈? 鰻， 等. 基于16S rRNA序列分析南糯山不同生境茶樹(shù)根際土壤細(xì)菌群落分布多樣性[J]. 昆明理工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2016， 41（2）： 89-95.

[8]Amann R L， Ludwig W， Schleiffer K H. Phylogenetic identi fication and in situ detection of individual microbial cells without cultivation[J]. Microbiological Reviews， 1995， 59（1）： 143-146.

[9]林? 生， 莊家強(qiáng)， 陳? 婷， 等. 福建安溪不同年限茶樹(shù)土壤養(yǎng)分與微生物Biolog功能多樣性的差異分析[J]. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2012， 20（11）： 1471-1477.

[10]Torsvik V， ?vreas L. Microbiol diversity and function in soil： From genes to ecosystems[J]. Current Opinion in MicRobi ology， 2002， 5（3）： 240-245.

[11]鄭雪芳， 蘇遠(yuǎn)科， 劉? 波， 等. 不同海拔茶樹(shù)根系土壤微生物群落多樣性分析[J]. 中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2010， 18（4）： 866-871.

[12]謝光新， 張榮先， 黃雪飛， 等. 不同生長(zhǎng)年限茶樹(shù)根際微生物分布的差異[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2012， 51（15）： 3176-3179.

[13]李晨晨， 呂? 杰， 楊瑞娟， 等. 普洱茶渥堆發(fā)酵過(guò)程中嗜熱細(xì)菌的分離和鑒定[J]. 北京化工大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2012， 39（2）： 74-78.

[14]楊瑞娟， 呂? 杰， 嚴(yán)? 亮， 等. 普洱茶渥堆發(fā)酵中嗜熱真菌的分離和鑒定[J]. 茶葉科學(xué)， 2011， 31（4）： 371-378.

[15]嚴(yán)? 亮， 楊瑞娟， 王橋美. 云南鐵皮石斛內(nèi)生菌的分離與鑒定[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)）， 2015， 30（5）： 760-765.

[16]周? 泉， 王龍昌， 邢? 毅， 等. 間作紫云英下油菜根際土壤微生物群落功能特征[J]. 應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)， 2018， 29（3）： 909-914.

[17]賀國(guó)強(qiáng)， 趙冬雪， 李恒全， 等. 煙草套作對(duì)土壤微生物群落多樣性的影響[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2019， 60（12）： 2200- 2205.

[18]宋海洋. 蘇云金芽胞桿菌在不同植物葉片分布差異的研究[D]. 合肥： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2019.

[19]李書(shū)穎， 朱天輝. 杜仲黑斑病菌（Pestalotiopsis trachicarpicola）拮抗細(xì)菌的分離和鑒定[J]. 微生物學(xué)通報(bào)， 2020， 47（2）： 469-480.

[20]趙衛(wèi)松， 郭慶港， 于穩(wěn)欠， 等. 解淀粉芽胞桿菌PHODB35的溶磷特性及其對(duì)番茄的促生作用[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2020（7）：1370-1383.

[21]方? 欣， 駱愛(ài)國(guó)， 涂? 青， 等. 普洱茶（熟茶）發(fā)酵過(guò)程各層間真菌群落的動(dòng)態(tài)變化[J]. 食品科技， 2019， 44（5）： 37-42.

[22]周才碧， 陳文品， 吳鐘玲， 等. 普洱茶優(yōu)勢(shì)菌株黑曲霉的分離及其功能和安全性研究[J]. 食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)， 2015， 6（3）： 1006-1010.

[23]王洪振， 馬存強(qiáng)， 任小盈， 等. 普洱茶發(fā)酵產(chǎn)茶多糖菌株的篩選與鑒定[J]. 食品工業(yè)科技， 2017， 38（7）： 156-160， 170.

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