• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同劑量促排卵藥物對(duì)小鼠焦慮行為和生育力的影響

    2021-06-11 06:57:00馮穎王芊芊王沖程兆俊周文靜章道會(huì)費(fèi)小陽
    浙江醫(yī)學(xué) 2021年9期
    關(guān)鍵詞:體外受精小鼠劑量

    馮穎 王芊芊 王沖 程兆俊 周文靜 章道會(huì) 費(fèi)小陽

    在輔助生殖技術(shù)(assisted reproductive technology,ART)周期中促排卵藥物的使用實(shí)質(zhì)上是對(duì)患者添加外源性激素。而性激素水平的改變與各時(shí)期女性的焦慮、抑郁狀態(tài)息息相關(guān)[1-2]。研究表明,焦慮狀態(tài)可以降低施行ART患者的獲卵數(shù)、正常受精率、優(yōu)胚率、妊娠率和胚胎種植率[3-4]。然而,目前關(guān)于促排卵藥物引起患者焦慮行為及對(duì)生育力的影響研究少見。本研究擬通過促排卵C7BL/6J近交系小鼠,模擬機(jī)體外源性接受超排卵藥物狀態(tài),并通過高架十字迷宮(elevated plus maze,EPM)實(shí)驗(yàn),利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐懼心理,形成動(dòng)物的矛盾沖突來評(píng)估動(dòng)物的焦慮行為[5-6];再進(jìn)行體外受精實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步分析不同劑量促排卵藥物對(duì)小鼠卵母細(xì)胞及胚胎質(zhì)量的影響,以期為ART周期中制定合理劑量的促排卵方案,減輕患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神壓力,改善生育結(jié)局提供參考。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 4周齡SPF級(jí)C57BL/6J雌鼠,購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,按照SFP級(jí)標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)于浙江大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障系統(tǒng),適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本研究經(jīng)浙江大學(xué)動(dòng)物福利倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)開展(ZJU20200135)。

    1.1.2 主要儀器與試劑 本實(shí)驗(yàn)所用儀器為EPM,Any-maze動(dòng)物行為分析系統(tǒng)6.0(美國Stoelting公司),體式解剖鏡(日本Olympus公司,型號(hào):SZ61),相差顯微鏡(日本Nikon公司,型號(hào):SM2645)等。所用試劑為注射用孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG)(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠,5000 U/瓶)、絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)(麗珠集團(tuán)麗珠制藥廠,5000 U/瓶)等。

    1.2 方法

    1.2.1 小鼠轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn) 48只4周齡的C57BL/6J雌鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,每天撫觸適應(yīng)環(huán)境,進(jìn)行編號(hào)。用Panlab小鼠轉(zhuǎn)棒疲勞測試儀(美國Harvard Apparatus公司,型號(hào):LE8205)對(duì)每只小鼠進(jìn)行檢測,設(shè)置轉(zhuǎn)速為20 r/min,時(shí)間為 5 min。觀察小鼠在轉(zhuǎn)棒上的運(yùn)動(dòng),以此評(píng)估小鼠運(yùn)動(dòng)能力。

    1.2.2 小鼠EPM實(shí)驗(yàn) 將小鼠逐只放入EPM測試箱中,實(shí)驗(yàn)人員在距離測試箱1 m處觀察記錄下述指標(biāo):(1)進(jìn)入開臂次數(shù);(2)開臂滯留時(shí)間;(3)進(jìn)入閉臂次數(shù);(4)閉臂滯留時(shí)間。每只小鼠測試5 min。將48只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分成4組(5、7.5、10、15 U劑量組),每組12只。促排卵前1 d下午4:00,4組小鼠腹腔注射0.9%氯化鈉注射液0.2 ml,30 min后,進(jìn)行EPM實(shí)驗(yàn),記錄數(shù)據(jù);促排卵當(dāng)天下午4:00,4組小鼠分別腹腔注射5、7.5、10、15 U的PMSG 0.2 ml[7](將PMSG加入0.9%氯化鈉溶液稀釋配用),48 h后注射相同劑量的hCG(將hCG加入0.9%氯化鈉溶液稀釋配用),30 min后進(jìn)行EPM實(shí)驗(yàn),記錄數(shù)據(jù)。

    1.2.3 小鼠體外受精實(shí)驗(yàn)

    1.2.3.1 卵母細(xì)胞采集 4組小鼠注射hCG 15 h后采用頸椎脫臼法處死,剖腹取出輸卵管放入盛有配子準(zhǔn)備液(modified human tubal fluid medium,mHTF)的表面皿中,顯微鏡下放入礦物油中,找到輸卵管膨大部,用解剖針稍刺破膨大部,將卵母細(xì)胞團(tuán)引出,并導(dǎo)入到mHTF培養(yǎng)滴(取卵前1 d,用直徑35 mm的培養(yǎng)皿做好,石蠟油覆蓋,放入37℃、含5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h)。

    1.2.3.2 精子采集 取交配過的性成熟C57BL/6J雄鼠1只,頸椎脫臼法處死,剪下附睪的上體部,用注射針刺破,擠出精子團(tuán)放入mHTF培養(yǎng)滴中,CO2培養(yǎng)箱中放置1 h再行體外受精。

    1.2.3.3 體外受精 將培養(yǎng)1 h的精子懸浮液在鏡下檢查精子活力和精子數(shù)量,然后用移液器按每個(gè)培養(yǎng)滴10μl精子懸浮液移入卵母細(xì)胞滴(每只小鼠卵母細(xì)胞單獨(dú)放 1滴),將精子終濃度調(diào)至(2~4)×106個(gè)/ml,放入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),6 h后取出,用移卵管將受精卵移入新的mHTF培養(yǎng)滴中清洗兩次,放回CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

    1.2.3.4 早期胚胎的形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià) 培養(yǎng)24 h后的受精卵做鏡檢,統(tǒng)計(jì)胚胎數(shù)、未受精卵及異常卵數(shù)。其中,正常胚胎和未受精卵形態(tài)正常,具有完整的透明帶,不含空泡和碎片,細(xì)胞質(zhì)明亮均一。未受精卵細(xì)胞不分裂。死亡卵顏色發(fā)暗并帶有細(xì)胞質(zhì)顆粒;細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含有碎片、部分細(xì)胞質(zhì)溶解的卵為畸形卵;死亡卵和畸形卵都屬于異常卵[8]。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用GraphPad Prism統(tǒng)計(jì)軟件;計(jì)量資料以表示,多組比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn),組內(nèi)促排卵前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn);P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 小鼠運(yùn)動(dòng)能力評(píng)估 適應(yīng)性飼養(yǎng)期間小鼠體格正常、毛色光亮、行為活動(dòng)正常。轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)顯示本實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動(dòng)能力均無異常。

    2.2 EPM實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    2.2.1 總體活動(dòng)情況 4組小鼠促排卵前、后總進(jìn)臂(進(jìn)入開臂+進(jìn)入閉臂)次數(shù)比較見表1。

    表1 4組小鼠促排卵前、后總進(jìn)臂次數(shù)比較(次)

    由表1可見,組內(nèi)比較,4組小鼠促排卵后總進(jìn)臂次數(shù)均較促排卵前減少(均P<0.05)。組間比較,促排卵前4組小鼠總進(jìn)臂次數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);促排卵后,15 U劑量組小鼠總進(jìn)臂次數(shù)明顯少于5 U劑量組、7.5 U劑量組(均P<0.05)。即促排卵會(huì)引起小鼠焦慮行為,且劑量越高,焦慮行為越明顯。

    2.2.2 開臂活動(dòng)情況 4組小鼠促排卵前、后進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間比較見表2。

    由表2可見,組內(nèi)比較,4組小鼠促排卵后進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間均較促排卵前減少(均P<0.05)。組間比較,促排卵前4組小鼠進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);促排卵后,10 U、15 U劑量組小鼠進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間均明顯少于5 U劑量組、7.5 U劑量組(均P<0.05)。

    表2 4組小鼠促排卵前、后進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間比較

    2.2.3 閉臂活動(dòng)情況 4組小鼠促排卵前、后進(jìn)入閉臂次數(shù)和閉臂滯留時(shí)間比較見表3。

    由表3可見,組內(nèi)比較,7.5 U劑量組、15 U劑量組小鼠促排卵后進(jìn)入閉臂次數(shù)均較促排卵前減少(均P<0.05),10U劑量組小鼠促排卵后閉臂滯留時(shí)間較促排卵前增加(P<0.05)。組間比較,促排卵前4組小鼠進(jìn)入閉臂次數(shù)和閉臂滯留時(shí)間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05);促排卵后,10 U劑量組小鼠閉臂滯留時(shí)間明顯長于5 U劑量組、7.5 U劑量組(均P<0.05)。

    表3 4組小鼠促排卵前、后進(jìn)入閉臂次數(shù)和閉臂滯留時(shí)間比較

    2.3 4組小鼠體外受精結(jié)果比較 見表4。

    由表4可見,4組小鼠平均卵母細(xì)胞數(shù)、異常卵率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05),10 U劑量組卵母細(xì)胞數(shù)高于5 U劑量組、7.5 U劑量組、15 U劑量組(均P<0.05),且異常卵率較5 U劑量組和7.5 U劑量組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。15 U劑量組卵母細(xì)胞數(shù)明顯低于其他3組(均P<0.05),且異常卵率最高,明顯高于其他3組(均P<0.05)。這表明10 U劑量可以獲得最多的卵母細(xì)胞,且不增加異常卵率,更高劑量的促排藥物反而會(huì)抑制卵泡的發(fā)育。進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),10 U劑量組的受精率明顯高于5 U劑量組(P<0.05),10 U劑量組的體外受精平均胚胎數(shù)也最高,明顯高于其他3組(均P<0.05),而15 U劑量組平均胚胎數(shù)最低,明顯低于其他3組(均P<0.05)。這表明10 U劑量可以獲得最多的胚胎。

    表4 4組小鼠體外受精結(jié)果比較

    3 討論

    本研究發(fā)現(xiàn)促排卵藥物刺激會(huì)使小鼠產(chǎn)生焦慮行為,同時(shí)過量的促排卵藥物對(duì)卵子質(zhì)量也有影響。宗紹波等[9]指出,EPM中總進(jìn)臂次數(shù)、進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間的復(fù)測性度較高,更能體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物趨近-規(guī)避沖突的行為結(jié)果,是評(píng)價(jià)動(dòng)物焦慮表現(xiàn)的主要指標(biāo)。因此,本研究重點(diǎn)分析了以上數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)最低5 U劑量組和最高15 U劑量組小鼠的總進(jìn)臂次數(shù)、進(jìn)入開臂次數(shù)和開臂滯留時(shí)間均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果表明,促排卵藥物會(huì)使小鼠會(huì)產(chǎn)生焦慮行為,而且隨著劑量的增加,小鼠焦慮行為更甚。其他研究者也發(fā)現(xiàn),C57BL/6J雌鼠雌激素水平的改變會(huì)影響小鼠的焦慮狀態(tài)[10];而在老年的C57BL/6J雌鼠中添加雌激素可以改善小鼠的焦慮及抑郁狀態(tài)[11]。

    PMSG/hCG和雌激素均可以在卵泡發(fā)育過程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。因此本研究通過體外受精實(shí)驗(yàn),研究了促排卵藥物對(duì)小鼠生育力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),各組小鼠平均卵母細(xì)胞數(shù)和平均胚胎數(shù)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。其中,10 U劑量組平均卵母細(xì)胞數(shù)、平均胚胎數(shù)均顯著高于其他3組,可能為C57BL/6J小鼠最佳超排劑量。而增加促排卵藥物劑量至15 U后,小鼠平均卵母細(xì)胞數(shù)和平均胚胎數(shù)均下降。此外,不同劑量促排卵后小鼠異常卵率也存在差異;其中,15 U劑量組小鼠異形卵率最高。因此筆者推測,隨著促排卵藥物劑量的增加,小鼠卵細(xì)胞的質(zhì)量明顯下降,異常卵數(shù)和異常卵裂率均上升。Ertzeid等[12]也提出,卵巢刺激會(huì)損害小鼠卵母細(xì)胞/胚胎質(zhì)量以及子宮環(huán)境,因此筆者提倡使用較小劑量的PMSG/hCG對(duì)小鼠進(jìn)行促數(shù)排卵。

    綜上所述,PMSG/hCG促排卵藥物會(huì)使小鼠產(chǎn)生焦慮行為,并且隨著促排卵藥物劑量的增加焦慮行為也更明顯;此外,高劑量的促排卵藥物會(huì)降低卵細(xì)胞的質(zhì)量,增加異常卵的風(fēng)險(xiǎn)。本研究為ART中促排卵藥物對(duì)患者情緒的影響提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù),也為制定合理劑量的促排卵方案提供參考。

    猜你喜歡
    體外受精小鼠劑量
    課堂內(nèi)外·初中版(科學(xué)少年)(2023年10期)2023-12-10 00:43:06
    ·更正·
    90Sr-90Y敷貼治療的EBT3膠片劑量驗(yàn)證方法
    小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
    米小鼠和它的伙伴們
    子宮血流測定在體外受精新鮮移植周期中的應(yīng)用
    體外受精-胚胎移植妊娠后分娩情況隨訪的準(zhǔn)確性研究
    加味四逆湯對(duì)Con A肝損傷小鼠細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用
    高劑量型流感疫苗IIV3-HD對(duì)老年人防護(hù)作用優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)劑量型
    卵巢早衰閉經(jīng)4年接受贈(zèng)卵體外受精妊娠成功一例報(bào)告
    国产私拍福利视频在线观看| 国产av一区在线观看免费| 一级毛片精品| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 在线观看午夜福利视频| 午夜久久久在线观看| 国产熟女xx| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久久国产成人精品二区| 我的亚洲天堂| 日韩免费av在线播放| 亚洲第一青青草原| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 18禁观看日本| 波多野结衣高清作品| 丝袜人妻中文字幕| 国产av一区在线观看免费| 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品久久久久久精品电影 | 亚洲熟女毛片儿| av欧美777| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产激情久久老熟女| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产三级在线视频| 香蕉丝袜av| 欧美色视频一区免费| 91大片在线观看| 日本熟妇午夜| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久香蕉国产精品| aaaaa片日本免费| 中文字幕高清在线视频| 午夜福利高清视频| 亚洲男人天堂网一区| 久久精品成人免费网站| 一本精品99久久精品77| 亚洲精品国产区一区二| av有码第一页| 久99久视频精品免费| 怎么达到女性高潮| 日韩欧美 国产精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲成人久久爱视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久香蕉精品热| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 婷婷亚洲欧美| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久国产成人免费| 一级毛片女人18水好多| 婷婷精品国产亚洲av在线| videosex国产| 中出人妻视频一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| 免费在线观看完整版高清| 亚洲五月婷婷丁香| 免费观看精品视频网站| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品一区二区三区四区五区乱码| 美国免费a级毛片| 免费看a级黄色片| 午夜福利免费观看在线| x7x7x7水蜜桃| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产精品影院久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 精品日产1卡2卡| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲免费av在线视频| 亚洲av片天天在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 午夜亚洲福利在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 欧美不卡视频在线免费观看 | 免费搜索国产男女视频| 午夜激情福利司机影院| 日本在线视频免费播放| 亚洲精品国产区一区二| 色综合站精品国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久国产精品影院| 免费电影在线观看免费观看| 午夜精品在线福利| 热re99久久国产66热| 久久久久亚洲av毛片大全| 天天添夜夜摸| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 一进一出好大好爽视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品一区av在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 十分钟在线观看高清视频www| 美国免费a级毛片| 美女大奶头视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲三区欧美一区| 久久香蕉国产精品| aaaaa片日本免费| 超碰成人久久| 天天添夜夜摸| 国产亚洲欧美精品永久| 亚洲精品国产区一区二| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产伦一二天堂av在线观看| 日本 av在线| 老鸭窝网址在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 丝袜在线中文字幕| 国产三级黄色录像| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 美国免费a级毛片| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美色视频一区免费| 国产激情欧美一区二区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 俺也久久电影网| 国产99久久九九免费精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产黄色小视频在线观看| 婷婷丁香在线五月| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久国产a免费观看| 很黄的视频免费| 香蕉久久夜色| 一区福利在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 在线观看一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 自线自在国产av| av在线天堂中文字幕| 91麻豆av在线| 久久国产精品影院| 亚洲av电影在线进入| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 少妇 在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久草成人影院| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲中文av在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久久久久久久久黄片| 亚洲免费av在线视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲av成人av| 色综合欧美亚洲国产小说| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品二区激情视频| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 久久久久久久午夜电影| 成人亚洲精品av一区二区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲无线在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 悠悠久久av| 日韩欧美免费精品| 国产在线精品亚洲第一网站| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 一本久久中文字幕| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美在线黄色| 久久香蕉激情| 国产精品免费视频内射| or卡值多少钱| 最新美女视频免费是黄的| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久亚洲真实| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲精品一区av在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产亚洲精品av在线| av欧美777| 久久香蕉激情| 一级黄色大片毛片| 久久久精品欧美日韩精品| 精品久久久久久成人av| 身体一侧抽搐| 久久亚洲真实| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲,欧美精品.| 亚洲欧美激情综合另类| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美激情极品国产一区二区三区| 级片在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品久久视频播放| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲熟妇熟女久久| 正在播放国产对白刺激| av中文乱码字幕在线| 麻豆av在线久日| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 91老司机精品| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲人成电影免费在线| av免费在线观看网站| 国产精品日韩av在线免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 成人午夜高清在线视频 | 国产精品av久久久久免费| 亚洲第一电影网av| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产麻豆成人av免费视频| 日韩精品中文字幕看吧| 俄罗斯特黄特色一大片| 窝窝影院91人妻| 久热这里只有精品99| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品1区2区在线观看.| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 校园春色视频在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 最近最新免费中文字幕在线| 精品高清国产在线一区| 一级毛片精品| 宅男免费午夜| 午夜福利成人在线免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 亚洲第一电影网av| 美女免费视频网站| 国内精品久久久久久久电影| 成人av一区二区三区在线看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 无限看片的www在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日本五十路高清| 一区二区三区精品91| 国产伦在线观看视频一区| 日本精品一区二区三区蜜桃| svipshipincom国产片| 亚洲精品在线观看二区| 久99久视频精品免费| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲av第一区精品v没综合| 成人欧美大片| 亚洲av美国av| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品电影一区二区三区| 欧美激情 高清一区二区三区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 色哟哟哟哟哟哟| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲av电影在线进入| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美午夜高清在线| 精品午夜福利视频在线观看一区| 午夜免费成人在线视频| 操出白浆在线播放| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品 国内视频| 韩国av一区二区三区四区| 亚洲成人国产一区在线观看| 校园春色视频在线观看| 久久久久久人人人人人| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 特大巨黑吊av在线直播 | 青草久久国产| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美又色又爽又黄视频| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲成人久久性| 久久精品91无色码中文字幕| 国产成+人综合+亚洲专区| 十八禁网站免费在线| 国产精品久久电影中文字幕| 国产成人系列免费观看| xxxwww97欧美| 日本五十路高清| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品1区2区在线观看.| 国产亚洲精品久久久久5区| 一级毛片精品| 国产午夜精品久久久久久| 天堂影院成人在线观看| 国产高清激情床上av| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲真实伦在线观看| 欧美色视频一区免费| 麻豆成人av在线观看| 免费观看人在逋| 99国产精品99久久久久| 久久久久久国产a免费观看| 校园春色视频在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 露出奶头的视频| 精品久久久久久成人av| 午夜福利高清视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 人人澡人人妻人| 亚洲真实伦在线观看| 免费看十八禁软件| 亚洲av片天天在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 免费看十八禁软件| 国产99久久九九免费精品| 亚洲真实伦在线观看| 黄频高清免费视频| 日本在线视频免费播放| 黄色 视频免费看| 色综合站精品国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 欧美性猛交黑人性爽| 色av中文字幕| 动漫黄色视频在线观看| 免费高清在线观看日韩| 99热这里只有精品一区 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 精品欧美一区二区三区在线| 国产视频一区二区在线看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产精品日韩av在线免费观看| 成人三级做爰电影| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲九九香蕉| 高清在线国产一区| 亚洲全国av大片| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲五月色婷婷综合| 99在线人妻在线中文字幕| 女人被狂操c到高潮| 一二三四在线观看免费中文在| 丰满的人妻完整版| 最近在线观看免费完整版| 中文资源天堂在线| 男人舔女人下体高潮全视频| a在线观看视频网站| 看黄色毛片网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 国产人伦9x9x在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩欧美免费精品| 久久久久久久久免费视频了| 久久国产乱子伦精品免费另类| 1024手机看黄色片| 亚洲精品国产区一区二| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 999久久久精品免费观看国产| 黄片大片在线免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 亚洲国产毛片av蜜桃av| 十分钟在线观看高清视频www| 国产av在哪里看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| ponron亚洲| 99在线视频只有这里精品首页| 身体一侧抽搐| 亚洲成人久久爱视频| www.自偷自拍.com| 国产麻豆成人av免费视频| 久久精品人妻少妇| 在线av久久热| 午夜福利欧美成人| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 色尼玛亚洲综合影院| 婷婷六月久久综合丁香| 久久人妻av系列| 亚洲第一青青草原| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产黄a三级三级三级人| 丁香六月欧美| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 免费av毛片视频| 亚洲第一电影网av| 欧美黑人欧美精品刺激| 日日爽夜夜爽网站| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产伦在线观看视频一区| 香蕉丝袜av| 日本熟妇午夜| 久久精品91无色码中文字幕| 日本成人三级电影网站| 午夜免费激情av| 动漫黄色视频在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 精品国产一区二区三区四区第35| 国产激情久久老熟女| 婷婷六月久久综合丁香| 精品第一国产精品| 波多野结衣高清作品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 色播在线永久视频| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 色播亚洲综合网| 黄色成人免费大全| 欧美乱妇无乱码| 少妇粗大呻吟视频| 国产视频内射| 美女大奶头视频| www.精华液| 一个人免费在线观看的高清视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| 成在线人永久免费视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 国产av又大| 嫩草影视91久久| 亚洲免费av在线视频| 美女免费视频网站| 伦理电影免费视频| 亚洲熟妇熟女久久| 色播在线永久视频| 满18在线观看网站| 亚洲五月色婷婷综合| 国产亚洲av嫩草精品影院| 一进一出抽搐gif免费好疼| 午夜老司机福利片| 村上凉子中文字幕在线| 黄色女人牲交| 国产人伦9x9x在线观看| 十八禁网站免费在线| 久久国产亚洲av麻豆专区| 亚洲性夜色夜夜综合| 99国产精品一区二区三区| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产极品粉嫩免费观看在线| 村上凉子中文字幕在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 男女床上黄色一级片免费看| 热re99久久国产66热| 欧美激情高清一区二区三区| 国语自产精品视频在线第100页| 又大又爽又粗| 午夜福利高清视频| www国产在线视频色| 一区二区日韩欧美中文字幕| 我的亚洲天堂| 黄色视频,在线免费观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 又大又爽又粗| 精品电影一区二区在线| www国产在线视频色| 两个人免费观看高清视频| 国产精品一区二区免费欧美| 91成年电影在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产视频一区二区在线看| 午夜精品久久久久久毛片777| 最好的美女福利视频网| √禁漫天堂资源中文www| 久久中文看片网| 免费一级毛片在线播放高清视频| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 欧美色视频一区免费| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产成年人精品一区二区| 精品高清国产在线一区| 大型av网站在线播放| 亚洲成人免费电影在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产又色又爽无遮挡免费看| 亚洲人成网站高清观看| 露出奶头的视频| 国产精品国产高清国产av| 高清毛片免费观看视频网站| 韩国精品一区二区三区| 欧美成人免费av一区二区三区| 18禁国产床啪视频网站| 国产激情偷乱视频一区二区| 精品免费久久久久久久清纯| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 97碰自拍视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品亚洲一级av第二区| bbb黄色大片| 丁香欧美五月| 最近最新中文字幕大全电影3 | 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产精品精品国产色婷婷| 国语自产精品视频在线第100页| 1024手机看黄色片| 亚洲国产精品sss在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 男女之事视频高清在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 无限看片的www在线观看| 国产精品九九99| 我的亚洲天堂| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 亚洲久久久国产精品| 人人澡人人妻人| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 99精品在免费线老司机午夜| 国产午夜精品久久久久久| 一级毛片高清免费大全| videosex国产| 国产亚洲精品av在线| 欧美日韩乱码在线| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产精品成人综合色| 美女国产高潮福利片在线看| av视频在线观看入口| 欧美精品亚洲一区二区| 免费看十八禁软件| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线观看日韩欧美| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品亚洲av一区麻豆| 999精品在线视频| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产91精品成人一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 啦啦啦 在线观看视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费观看人在逋| 色婷婷久久久亚洲欧美| 麻豆av在线久日| 岛国在线观看网站| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲一区中文字幕在线| 天天添夜夜摸| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久精品91无色码中文字幕| 熟女电影av网| 91国产中文字幕| 老汉色∧v一级毛片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成人国语在线视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 黄色丝袜av网址大全| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 国产熟女xx| 69av精品久久久久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 午夜精品在线福利| 亚洲 国产 在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| avwww免费| 观看免费一级毛片| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美在线一区亚洲| 日韩中文字幕欧美一区二区| av福利片在线| 免费看a级黄色片| 日韩欧美国产在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 免费在线观看影片大全网站| √禁漫天堂资源中文www| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美三级亚洲精品| 欧美一级毛片孕妇| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲三区欧美一区| 精品日产1卡2卡| a级毛片a级免费在线| 亚洲精品在线美女| 亚洲精品国产一区二区精华液| videosex国产| 久久精品91蜜桃| 婷婷丁香在线五月| 露出奶头的视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 久久久精品欧美日韩精品| 国产一级毛片七仙女欲春2 |