血清miR-223與急性胰腺炎進展的相關(guān)性研究

徐冰冰 彭登云 王草原

（漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第二附屬醫(yī)院ICU，河南 漯河462300）

急性胰腺炎（Acute pancreatitis，AP）是常見的胰腺壞死性炎癥，表現(xiàn)為胰腺腺泡發(fā)炎、浮腫和壞死等，常伴有肝、肺損傷等并發(fā)癥[1]。急性胰腺炎的最初病理變化是胰腺內(nèi)蛋白酶激活并引起胰腺腺泡細胞損傷，導(dǎo)致炎癥細胞和細胞因子積聚，隨后發(fā)生系統(tǒng)性級聯(lián)反應(yīng)[2]。在急性胰腺炎的嚴重病例中，炎性細胞因子的釋放可引起全身炎性反應(yīng)綜合征，嚴重時出現(xiàn)多器官功能衰竭和患者死亡。因此，急性胰腺炎的嚴重程度取決于胰腺腺泡細胞死亡和炎性損傷。

MicroRNA（miRNA）是小的非編碼RNA片段，可通過抑制mRNA翻譯成蛋白質(zhì)或促進mRNA降解而參與轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。最近研究表明，血漿或血清中的miRNA可以被穩(wěn)定地檢測出來，并用作疾病的診斷和預(yù)后標(biāo)志物[3]。越來越多的證據(jù)表明，miRNA的表達與AP的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)，這一證據(jù)也為AP的診斷、發(fā)病機制和最終的基因治療提供了新的方法[4]。miR-223首先在造血系統(tǒng)中鑒定出來，并顯示在髓樣中特異性表達，它在髓樣分化過程中被誘導(dǎo)，并受多種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控，可通過調(diào)節(jié)多種基因轉(zhuǎn)錄微調(diào)骨髓細胞活性并在炎性疾病中發(fā)揮多種作用[5]。而對于miR-223在急性胰腺炎的發(fā)生、進展中的作用研究甚少，本研究重點分析miR-223與急性胰腺炎進展相關(guān)性，為急性胰腺炎的發(fā)生、進展提供新的生物標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年1月至2019年1月本院收治的68例AP住院患者。依據(jù)急性生理與慢性健康評分II（Acute physiology and chronic health evaluation，APACHEII）、Ranson評分和急性胰腺炎嚴重程度床邊指數(shù)（Beside index of severity in acute pancreatitis，BISAP）評分評估疾病的嚴重程度對患者進行分組，其中APACHE II評分＜8，Ranson評分＜3且Balthazar CT分類為A，B或C水平且未伴有器官衰竭和局部或全身并發(fā)癥的患者為輕度組（Mild group，MAP），共37例，其中男21例，女16例；年齡26-79歲，平均年齡46.42±11.36歲；其余為重度組（Severe group，SAP），共31例，其中男17例，女14例；年齡27-79歲，平均年齡46.37±11.27歲。另外，招募了30名同期進行例行健康檢查且沒有疾病跡象的受試者作為對照組，其中男16例，女14例，年齡26-78歲，平均年齡45.35±12.17歲；三組成員的性別、年齡等一般資料無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。根據(jù)赫爾辛基宣言，所有患者均簽署知情同意書，并經(jīng)院倫理委員會批準。

納入標(biāo)注：診斷AP需要滿足以下三個臨床特征中任意兩個：符合AP的腹痛；淀粉酶和/或脂肪酶的水平大于正常上限的3倍；腹部計算機斷層掃描（Computed tomography，CT）檢查中AP的特征。

排除標(biāo)準：惡性腫瘤患者；自身免疫疾病和糖尿病患者；孕產(chǎn)婦。

1.2 血清miR-223水平檢測

抽取入組后患者空腹外周靜脈血10 mL，室溫下4000 rpm離心15 min，收集血漿，-80℃凍存。Trizol法提取總RNA，并測定RNA的純度。RT逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA轉(zhuǎn)為為cDNA，以U6為內(nèi)參基因進行qPCR反應(yīng)，使用SYBRH Select Master Mix for CFX（Invitrogen）進行實時定量PCR。miR-223和U6特異引物序列由北京天根生化技術(shù)有限公司提供，引物序列：miR-223上游序列5′-ACACCAGGGGAAAAGTGTGG-3′，下游序列：5′-AAGACTATTGCGCCCCCATC-3′，產(chǎn)物大小93 bp；內(nèi)參U6上游引物：5′-CATGGCGGCTAACGCTACTA-3′，下游引物：5′- TACATTTCCCCACACTCGGC -3′，長度150 bp。循環(huán)條件：95 ℃ 5 min，95 ℃ 15 s，60℃ 60 s，72℃ 30 s，共40個循環(huán)。采用2-△△Ct法分析miR-223相對表達量。

1.3 觀察指標(biāo)

患者入院后即進行改良的CT嚴重指數(shù)（Modified CT severity index，MCTSI）評分、BISAP評分、Ranson評分、APACHEII。其中MCTSI分為3級，I級：0 -2分；II級：4-6分；III級：8-10分；BISAP評分＜3分為輕癥急性胰腺炎，≧3分為中重癥急性胰腺炎；Ranson評分＜3分為輕癥急性胰腺炎，≧3分為重癥急性胰腺炎；APACHEⅡ評分評分＜8分為輕癥急性胰腺炎，≧8分為重癥急性胰腺炎。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS21.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準差（±SD）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q法；計數(shù)資料以例或率（%）表示，比較采用χ2檢驗，繪制ROC曲線，曲線下面積（Area under curve，AUC）比較采用Z檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清miR-223相對表達水平

SAP組miR-223相對表達水平為0.72±0.13，MAP組為1.87±0.37，對照組為2.57±0.56，SAP組、MAP組患者的血清miR-223相對表達水平明顯低于對照組，而SAP組血清miR-223相對表達水平明顯低于MAP組（F=21.474，P＜0.05），見圖1。

圖1 血清miR-223相對表達水平

2.2 血清miR-223相對表達水平與患者臨床特征的關(guān)系

血清miR-223與MCTSI評分、BISAP評分、Ranson評分、APACHEII存在相關(guān)性（P＜0.01），而與性別、年齡無相關(guān)性（P＞0.05），見表1。

2.3 ROC曲線下面積分析

miR-223診斷AP 的ROC曲線下面積（0.890）明顯高于APACHEII（0.781）、BISAP評分（0.698）、MCTSI評分（0.615）（Z=1.983、2.128、2.763、4.192，P＜0.05）；miR-223診斷AP的AUC高于Ranson評分，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見圖2。

3 討論

急性胰腺炎是臨床上常見的胰腺疾病，患者胰腺中胰蛋白酶早期活化，導(dǎo)致胰腺產(chǎn)生自消化。AP的發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，涉及許多和疾病相關(guān)的基本因素，例如酒精，吸煙，高甘油三酯血癥等。盡管大多數(shù)AP屬于輕度自限性，但10%至20%的患者會經(jīng)歷嚴重的急性胰腺炎，這是一種危及生命的急性腹部疾病，死亡率約為20%[6]。因此，AP的早期診斷和評估對于醫(yī)生為患者開出正確的療法和藥物至關(guān)重要。

血清中含有大量源自各種組織/器官的穩(wěn)定miRNA，與目前用于癌癥和其他疾病的早期診斷的檢測方法相比，具有更高的靈敏度和特異性。越來越多的證據(jù)表明，miRNA的表達與AP的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，這一證據(jù)也為AP的診斷、發(fā)病機制和最終的基因治療提供了新的方法[7]。miR-223屬于一種多功能的miRNA，可以調(diào)節(jié)腸道炎癥過程中免疫應(yīng)，降低實驗性結(jié)腸炎NLRP3水平和IL-1β釋放[8]，還可通過抑制NLRP3炎性小體活化來抑制巨噬細胞活化和肺部炎癥[9]。

在本研究分析MAP、SAP和對照組參與者的血清miR-223水平結(jié)果顯示，AP組患者的血清miR-223水平明顯高于對照組，而SAP組明顯高于MAP，提示miR-223參與了AP的發(fā)生和進展，調(diào)控了機體的炎癥反應(yīng)，并在機體中特異性表達。而且miR-223水平與患者的疾病的嚴重程度存在一定的相關(guān)性，有可能成為判斷AP嚴重程度的預(yù)測性生物標(biāo)記物。本文通過ROC分析發(fā)現(xiàn)miR-223診斷AP的ROC曲線下面積明顯高于APACHEII、BISAP評分、MCTSI評分，說明miR-223診斷AP具有更高敏感性，可以作為診斷AP嚴重程度的特異性的生物標(biāo)記物，對AP的預(yù)防和治療具有重要意義。

總之，miR-223在AP的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，于AP患者的嚴重程度密切相關(guān)，可以作為診斷AP嚴重程度的生物標(biāo)記物，值得臨床推廣。