5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體啟動(dòng)子區(qū)基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量的關(guān)系

閆盼　　王萍　　李靜　　王晟東　王姝琪　　方悅　　宋明芬

1.杭州市第七人民醫(yī)院? 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310013;2.杭州市第七人民醫(yī)院? 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心精神科，浙江杭州 310013;3.杭州市第七人民醫(yī)院? 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬精神衛(wèi)生中心檢驗(yàn)科，浙江杭州 310013

[摘要] 目的 探討5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體啟動(dòng)子區(qū)（5-HTTLPR）基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量的關(guān)系。 方法 選取2018年10月至2019年10月在本院從事輪班制工作的101例護(hù)士為研究對(duì)象，根據(jù)匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)量表（PSQI）總分評(píng)定睡眠質(zhì)量，其中睡眠障礙組（>7分）45例，睡眠正常組（≤7分）56例。采集血液，測定5-HTTLPR基因多態(tài)性，比較兩組各基因型及各等位基因的頻率分布，分析5-HTTLPR基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性。 結(jié)果 睡眠障礙組輪班護(hù)士主觀睡眠質(zhì)量、入睡時(shí)間、睡眠時(shí)間、睡眠效率、睡眠障礙、日間功能障礙各因子得分及總分均明顯高于睡眠正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;睡眠障礙組與睡眠正常組5-HTTLPR基因型及等位基因頻率分布比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中睡眠障礙組SS基因型和S等位基因頻率分別為64.44%、78.89%，均高于睡眠正常組（41.07%、60.71%），SS基因型者發(fā)生睡眠障礙的危險(xiǎn)性是LL型的4.623倍（95%CI：1.153～18.542），S等位基因攜帶者發(fā)生睡眠障礙的危險(xiǎn)性是L等位基因攜帶者的3.929倍（95%CI：1.024～15.065）。 結(jié)論 5-HTTLPR基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量有關(guān)，S等位基因可能是輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的易感基因。

[關(guān)鍵詞] 輪班護(hù)士;睡眠質(zhì)量;5-HTTLPR;基因多態(tài)性

[中圖分類號(hào)] R749.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2021）12-0167-04

Relation of gene polymorphisms in the 5-hydroxytryptamine transporter-linked promoter region and sleep quality of nurses taking shifts

YAN Pan1? ?WANG Ping2? ?LI Jing1? ?WANG Shengdong1? ?WANG Shuqi1? ?FANG Yue3? ?SONG Mingfen1

1.Laboratory of Molecular Biology， Hangzhou Seventh People′s Hospital， Affiliated Mental Health Centre， Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou? ?310013， China; 2.Department of Psychiatry， Hangzhou Seventh People′s Hospital， Affiliated Mental Health Centre， Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou 310013， China; 3.Department of Clinical Laboratory， Hangzhou Seventh People′s Hospital， Affiliated Mental Health Centre， Zhejiang University School of Medicine， Hangzhou? ?310013， China

[Abstract] Objective To explore the relationship between gene polymorphism of 5-hydroxytryptamine transporter-linked promoter region（5-HTTLPR） and the sleep quality of nurses taking shifts. Methods A total of 101 nurses who were working in shifts in our hospital from October 2018 to October 2019 were selected as the study subjects. The total score of the Pittsburgh Sleep Quality Index Scale（PSQI） was used to evaluate sleep quality. Among them， 45 cases were in the sleep disorder group（>7 points） and 56 cases were in the sleep normal group（≤7 points）. The blood was collected and the 5-HTTLPR gene polymorphism was determined. The frequency distribution of each genotype and allele was compared between the two groups， and the correlation between 5-HTTLPR gene polymorphism and sleep quality of nurses taking shifts was analyzed. Results The scores of subjective sleep quality， time spent falling into sleep， sleep duration， sleep efficiency， sleep disturbance， and daytime dysfunction and total scores of nurses taking shifts in the sleep disorder group were significantly higher than those in the sleep normal group， and the differences were statistically significant（P<0.05）; frequency distribution of 5-HTTLPR genotype and allele were compared between the sleep disorder group and the sleep normal group， and the differences were statistically significant（P<0.05）. Among them， the SS genotype and S allele frequencies in the sleep disorder group were 64.44% and 78.89%， which were higher than those in the sleep normal group（41.07% and 60.71%）. People with SS genotype were 4.623 times as risky to have sleep disorders as those with LL genotype（95%CI： 1.153-18.542）， and carriers of S alleles were 3.929 times as risky to have sleep disorders as carriers of L alleles（95%CI： 1.024-15.065）. Conclusion The 5-HTTLPR gene polymorphism is related to the sleep quality of nurses taking shifts. The S allele may be a susceptibility gene for sleep disorders in those nurses.

[Key words] Nurses taking shifts; Sleep quality; 5-HTTLPR; Gene polymorphism

近年來，因睡眠質(zhì)量問題所帶來的醫(yī)療費(fèi)用增加和工作效率下降已成為社會(huì)廣泛關(guān)注的公共衛(wèi)生問題[1]。輪班護(hù)士由于工作環(huán)境及服務(wù)對(duì)象特殊，晝夜節(jié)律紊亂，其睡眠問題更是不容忽視[2]。以往研究表明，年齡、婚姻狀況、倒夜班年限等可能是影響護(hù)士睡眠質(zhì)量的因素[3]，但在這些因素相近的情況下，護(hù)士群體中不同個(gè)體的睡眠質(zhì)量也有所差異。近年來，相關(guān)研究提示5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體啟動(dòng)子區(qū)（Serotonin transporter-linked promoter region，5-HTTLPR）基因多態(tài)性與失眠易感性有關(guān)[4-5]，因此5-HTTLPR基因多態(tài)性可能是引起輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量個(gè)體差異的重要原因，但目前尚無相關(guān)報(bào)道。故本研究以睡眠障礙的高發(fā)人群輪班護(hù)士為研究對(duì)象，旨在探討5-HTTLPR基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量的關(guān)系，尋找輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的易感性基因，為睡眠障礙的機(jī)制研究提供線索，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年10月至2019年10月在本院從事輪班制工作的護(hù)士為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①從事輪班制護(hù)理工作至少6個(gè)月;②女性;③年齡18～50歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重軀體疾病或精神心理疾病者;②酒精、藥物、濃茶和濃咖啡依賴者;③正在服用治療失眠藥物者;④妊娠或哺乳期婦女。本研究經(jīng)杭州市第七人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查通過，所有研究對(duì)象簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 問卷調(diào)查? 自行設(shè)計(jì)調(diào)查表，收集輪班護(hù)士的基本信息（性別、年齡、婚姻狀況、文化程度、職稱、輪班年限、夜班頻率等）、生活習(xí)慣（吸煙史、飲酒史、體育鍛煉情況等）、疾病情況（各類急慢性軀體疾?。?/p>

1.2.2 睡眠質(zhì)量評(píng)定? 由經(jīng)培訓(xùn)的心理測量師使用匹茲堡睡眠質(zhì)量指數(shù)量表（Pittsburgh sleep quality index，PSQI）判定輪班護(hù)士的睡眠狀況[6]。該量表由主觀睡眠質(zhì)量、入睡時(shí)間、睡眠時(shí)間、睡眠效率、睡眠障礙、催眠藥物、日間功能障礙7個(gè)成分構(gòu)成。每個(gè)因子成分按0～4級(jí)評(píng)定，累積各因子得分為PSQI總分，分值越高說明睡眠質(zhì)量越差，總分為0～21分，其中≤7分為正常組，>7分為睡眠障礙組。

1.2.3 5-HTTLPR基因型檢測? 所有受試者抽取外周靜脈血2 mL，加入乙二胺四乙酸抗凝，1周內(nèi)抽提DNA，于-80℃保存待用。通過GenBank查找5-HTTLPR的引物序列，由上海生工生物工程股份有限公司合成，上游引物：5-GGCGTTGCCGCTCTGAATGC-3，下游引物：5-GAGGGACTGAGCTGGACAACCAC-3。PCR反應(yīng)體系：DNA模板1 μL，上下游引物各1 μL，dNTP 4 μL，2×GC bufffer I 12.5 μL，Taq酶0.25 μL，ddH2O 5.25 μL。PCR反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性1 min，62℃退火30 s，72℃延伸1 min，總共35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。將上述PCR產(chǎn)物經(jīng)2.5%瓊脂糖凝膠電泳50 min，在分子成像儀上觀察基因分型，結(jié)果判定如下：484 bp條帶為S型等位基因，528 bp或572 bp條帶為L型等位基因;只有484 bp條帶為SS基因型，528 bp或572 bp條帶為LL基因型，484 bp和528 bp或484 bp和572 bp均有者為LS基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用擬合優(yōu)度χ2檢驗(yàn)5-HTTLPR基因型分布是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。采用非條件Logistic 回歸計(jì)算比值比（OR）及其95%置信區(qū)間（95%CI）分析發(fā)生睡眠障礙的相對(duì)危險(xiǎn)度。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)為雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

共募集到符合條件的輪班護(hù)士101例，其中睡眠障礙組45例（44.6%），睡眠正常組56例（55.4%）。兩組年齡、BMI、婚姻狀況、文化程度、輪班年限、夜班頻次比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組PSQI各因子得分及總分比較

睡眠障礙組輪班護(hù)士的PSQI量表各因子得分及總分均明顯高于睡眠正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。另外，本研究對(duì)象均為未使用催眠藥物者，因此，PSQI的催眠藥物因子分均為0。

2.3 兩組5-HTTLPR基因型分布Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)比較

5-HTTLPR基因型頻率進(jìn)行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果顯示，睡眠障礙組與睡眠正常組觀察值和預(yù)期值比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示研究對(duì)象來自遺傳平衡群體，有較好的代表性。

2.4 兩組5-HTTLPR基因型及等位基因頻率分布比較

睡眠障礙組與睡眠正常組5-HTTLPR基因型頻率分布比較，睡眠障礙組SS基因型頻率（64.44%）高于睡眠正常組（41.07%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;在等位基因分布上，睡眠障礙組S等位基因頻率（78.89%）高于睡眠正常組（60.71%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，以LL基因型為參照，SS基因型輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的危險(xiǎn)性是LL型的4.623倍（95%CI：1.153～18.542）;以L等位基因?yàn)閰⒄?，攜帶S等位基因的輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的危險(xiǎn)性是L等位基者的3.929倍（95%CI：1.024～15.065）。

3 討論

國內(nèi)外流行病學(xué)調(diào)查表明，15%～35%的成年人存在不同程度的睡眠障礙，嚴(yán)重影響其腦力和體力的恢復(fù)，但其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明[7-8]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)將失眠的發(fā)生概括為三大因素：易感因素、誘發(fā)因素和持續(xù)因素[9]。應(yīng)激性生活事件總是先于失眠出現(xiàn)，因此社會(huì)心理應(yīng)激是失眠的重要原因，但應(yīng)激事件是否導(dǎo)致失眠，個(gè)體間存在顯著差異，可能與個(gè)人易感性有關(guān)[10]。

以往研究表明，5-羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）作為腦內(nèi)一種重要的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，參與睡眠的發(fā)生和維持，普遍認(rèn)為5-HT功能降低是睡眠障礙發(fā)生的危險(xiǎn)因素[11]。5-HT系統(tǒng)的功能受5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體（Serotonin transporter，5-HTT）的調(diào)節(jié)。5-HTT從突觸間隙中再攝取5-HT決定了突觸后受體介導(dǎo)信號(hào)的量和作用持續(xù)時(shí)間，從而對(duì)5-HT能神經(jīng)傳遞進(jìn)行精細(xì)調(diào)控[12]。有研究表明，5-HTT基因多態(tài)性可影響5-HTT基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)，進(jìn)而影響腦組織中5-HT水平[13]。關(guān)于5-HTT基因多態(tài)性目前研究最多的位點(diǎn)是5基因啟動(dòng)子區(qū)域44 bp的插入/缺失（5-HTTLPR）[14]。5-HTTLPR有長型（L）和短型（S）兩種常見的等位基因，LL、LS、SS三種基因型，其中L等位基因具有較高的轉(zhuǎn)錄活性，LL基因型比SS基因型個(gè)體有更高的mRNA轉(zhuǎn)錄量和5-HTT蛋白表達(dá)量[15-16]。

近年來，相關(guān)研究提示5-HTTLPR多態(tài)性可能與失眠易感性相關(guān)，但仍存在較大爭議。Wankerl等[17]指出攜帶S等位基因的個(gè)體較易陷入長時(shí)間的警覺和反思狀態(tài)，發(fā)生失眠的可能性更大。Carskadon等[18]通過開展5-HTTLPR多態(tài)性與睡眠模式關(guān)系的初步研究后發(fā)現(xiàn)，攜帶S等位基因的學(xué)生更易持續(xù)處于短暫夜間睡眠模式中，而且其睡眠不足容易導(dǎo)致情緒低落。但是，Van等[19]報(bào)道稱并未檢測到5-HTTLPR多態(tài)性與睡眠質(zhì)量之間的關(guān)聯(lián)。筆者分析以往研究結(jié)果不一致的原因，可能與研究對(duì)象的選擇及存在較多的混雜因素（如性別、年齡、工作壓力、生活習(xí)慣等）有關(guān)。因此，本研究選擇我院精神科輪班護(hù)士這個(gè)特殊群體為研究對(duì)象來探討5-HTTLPR多態(tài)性與睡眠障礙的關(guān)系，其優(yōu)點(diǎn)為其工作環(huán)境一致、工作量相似、工作壓力相仿，屬于睡眠障礙的高發(fā)人群且睡眠質(zhì)量有一定個(gè)體差異。

有調(diào)查顯示，一線臨床護(hù)士20%～60%遭受睡眠問題的困擾，主要情況有難以入睡、睡眠淺、易驚醒、醒后不易再入睡、多夢等[20]。在本院調(diào)查入組的101名輪班護(hù)士中有44.6%發(fā)生睡眠障礙，其PSQI各因子得分及總分均明顯高于睡眠正常組，與以往研究結(jié)果基本一致。為進(jìn)一步探討輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的易感基因，本研究比較了睡眠障礙組與睡眠正常組5-HTTLPR基因型和等位基因分布情況，發(fā)現(xiàn)睡眠障礙組有較高的SS基因型及S等位基因頻率，SS基因型及S等位基因攜帶者發(fā)生睡眠障礙的危險(xiǎn)性明顯高于其他類型，提示S等位基因可能是輪班護(hù)士發(fā)生睡眠障礙的易感基因。

綜上所述，5-HTTLPR基因多態(tài)性與輪班護(hù)士睡眠質(zhì)量的關(guān)聯(lián)性，為合理配置護(hù)理人員，改善護(hù)士睡眠質(zhì)量，提高工作效率提供了參考，也為睡眠障礙的機(jī)制研究提供了一定線索。但本研究的樣本量較少、研究對(duì)象均來自同一所醫(yī)院。因此，相關(guān)結(jié)論仍有待進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，開展多中心研究進(jìn)一步證實(shí)。

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（收稿日期：2020-04-09）