火龍果皮發(fā)酵物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞炎癥的緩解作用

李丹倩，梁嘉怡，鐘曉晴，王潤(rùn)東，彭元懷

（嶺南師范學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東湛江 524048）

炎癥是機(jī)體受細(xì)菌感染或氧化應(yīng)激后免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的防御反應(yīng)，其發(fā)生機(jī)制與炎性信號(hào)通路和促炎因子相關(guān)。當(dāng)致炎介質(zhì)與免疫細(xì)胞膜上游信號(hào)響應(yīng)元件先天免疫受體4（toll-like reporter4，TLR4）結(jié)合，經(jīng)中游信號(hào)傳遞元件髓樣分化因子88（myeloid differentiation factor 88，MyD88）和下游信號(hào)釋放元件核因子-κB（nuclear factor-kaapa B，NF-κB）的轉(zhuǎn)導(dǎo)，可激活NF-κB通路，驅(qū)動(dòng)腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白介素-6（IL-6）基因表達(dá)，形成炎癥反應(yīng)[1,2]。適度的炎癥有利于宿主抵御病原體感染，然而，不受控制的炎癥會(huì)誘發(fā)代謝綜合征和肝腎損傷[3]。目前，化學(xué)合成的抗炎藥物已廣泛用于治療炎癥，但長(zhǎng)期使用引發(fā)臟器功能衰退和胃腸潰瘍[4]。因此，尋找低毒性的天然物質(zhì)，來避免合成藥物的毒副作用尤為迫切。

火龍果（Hylocereus undulatus）富含黃酮、多糖和多酚等物質(zhì)，具有較好的保健功能[5]。火龍果皮是果實(shí)加工的副產(chǎn)物，約占整果總重量33%，它通常被轉(zhuǎn)化為動(dòng)物飼料或作為廢棄物丟棄[6]。有研究指出果皮中也含有大量的膳食功能因子，具有抗菌、抑炎和抗氧化作用[7]，但是由于果皮細(xì)胞壁的構(gòu)成，采用傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取和超聲輔助提取無法使得果皮中活性物質(zhì)充分溶出，造成提取率低和生物相容性差等問題[8,9]。目前，利用酵母、真菌和乳酸菌對(duì)食品原料進(jìn)行發(fā)酵的研究正在興起，微生物發(fā)酵是提高食品工業(yè)副產(chǎn)物再利用的一種綜合、環(huán)保的新方法[10,11]。

微生物發(fā)酵的本質(zhì)是利用菌體生長(zhǎng)繁殖中釋放的多種胞外酶，促進(jìn)食品的營(yíng)養(yǎng)功能成分降解，使得原本沒有生物活性或活性較弱的前體物質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)橛行С煞郑瑥亩黾犹崛∥镏杏行镔|(zhì)的含量[11]。據(jù)報(bào)道，乳酸菌發(fā)酵大麥[12]、鐵皮石斛[13]、石榴皮[14]可促進(jìn)原料中大分子蛋白質(zhì)和結(jié)合態(tài)物質(zhì)的分解，獲得新型小肽和游離態(tài)物質(zhì)。Cheng等[15]發(fā)現(xiàn)干酪乳桿菌發(fā)酵的藍(lán)莓渣對(duì)肥胖誘導(dǎo)炎癥的緩解作用顯著高于未發(fā)酵果渣，且具有更高的生物利用率。李倩[16]通過植物乳桿菌發(fā)酵辣木葉制備富含γ-氨基丁酸，大幅提高辣木葉水提物的抗炎和抗氧化活性。由此可見，果蔬及其下腳料的乳酸菌發(fā)酵具有廣闊的應(yīng)用前景。然而，發(fā)酵火龍果皮側(cè)重于果醋和釀酒工藝的研究，未見關(guān)于火龍果皮發(fā)酵物中功能組分及抗氧化/抗炎作用的報(bào)道。

本文以干酪乳桿菌CICC20280發(fā)酵火龍果皮，檢測(cè)發(fā)酵前后提取物中總酚和黃酮的變化、抗氧化活性的差異，基于脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型，探究火龍果皮發(fā)酵物（FermentedHylocereus undulatuspeel，F(xiàn)HP）對(duì)炎癥的緩解作用和機(jī)制，旨在為火龍果皮資源的綜合利用和抗炎功能產(chǎn)品的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮火龍果，購(gòu)于廣東省湛江市火龍果產(chǎn)區(qū)。整果洗凈和晾干后，分離果肉與果皮，把果皮切成3～5 cm小塊，經(jīng)冷凍干燥后粉碎過100目篩，1 ℃下貯藏備用。乳酸菌菌株：干酪乳桿菌CICC20280由廣東省微生物研究所丁郁教授饋贈(zèng)。

脂多糖（LPS，Escherichia coliO55:B5）、噻唑藍(lán)（MTT），美國(guó)Sigma公司；二甲基亞砜（DMSO）、地塞米松（DEX），青島海博有限公司；RAW264.7細(xì)胞株，中國(guó)科學(xué)院（上海）細(xì)胞庫(kù)；RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基、青鏈霉素混液、胎牛血清（FBS）和磷酸鹽緩沖液，美國(guó)Gibco公司；一氧化氮（nitric oxide，NO）檢測(cè)試劑盒，美國(guó) Promega公司；TNF-α/IL-1β/IL-6酶聯(lián)免疫吸附試劑盒、ABTS試劑盒、FRAP試劑盒、2’,7’-二氯熒光素二乙酸酯（DCFH-DA）熒光試劑、Trizol RNA提取劑、HiScriptⅡ Q-RT SuperMix for RT-PCR、AceQ Universal SYBR RT-PCR Master Mix，廣州齊云生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

SW-CJ-2D超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備工程有限公司；SCIENTZ-12N真空冷凍干燥機(jī)，北京博醫(yī)儀器公司；Microfuge 20R低溫高速離心機(jī)，美國(guó)Beckman公司；Thermo311 CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、MK3型全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀，美國(guó)Thermo公司；CFX96型熒光定量PCR儀，美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 FHP制備及活性組分測(cè)定

干酪乳桿菌CICC20280的活化，將菌株凍干粉接入MRS液體培養(yǎng)基，37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h后，12000 r/min離心10 min，收集沉淀，用無菌生理鹽水調(diào)整菌液濃度至107CFU/mL作為發(fā)酵劑。按照質(zhì)量：體積=1:1.5，將火龍果皮粉末與蒸餾水混合，采用80 ℃，15 min巴氏殺菌法除去火龍果皮培養(yǎng)基中原始雜菌，冷卻至室溫備用。將上述發(fā)酵劑以體積分?jǐn)?shù)5%添加到無菌的火龍果皮培養(yǎng)基，37 ℃厭氧靜置培養(yǎng)42 h后，4000 r/min，4 ℃，離心5 min，收集上清液。以蒸餾水為流動(dòng)相，應(yīng)用聚酰胺柱層析法對(duì)上清液初分離純化，于真空冷凍干燥，制成FHP[17]。對(duì)照組樣品的制備除不接種發(fā)酵劑外，其余操作同上。試樣中總酚和黃酮的測(cè)定參照Sun等[18]建立的方法。

1.3.2 FHP抗氧化活性測(cè)定

通過DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和鐵離子還原能力[18]，對(duì)FHP的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)估。

1.3.3 FHP抗炎活性測(cè)定

1.3.3.1 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)

取凍存RAW264.7細(xì)胞，37 ℃水浴1 min，在無菌操作臺(tái)內(nèi)將其移入含10%胎牛血清、1%雙抗（100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素）的RPMI-1640完全培養(yǎng)基，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育，每隔24 h更換培養(yǎng)基，當(dāng)細(xì)胞融合率達(dá)到80%～90%對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代，細(xì)胞傳至3代，用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3.3.2 FHP對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

利用RPMI-1640完全培養(yǎng)液將RAW264.7細(xì)胞濃度調(diào)整至106個(gè)/mL，按照每孔100 μL接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育18 h。待細(xì)胞貼壁后，棄掉孔內(nèi)培養(yǎng)液，隨后每孔加入100 μL液體，依據(jù)添加液體的種類，將細(xì)胞分為：對(duì)照組、陽(yáng)性組和不同質(zhì)量濃度FHP處理組，分別添加：完全培養(yǎng)液、0.5 μg/mL DEX溶液和50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL和800 μg/mL FHP溶液，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)24 h后，向各孔內(nèi)加入100 μL MTT工作液（5 mg/mL），作用4 h后棄上清液，每孔加100 μL MTT終止液（0.1% DMSO），避光振蕩混勻，于490 nm處測(cè)定OD值，計(jì)算細(xì)胞存活率，確定FHP安全濃度。細(xì)胞存活率計(jì)算公式，如下：

1.3.3.3 FHP對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

按照1.3.3.2操作進(jìn)行細(xì)胞接種，根據(jù)FHP安全濃度范圍，設(shè)置7個(gè)試驗(yàn)組：對(duì)照組、陽(yáng)性組、LPS模型組和低中高濃度FHP組，分別添加100 μL：完全培養(yǎng)液、0.5 μg/mL DEX、1 μg/mL LPS、100 μg/mL、200 μg/mL和400 μg/mL FHP。陽(yáng)性組和FHP組在添加對(duì)應(yīng)溶液處理細(xì)胞1 h后，加入100 μL 1 μg/mL LPS。各組培養(yǎng)24 h后，按照1.3.3.2操作檢測(cè)FHP對(duì)LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)。

1.3.3.4 FHP對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌NO、ROS、細(xì)胞因子及NF-κB通路關(guān)鍵基因的影響

細(xì)胞接種、試驗(yàn)分組和受試物添加同1.3.3.3操作。

①格里斯（Griess）法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞上清中NO含量

干預(yù)細(xì)胞24 h后，4000 r/min，4 ℃離心5 min，收集各組上清50 μL。向上清中添加等體積Griess A和Griess B溶液，37 ℃孵育10 min。在540 nm處測(cè)定各孔OD值，用NaNO2建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中亞硝酸鈉濃度，推算細(xì)胞培養(yǎng)液中NO釋放量。

②DCFH-DA熒光法檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞上清液中ROS含量

同上述操作收集上清后，在黑暗條件下加入終濃度100 μmol/L DCFH-DA熒光試劑，避光孵育30 min后，以激發(fā)波長(zhǎng)488 nm、發(fā)射波長(zhǎng)525 nm，測(cè)定上清熒光強(qiáng)度。

③ELISA檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10含量

同上述操作收集上清。按照ELISA試劑盒說明書測(cè)定各組上清中細(xì)胞因子的濃度。

④RT-PCR檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞NF-κB通路TLR4/MyD88/NF-κB及炎癥因子基因的表達(dá)

表1 引物序列Table 1 Primer sequences used for RT-PCR

干預(yù)細(xì)胞4 h后，4000 r/min，4 ℃離心10 min，棄上清，收集細(xì)胞。使用Trizol RNA提取細(xì)胞總RNA，RNA經(jīng)純度和質(zhì)量濃度檢測(cè)后，保留高品質(zhì)RNA樣本。應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用10 μL反轉(zhuǎn)錄體系，反轉(zhuǎn)錄條件為：37 ℃、10 min；95 ℃、8 s。利用特異性引物進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，以小鼠β-actin為內(nèi)參基因，構(gòu)建20 μL反應(yīng)體系，反應(yīng)條件為：95 ℃、25 s；95 ℃、10 s，60 ℃、15 s，循環(huán)40次；融解曲線分析：95 ℃、15 s；60 ℃、30 s，循環(huán)1次。引物序列如下表1。通過2-ΔΔCt法計(jì)算待測(cè)基因的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，滿足正態(tài)分布和方差齊性的多組之間均數(shù)比較運(yùn)用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用LSD法，方差不齊者采用Dunnett"s T3檢驗(yàn)。p＜0.05存在顯著差異，p＜0.01為極顯著差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 FHP總酚、黃酮和抗氧化活性

火龍果皮發(fā)酵物中總酚含量達(dá)169.26 mg CAE/(g DW)、黃酮為81.74 mg CAE/(g DW)，不僅顯著高于（p＜0.05）未發(fā)酵火龍果皮中的含量，還遠(yuǎn)超已報(bào)道的榴蓮殼[19]、葡萄皮[20]和芒果皮[21]等下腳料中的提取量，有研究指出乳酸菌通過脫羧和還原反應(yīng)將食品原料中結(jié)合態(tài)酚和黃酮轉(zhuǎn)化為游離態(tài)[22]。因此，乳酸菌發(fā)酵果蔬渣的工藝更適合天然產(chǎn)物的工業(yè)化生產(chǎn)?；瘕埞ぐl(fā)酵物具有更高的DPPH/ABTS自由基清除能力和Fe3+金屬離子螯合能力，本研究中干酪乳桿菌CICC20280菌株在生長(zhǎng)穩(wěn)定的后期也能產(chǎn)生具有抗氧化活性的物質(zhì)，但火龍果皮發(fā)酵時(shí)長(zhǎng)為42 h，此時(shí)菌體生長(zhǎng)剛達(dá)到穩(wěn)定期，因此，菌體代謝產(chǎn)生的抗氧化物質(zhì)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于火龍果皮發(fā)酵后的釋放量，可以忽略其影響。此外，有研究指出炎癥反應(yīng)釋放的促炎因子可以活化巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞等分泌大量的過氧化物自由基，加重炎癥程度，因此，天然活性物質(zhì)通過清除自由基發(fā)揮抗氧化作用具有潛在的緩解炎癥的功能[23,24]，據(jù)此推斷具有抗氧化活性的FHP可通過淬滅氧自由基發(fā)揮抗炎功效。

2.2 FHP對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

細(xì)胞增殖試驗(yàn)是評(píng)估外源化合物細(xì)胞毒性的重要依據(jù)。由表3可知，以DEX組細(xì)胞存活率為100%，F(xiàn)HP濃度在100～400 μg/mL時(shí)，RAW264.7細(xì)胞存活率隨濃度增加而上升，細(xì)胞最高存活率達(dá)到99.01%。然而，F(xiàn)HP濃度低于100 μg/mL或高于400 μg/mL時(shí)細(xì)胞活力會(huì)明顯下降，這表明高濃度FHP能導(dǎo)致細(xì)胞損傷，具有細(xì)胞毒性。最新研究也證實(shí)，攝入過量的兒茶素（多酚類）會(huì)對(duì)肝臟細(xì)胞造成不可逆損傷[25]，因此，質(zhì)量濃度100～400 μg/mL是研究FHP抗炎功效的安全劑量范圍。

表2 火龍果皮提取物的總酚、黃酮和抗氧化活性Table 2 Main antioxidant components and antioxidant activities in Hylocereus undulatus peel extract

表3 火龍果皮發(fā)酵物對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響Table 3 Effects of fermented Hylocereus undulatus peel on the proliferation of RAW264.7 cells

2.3 FHP對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞分泌NO和ROS影響

圖1 火龍果皮發(fā)酵物對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌NO和ROS的影響Fig.1 Effects of fermented Hylocereus undulatus peel on NO and ROS in LPS-induced RAW264.7 cells

NO作為重要的促炎介質(zhì)，其釋放量是評(píng)價(jià)炎癥的首要指標(biāo)[26]。ROS伴隨炎癥反應(yīng)而產(chǎn)生，其誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷會(huì)加速炎癥進(jìn)程[27]。如圖1所示，與陰性對(duì)照NC組相比，炎癥模型LPS組RAW264.7細(xì)胞NO和ROS的釋放量極顯著升高（p＜0.01）。與LPS組相比，經(jīng)不同質(zhì)量濃度FHP（100～400 μg/mL）預(yù)處理的細(xì)胞NO釋放量均顯著減少（p＜0.05或p＜0.01），且呈劑量依賴性；FHP濃度高于200 μg/mL才能顯著抑制（p＜0.05）ROS生成。此外，F(xiàn)HP濃度為400 μg/mL，其抑制NO和ROS釋放的效果分別達(dá)到陽(yáng)性對(duì)照PC組85.63%和88.90%。有研究指出，NO可與炎性因子相互作用，其分泌量決定細(xì)胞內(nèi)炎性因子的生物合成能力[28]。因此，推測(cè)FHP先抑制細(xì)胞中NO生成，減少NO與炎性因子的互作，進(jìn)而降低炎性因子活性。

2.4 FHP對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的影響

圖2 火龍果皮發(fā)酵物對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞因子生成的影響Fig.2 Effects of fermented Hylocereus undulatus peel on cytokines in LPS-induced RAW264.7 cells

圖2a～d顯示，與NC組相比，LPS組RAW264.7細(xì)胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6極顯著（p＜0.01）升高，而抗炎因子IL-10濃度極顯著降低（p＜0.01），表明炎癥造模成功。與LPS組相比，添加不同濃度FHP均極顯著抑制（p＜0.01）TNF-α和IL-6的釋放，最大抑制率為68.92%和62.15%。當(dāng)FHP濃度高于200 μg/mL時(shí)，可顯著抑制細(xì)胞分泌IL-1β，并提升IL-10的釋放，最大提高率為173.72%。與PC組相比，隨著FHP濃度的增加，組間的抗炎功效的差異逐漸減少。此結(jié)果與前面促炎介質(zhì)NO和ROS對(duì)FHP的響應(yīng)規(guī)律一致。這也進(jìn)一步驗(yàn)證了FHP是通過抑制NO釋放、降低ROS氧化損傷和提升抗炎因子的多重作用，緩解細(xì)胞炎癥反應(yīng)。

2.5 FHP對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NF-κB通路及炎性因子合成基因表達(dá)的影響

NF-κB通路是由關(guān)鍵元件TLR4/MyD88/NF-κB介導(dǎo)的細(xì)胞感知、轉(zhuǎn)導(dǎo)和表達(dá)致炎信號(hào)的經(jīng)典通路，能夠引發(fā)TNF-α、IL-1β和IL-6炎癥物質(zhì)的 “ 瀑布樣 ” 釋放，造成機(jī)體炎性損傷，所以長(zhǎng)期以來NF-κB通路相關(guān)的功能元件被認(rèn)為是抗炎物質(zhì)的主要靶點(diǎn)[29]。為明確FHP抗炎作用機(jī)制，采用RT-PCR檢測(cè)NF-κB通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)元件及下游炎性因子合成基因的表達(dá)。由圖3可知，LPS組細(xì)胞中TLR4/MyD88/NF-κB及TNF-α/IL-1β/IL-6的相對(duì)表達(dá)量極顯著（p＜0.01）高于NC組。然而，經(jīng)不同質(zhì)量濃度FHP預(yù)處理后，與LPS組相比，細(xì)胞NF-κB通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因及下游炎性因子的表達(dá)均顯著減少（p＜0.05或p＜0.01），且濃度為400 μg/mL FHP對(duì)細(xì)胞NF-κB通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能抑制最佳。有文獻(xiàn)指出，多酚和黃酮類物質(zhì)可與細(xì)胞表面Toll樣受體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，減少致炎物與炎性信號(hào)響應(yīng)元件的接觸，沉默炎性因子合成基因表達(dá)[30]，因此，F(xiàn)HP抗炎機(jī)制可能是其功能組分中的總酚和黃酮結(jié)合TLR4，抑制NF-κB通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，下調(diào)炎性因子基因的表達(dá)，從而減少炎性因子的分泌，緩解機(jī)體炎性損傷。炎癥對(duì)機(jī)體的危害主要通過炎性損傷和氧化損傷實(shí)現(xiàn)，其發(fā)生機(jī)制與NF-κB通路和氧自由基有關(guān)[1,2,29]，PC組地塞米松可與胞內(nèi)的糖皮質(zhì)受體結(jié)合，轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核后干擾NF-κB通路，緩解炎癥的機(jī)制已被學(xué)者闡明，且在圖3中得到驗(yàn)證，F(xiàn)HP也可影響NF-κB通路，說明FHP與地塞米松有共同的抗炎機(jī)制。然而，這不代表二者抗炎機(jī)制完全一致，在2.1研究中證實(shí)的FHP具有較強(qiáng)抗氧化活性，能夠淬滅活性氧，減輕了炎癥反應(yīng)中的氧化損傷，綜上FHP的抗炎機(jī)制與沉默NF-κB通路功能和抗氧化作用密切相關(guān)。此外，最新研究[17]表明多酚類物質(zhì)通過 “ 腸道菌群-NF-κB通路 ” 的級(jí)聯(lián)途徑緩解機(jī)體炎癥，因此更多關(guān)于FHP的抗炎信息可在體內(nèi)研究中被挖掘。

圖3 火龍果皮發(fā)酵物對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞NK-κB通路元件和炎性因子表達(dá)的影響Fig.3 Effects of fermented Hylocereus undulatus peel on the genes expression of NF-κB pathway and pro-inflammatory factor in LPS-induced RAW264.7 cells

3 結(jié)論

本研究比較了火龍果發(fā)酵前后，提取物中總酚、黃酮和抗氧化活性的變化，并基于RAW264.7細(xì)胞炎癥模型探究FHP抗炎作用及機(jī)制。結(jié)果表明，火龍果皮經(jīng)干酪乳桿菌CICC20280發(fā)酵后，總酚、黃酮含量和抗氧化活性顯著升高，且能夠有效抑制促炎介質(zhì)NO和ROS生成，減少過氧化物引發(fā)的早期炎癥損傷。FHP在蛋白分泌和基因表達(dá)兩個(gè)層次上顯著抑制炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6，其作用機(jī)制是多酚和黃酮類物質(zhì)通過下調(diào)NF-κB通路的關(guān)鍵元件TLR4/MyD88/NF-κB的表達(dá)，沉默通路功能實(shí)現(xiàn)。文中探討了FHP功能組分和體外抗炎作用，而FHP物質(zhì)分離、結(jié)構(gòu)表征和體內(nèi)抗炎有待后續(xù)的研究。