長鏈非編碼RNA AFAP1-AS1在癌癥中作用及其機(jī)制的研究進(jìn)展

李志明，龍 鳳,2，何建新，黃 勇,2，孫少康

1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué)，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省高校重大疾病分子醫(yī)學(xué)與中醫(yī)藥防治研究省級重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000

癌癥作為嚴(yán)重威脅人類健康的惡性疾病，一直以來是全球非感染性疾病死亡的主要原因之一。根據(jù)有關(guān)癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)的最新研究報告顯示，2020年美國預(yù)計將發(fā)生1 806 590例新發(fā)癌癥病例和606 520癌癥死亡病例［1］。隨著基因組學(xué)、分子生物學(xué)等基礎(chǔ)學(xué)科的發(fā)展，癌癥的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)的分子機(jī)制被廣泛研究，越來越多的證據(jù)表明，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一系列生物行為和疾病的主要調(diào)節(jié)因子［2］。lncRNA功能失調(diào)被認(rèn)為是導(dǎo)致多種疾病發(fā)生的主要因素之一，這些疾病包括癌癥、心血管疾病、纖維化、肥胖等［3］。

在人類基因組中，大約93%的DNA可以轉(zhuǎn)錄成RNA，其中只有2%是編碼蛋白質(zhì)的mRNA，其余的98%是不編碼蛋白的非編碼RNA，而在這些非編碼RNA中，超過200個堿基的RNA被歸類為lncRNA［4］。雖然lncRNA幾乎不編碼蛋白質(zhì)，但它們可以通過RNA干擾、基因共抑制、基因沉默、基因印記和DNA去甲基化等機(jī)制調(diào)控基因表達(dá)，參與各種分子生物學(xué)過程［5］。lncRNA的分類目前尚無明確統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，通常根據(jù)其相對于相鄰蛋白編碼基因的位置將其基本分類為：有義鏈lncRNA、反義鏈lncRNA、內(nèi)含子區(qū)lncRNA、雙向lncRNA、長基因間非編碼RNA和增強(qiáng)子相關(guān)lncRNA。另有學(xué)者根據(jù)lncRNA的作用將其大致分為4類：信號分子、支架分子、引導(dǎo)分子和誘餌分子［6］。作為信號分子，lncRNA參與信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)，調(diào)控下游靶基因的表達(dá)；lncRNA作為支架分子，可作為蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)組分與多種蛋白結(jié)合形成穩(wěn)定的核酸蛋白復(fù)合物，介導(dǎo)染色質(zhì)組蛋白修飾；lncRNA作為引導(dǎo)分子，可以招募染色質(zhì)修飾相關(guān)酶來調(diào)控靶基因；lncRNA作為誘餌分子，通過與miRNA的結(jié)合（miRNA海綿）招募相關(guān)蛋白質(zhì)或轉(zhuǎn)錄因子來調(diào)控靶基因的表達(dá)。lncRNA的表達(dá)異常已被證明與多種癌癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)［7］。例如，lncRNA淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1（lymph node metastasis associated transcript 1，LNMAT1）通過將核不均一核糖核蛋白L（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein L，hnRNPL）募集到C-C趨化因子配體2（C-C motif chemokine ligand 2，CCL2）啟動子，激活CCL2表達(dá)促進(jìn)膀胱癌淋巴管生成和淋巴轉(zhuǎn) 移［8］；lncRNA SPRY4-IT1通過海綿miR-101-3p上調(diào)zeste基因增強(qiáng)子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，EZH2）促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn) 移［9］。肌動蛋白絲相關(guān)蛋白1-反義RNA1（actin filament-associated protein 1 antisense RNA 1，AFAP1-AS1）最初于2013年在食管腺癌中被發(fā)現(xiàn)，過去近十年的研究表明，作為重要的致癌lncRNA，AFAP1-AS1在多種癌癥中均表達(dá)上調(diào)，可促進(jìn)多種癌癥的不同進(jìn)程。AFAP1-AS1在人類癌癥中的高表達(dá)與不良的臨床結(jié)果（如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移）也密切相關(guān)。因此，解讀該lncRNA在癌癥中的功能和作用機(jī)制可以進(jìn)一步幫助臨床工作者尋找預(yù)防或治療惡性腫瘤的新策略。

1 AFAP1-AS1簡述

AFAP1-AS1位于人類4號染色體的4p16.1區(qū)域，是肌動蛋白絲相關(guān)蛋白1（actin filamentassociated protein 1，AFAP1）基因的反義鏈轉(zhuǎn)錄而來的一種反義lncRNA，全長共6 810個堿基，存在兩個轉(zhuǎn)錄本（從Ensembl數(shù)據(jù)庫中提?。?，包括ENST00000608442.2、ENST00000674004.1。AFAP1編碼運(yùn)動纖維相關(guān)蛋白，屬于AFAP1、AFAP1like-1和AFAP1 like-2/xB-130家族成員［10-11］。AFAP1-AS1外顯子2與蛋白質(zhì)編碼基因AFAP1的外顯子14、15和16重 疊［12］（圖1）。lncRNA AFAP1-AS1在惡性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中均有表達(dá)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在多數(shù)細(xì)胞系如胃癌BGC-823和SGC7901細(xì)胞［13］、黑色素瘤A375和M21細(xì)胞［14］、肺癌PC9和H1975細(xì)胞［15］以及三陰性乳腺癌BT-549和MDA-MB-231細(xì)胞［16］中，AFAP1-AS1主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，且基于lncLocator數(shù)據(jù)庫對AFAP1-AS1基因進(jìn)行序列分析［17］，得出AFAP1-AS1主要定位于細(xì)胞質(zhì)（表1）。越來越多的證據(jù)表明，AFAP1-AS1作為一種反義lncRNA在多種人類癌癥中表達(dá)上調(diào)，如胰腺癌［18］、肺癌［19］、食管癌［20］、乳腺癌［21］、宮頸癌［22］等。此外，AFAP1-AS1在這些癌癥中參與調(diào)控癌細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲等多種生物學(xué)過程（表2）。而AFAP1-AS1在各種生物學(xué)過程中的功能主要是通過與miRNA競爭結(jié)合或通過復(fù)雜的機(jī)制與蛋白質(zhì)（包括在細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡中具有活性的蛋白質(zhì)）相互作用而賦予的。

圖1 AFAP1-AS1位于染色體4p16.1上，存在兩個轉(zhuǎn)錄本ENST00000608442.2和ENST00000674004.1Fig.1 AFAP1-AS1 was located on chromosome 4p16.1,ENST00000608442.2 and ENST00000674004.1 were two AFAP1-AS1 transcripts

表1 AFAP1-AS1的亞細(xì)胞定位分析（來自lnclocator數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)庫網(wǎng)站：www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinfo/lnclocator）Tab.1 Analysis of the subcellular localization of AFAP1-AS1 (from lnclocator database:www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinfo/lnclocator)

2 AFAP1-AS1在人類癌癥中的作用機(jī)制

癌癥的發(fā)生、發(fā)展是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程，包括維持細(xì)胞增殖、抵抗細(xì)胞死亡、誘導(dǎo)血管生成、激活侵襲和轉(zhuǎn)移、逃避免疫破壞和增加化療耐藥性［52］。AFAP1-AS1作為一種lncRNA，于2013年首次在食管腺癌中被發(fā)現(xiàn)。它與腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、細(xì)胞周期、遷移、侵襲和化療耐藥密切相關(guān)。

2.1 作為一種競爭性內(nèi)源RNA

競爭性內(nèi)源RNA（competing endogenous RNA，ceRNA）在癌癥的病理生理學(xué)中發(fā)揮著越來越重要的作用［53］。微小RNA（microRNA，miRNA）是ceRNA網(wǎng)絡(luò)中的一個重要調(diào)節(jié)因子，它通過與mRNA 3’UTR中的靶位點(diǎn)相互作用，導(dǎo)致其腺苷酸化，降低mRNA的穩(wěn)定性和翻譯抑制，負(fù)調(diào)控基因的表達(dá)［54］。AFAP1-AS1是一種非常重要的ceRNA，其在體內(nèi)起著miRNA海綿的作用見圖2。在胰腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1高表達(dá)，而AFAP1-AS1的敲除可以通過減弱與miR-384的競爭結(jié)合能力，下調(diào)激活素A受體1型（activin A receptor type 1，ACVR1）的表達(dá)，從而抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和干性，最終抑制腫瘤的發(fā) 生［18］。miR-133a已被證明是包括胰腺癌在內(nèi)的多種人體腫瘤的抑癌因子［55-58］，新的證據(jù)表明，AFAP1-AS可通過海綿miR-133a在胰腺癌細(xì)胞中功能性地釋放miR-133a靶向胰島素樣生長因子1受體（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）癌基因的mRNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn) 物［23］。miR-103a-3p被報道在多種惡性腫瘤組織細(xì)胞中作為抑癌基因發(fā)揮作用，比如miR-103a-3p在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織和神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞中低表達(dá)，過表達(dá)miR-103a-3p可顯著抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并促進(jìn)其凋 亡［59］；在胃癌和膀胱癌中miR-103a-3p的表達(dá)受到抑制［60-61］。同樣，在垂體腺瘤中miR-103a-3p被證實(shí)充當(dāng)了抑癌基因的角色，而AFAP1-AS1通過使miR-103a-3p海綿化以激活磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/AKT）信號通路來促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞的增殖［47］。在三陰性乳腺癌細(xì)胞中，過表達(dá)miR-145可抑制活化轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor 6，ATF6）的表達(dá)從而增加AFAP1-AS1的啟動子的活性，過表達(dá)AFAP1-AS1則可通過靶向抑制miR-145上調(diào)MutT同源蛋白1（MutT homolog 1，MTH1）的表達(dá)，促進(jìn)三陰性乳腺癌細(xì)胞的增殖和侵 襲［21］。在肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，肺癌細(xì)胞中高表達(dá)的AFAP1-AS1可通過使miR-139-5p海綿化而上調(diào)核糖核苷酸還原酶M2（ribonucleotide reductase，RRM2），通過上調(diào)RRM2的表達(dá)促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的增殖和增強(qiáng)化療耐藥 性［36］。AFAP1-AS1在胃癌組織和細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào)，與胃癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)。在功能上，AFAP1-AS1與miR-155-5p直接相互作用，并充當(dāng)miR-155-5p的競爭性海綿上調(diào)成纖維細(xì)胞生長因子7（fibroblast growth factor 7，F(xiàn)GF7）的表達(dá)，促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲［13］。AFAP1-AS1的沉默可導(dǎo)致黑色素瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲減少，間充質(zhì)標(biāo)志物表達(dá)降低以及上皮標(biāo)志物重新表達(dá)。具體而言，AFAP1-AS1與miR-653-5p競爭結(jié)合，下調(diào)視黃酸誘導(dǎo)14基因（retinoic acid-induced 14，RAI14）的表達(dá)，而miR-653-5p過表達(dá)或RAI14的敲低可抑制腫瘤生長和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）表 型［14］。Lian等［62］報道AFAP1-AS1在鼻咽癌組織中高表達(dá)，與鼻咽癌患者的臨床TNM分期、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與之相反，miR-423-5p在鼻咽癌中低表達(dá)。Rho/Rac1信號通路分子RAB11B和LASP1為miR-423-5p的靶基因，F(xiàn)OS樣抗原2（Fos-related antigen 2，F(xiàn)OSL2）是激活蛋白-1（activator protein-1，AP-1）轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物的成員，通過與LIM和SH3結(jié)構(gòu)域蛋白1（LIM and SH3 domain protein 1，LASP1）啟動子結(jié)合激活其轉(zhuǎn)錄。而AFAP1-AS1可通過競爭性結(jié)合miR-423-5p充當(dāng)ceRNA，減輕miR-423-5p在人鼻咽癌細(xì)胞中對FOSL2、RAB11B和LASP1蛋白表達(dá)的抑制，

調(diào)節(jié)Rho/Rac信號轉(zhuǎn)導(dǎo)從而促進(jìn)人鼻咽癌細(xì)胞的遷移和侵襲。在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中，AFAPAS1可以通過吸附miR-545-3p促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A，VEGFA）的表達(dá)，從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的血管生成和侵襲表型，促進(jìn)腫瘤的體內(nèi)生長和轉(zhuǎn) 移［51］。在前列腺癌中，AFAP1-AS1通過靶向miR-512-3p基因的3’-UTR下調(diào)其表達(dá)從而促進(jìn)前列腺癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。沉默AFAP1-AS1則可顯著降低前列腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)程相關(guān)蛋白細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1，CCND1）、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6（cyclin-dependent kinase 4/6，CDK4/6）的表達(dá)水平，而miR-512-3p的過表達(dá)能夠逆轉(zhuǎn)AFAP1-AS1在前列腺癌進(jìn)展中的作用［49］。有研究報道，AFAP1-AS1在骨肉瘤組織和細(xì)胞系中的表達(dá)明顯上調(diào)，且AFAP1-AS1的高表達(dá)水平與骨肉瘤患者的不良預(yù)后相關(guān)，這表明AFAP1-AS1可以促進(jìn)骨肉瘤進(jìn)展。在分子水平上，AFAP1-AS1可以直接與miR-497、miR-4695-5p結(jié)合以充當(dāng)ceRNA，通過抑制miRNA從而上調(diào)IGF1R的表達(dá)或激活T細(xì)胞因子4（T cell factor-4，TCF-4）/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲［43，63］。

表2 AFAP1-AS1在各種腫瘤中的功能特征Tab.2 The functional characteristics of AFAP1-AS1 in various cancers

圖2 AFAP1-AS1作為一種ceRNA在多種人類癌癥中的作用及其潛在分子機(jī)制，AFAP1-AS1可以抑制microRNA的表達(dá)并調(diào)節(jié)下游分子Fig.2 The role and underlying molecular mechanisms of AFAP1-AS1 as a ceRNA in various human cancers,AFAP1-AS1 could inhibit the expression of microRNA and regulate downstream molecules

2.2 轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控

真核生物基因調(diào)控的傳統(tǒng)模式一般是指通過蛋白質(zhì)與DNA之間的相互作用或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用來調(diào)控目的基因的表達(dá)，然而RNA與DNA之間的相互作用和RNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用的一種新的調(diào)控模式已經(jīng)被人們所認(rèn)知。非編碼RNA在基因表達(dá)調(diào)控中的作用越來越多地引起了學(xué)者們的重視，而lncRNA作為非編碼RNA的一種，在轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控也是非常重要的，其主要通過招募蛋白復(fù)合物或競爭轉(zhuǎn)錄因子等調(diào)控方式來影響基因的表達(dá)?；虮磉_(dá)成熟的mRNA需要剪接、加帽和加尾等加工過程，之后是mRNA翻譯。lncRNA可以在這些時期通過剪接調(diào)控、翻譯調(diào)控、mRNA穩(wěn)定性調(diào)控發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控功能。

AFAP1-AS1可以介導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。在各種細(xì)胞中，超過20%的lncRNA被多梳抑制復(fù)合物2（polycomb repressive complex 2，PRC2）結(jié)合，并使下游靶基因沉默［64］。眾所周知，EZH2是PRC2復(fù)合物的一個核心亞基，而PRC2是組蛋白修飾的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，它催化H3K27的三甲基化作用以介導(dǎo)基因沉默。最近研究表明，EZH2與AFAP1-AS1結(jié)合在1～1 500 nt的位點(diǎn)，且AFAP1-AS1可以通過將EZH2富集到H3K27me3修飾的靶基因啟動子而參與轉(zhuǎn)錄抑制。AFAP1-AS1在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的過表達(dá)增強(qiáng)了p15、p16和p21啟動子與EZH2的結(jié)合和H3K27me3修飾，從而促進(jìn)人結(jié)直腸癌細(xì)胞系SW480和HCT-116細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)展［30］。在肺癌細(xì)胞中EZH2可以結(jié)合由AFAP1-AS1介導(dǎo)的p21啟動子區(qū)域，而敲低AFAP1-AS1可減少EZH2介導(dǎo)的H3K27me3三甲基化作用和降低EZH2與p21啟動子區(qū)域的結(jié)合。總之，AFAP1-AS1可以部分地通過與EZH2結(jié)合沉默p21轉(zhuǎn)錄來促進(jìn)肺癌細(xì)胞的生長［37］。AFAP1-AS1可以與RNA結(jié)合蛋白相互作用介導(dǎo)惡性腫瘤轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控過程。AU堿基富集區(qū)RNA結(jié)合蛋白1（AU-rich element RNA binding factor 1，AUF1）是由前信使RNA（pre-messenger RNA，pre-mRNA）選擇性剪接產(chǎn)生的4個RNA結(jié)合蛋白（RNA-binding protein，RBP）家族，基于對靶mRNA 3’-UTR內(nèi)富含AU序列的識別，在控制mRNA靶標(biāo)的穩(wěn)定性或翻譯方面具有典型的作 用［65］。研究［66］表明，AFAP1-AS1可通過與AUF1結(jié)合來增強(qiáng)酪氨酸激酶受體（v-erb-b2 avian erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2，ERBB2）mRNA的翻譯，從而導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對曲妥珠單抗的耐藥。RNA結(jié)合基序蛋白5（RNA binding motif protein 5，RBM5）是RNA結(jié)合基序蛋白家族成員，通過對多種凋亡基因mRNA前體的選擇性剪接，從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)化和進(jìn)展進(jìn)而發(fā)揮抑癌蛋白的作用［67-69］。而AFAP1-AS1可通過靶向抑制RBM5的表達(dá)促進(jìn)前列腺癌的增殖和轉(zhuǎn) 移［50］?？傊?，AFAP1-AS1的促癌機(jī)制與其介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控作用密不可分，具體機(jī)制見圖3。

2.3 作為調(diào)控多種信號通路的上游分子

AFAP1-AS1作為上游信號分子參與癌癥各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)節(jié)。AFAP1-AS1參與調(diào)控10號染色體上缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN）/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，影響胃癌、腎細(xì)胞癌、垂體腺瘤細(xì)胞的增殖和侵襲表型。PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在多種癌癥中普遍激活，而PTEN作為一種腫瘤抑制因子，可以下調(diào)AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。敲低AFAP1-AS1可降低人胃癌SGC7901細(xì)胞、人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞Caki-1中p-AKT的蛋白水平并增加PTEN的表達(dá)，增加胃癌細(xì)胞凋亡通路相關(guān)蛋白cleaved-PARP、caspase-3、caspase-9和Bax的表達(dá)水平，降低Bcl-2的蛋白質(zhì)水平，在體外誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡［28］。而沉默PTEN基因則有效地減弱了AFAP1-AS1促進(jìn)腎癌細(xì)胞增殖、侵襲和EMT的能力［46］。在垂體腺瘤細(xì)胞中觀察到AFAP1-AS1可通過抑制miR-103a-3p表達(dá)激活PI3K/AKT信號通路軸促進(jìn)垂體腺瘤細(xì)胞增殖［47］。此外，有研究者發(fā)現(xiàn)AFAP1-AS1是通過RhoA/Rac2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與細(xì)胞增殖、侵襲的關(guān)鍵因子［26］。敲低AFAP1-AS1會降低肝癌細(xì)胞中RhoA和Rac2的表達(dá)，這表明AFAP1-AS1可能通過上調(diào)RhoA/Rac2信號來促進(jìn)肝癌進(jìn)程。EMT作為腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)，與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。AFAP1-AS1在惡性腫瘤組織和細(xì)胞中的過表達(dá)可通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路途徑誘導(dǎo)EMT表型。研究［16］表明，AFAP1-AS1的過表達(dá)激活Wnt/β-catenin途徑，通過增加在三陰性乳腺癌細(xì)胞系中c-Myc和EMT相關(guān)分子的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤發(fā)生和細(xì)胞侵襲。Twist1等EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子可受p38MAPK調(diào)控。p38MAPK作為中間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)靶點(diǎn)可通過激活Rho/Rho相關(guān)蛋白激酶（Rhoassociated protein kinase 1，ROCK1）信號通路促進(jìn)EMT［70-74］。有研究［44］報道，AFAP1-AS1基因敲除下調(diào)了骨肉瘤細(xì)胞中RhoC、ROCK1、磷酸化p38MAPK和Twist1的表達(dá)水平，AFAP1-AS1與骨肉瘤細(xì)胞中的RhoC結(jié)合，通過影響RhoC介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮致癌作用。

圖3 AFAP1-AS1在轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控的分子機(jī)制Fig.3 The molecular mechanism of AFAP1-AS1 regulation at the transcriptional and post-transcriptional levels

2.4 參與化療或靶向治療的藥物耐受

到目前為止，對不同治療藥物的耐受是癌癥治療的重大挑戰(zhàn)之一。AFAP1-AS1可介導(dǎo)順鉑和曲妥珠單抗耐藥。喉癌是最常見的頭頸部腫瘤，目前主要的治療方法已從喉總切除術(shù)發(fā)展成為采用放療或放化療結(jié)合的非手術(shù)治療方案。順鉑是目前的化學(xué)治療標(biāo)準(zhǔn)藥物，可與紫杉醇和5-氟尿嘧啶聯(lián)用，隨后放療可作為廣泛手術(shù)的替代方法［75］。然而，化學(xué)抗藥性和癌細(xì)胞干性嚴(yán)重限制了治療的成功率［76-77］。有證據(jù)表明，AFAP1-AS1促進(jìn)喉癌細(xì)胞的干性和腫瘤細(xì)胞對順鉑的耐藥性。這一過程是AFAP1-AS1通過負(fù)調(diào)控miR-320a來增加重組信號結(jié)合蛋白J（recombination signal binding protein J，RBPJ）表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖和減少細(xì)胞凋亡來介導(dǎo)的［40］。目前，針對人表皮生長因子受體2（human epidermal growth factor receptor 2，HER2）細(xì)胞外區(qū)的人源化單克隆抗體曲妥珠單抗已成為治療HER2陽性乳腺癌的選擇［78］。此外，將來自曲妥珠單抗耐藥細(xì)胞的細(xì)胞外AFAP1-AS1包裝到外泌體中，可介導(dǎo)在曲妥珠單抗敏感細(xì)胞對曲妥珠單抗的耐藥，而AFAP1-AS1的敲除可逆轉(zhuǎn)耐藥性［66］。

3 AFAP1-AS1在多種人類腫瘤中的臨床意義

許多研究表明，AFAP-AS1屬于一種癌基因，它在癌癥中表達(dá)上調(diào)。AFAP-AS1的上調(diào)具有重要的臨床意義，有望作為早期腫瘤診斷和預(yù)后的生物標(biāo)志物。此外，下調(diào)AFAP-AS1可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，降低耐藥性，增加凋亡數(shù)，可能成為腫瘤治療的一個有前途的靶點(diǎn)。

AFAP1-AS1表達(dá)上調(diào)與胃癌患者的臨床病理學(xué)特征及預(yù)后有關(guān)。胃癌患者腫瘤組織中AFAP1-AS1的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期及總生存期（overall survival，OS）均呈正相 關(guān)［79］。lncRNA不僅可以穩(wěn)定存在于腫瘤細(xì)胞和組織中，而且還可以穩(wěn)定存在于血清、尿液和胃液中［80］。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者血清AFAP1-AS1均較正常對照組上調(diào)，而胃癌患者手術(shù)后血清AFAP1-AS1明顯降低。血清AFAP1-AS1與癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）和糖類抗原19-9（carbohydrate antigen 19-9，CA19-9）聯(lián)合檢測可顯著提高診斷胃癌的靈敏度［81］。一項(xiàng)關(guān)于lncRNA表達(dá)與胃癌患者總體生存期關(guān)系的meta分析顯示，AFAP1-AS1是預(yù)測胃癌患者預(yù)后的有力候選者之一［82］。對非小細(xì)胞肺癌的臨床腫瘤組織樣本研究發(fā)現(xiàn)［83-84］，AFAP1-AS1在肺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常組織，臨床分期、吸煙史、浸潤程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均是AFAP1-AS1高表達(dá)的顯著相關(guān)因素。AFAP1-AS1的高表達(dá)與肺癌患者總生存期較短有關(guān)，是影響肺癌患者生存時間的獨(dú)立預(yù)后因素。非小細(xì)胞肺癌患者血清中可以檢測到AFAP1-AS1，與經(jīng)典腫瘤標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白19片段抗原21-1（cytokeratin 19 fragment antigen 21-1，CYFRA21-1）聯(lián)合應(yīng)用篩查可提高非小細(xì)胞肺癌的診斷效率［85］。對AFAP1-AS1表達(dá)與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者臨床病理學(xué)特征之間的相關(guān)性的研究發(fā)現(xiàn)，AFAP1-AS1的表達(dá)與腫瘤的大小、腫瘤脈絡(luò)膜浸潤和視神經(jīng)浸潤密切相關(guān)，且AFAP1-AS1高表達(dá)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的生存期短于AFAP1-AS1低表達(dá)患者［39］。對鼻咽癌［86］、胰腺癌［87］、結(jié)腸癌［31，88］、膽囊癌［25］、宮頸癌［22］、乳腺 癌［89-90］、神經(jīng)膠質(zhì)瘤［91］患者預(yù)后的研究發(fā)現(xiàn)，與AFAP1-AS1低表達(dá)的患者相比，AFAP1-AS1高表達(dá)的患者往往有較高的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險，且患者生存時間較短。

4 總結(jié)與展望

綜上所述，AFAP1-AS1有可能作為一種新的分子標(biāo)志物用于腫瘤的診斷和治療，并可作為一種獨(dú)立的預(yù)后指標(biāo)。