兒童穿孔性闌尾炎患者外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率及與臨床診療的相關性

劉 濤，李站虎（西安市兒童醫(yī)院，西安710003）

穿孔性闌尾炎是指闌尾由于多種因素誘發(fā)炎癥進一步惡化形成穿孔的疾病，穿孔后細菌易進入血液循環(huán)引起敗血癥，是臨床上常見的急腹癥之一。通常小兒穿孔性闌尾炎的發(fā)生率與成人相比較高，這是由于小兒闌尾炎病情發(fā)展快造成的，治療的關鍵是早期診斷和及時手術[1]。CD14 是一種白細胞分化抗原，CD14+單核細胞表面 HLA-DR 在抗原提呈過程中發(fā)揮關鍵作用，研究表明外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與機體免疫功能密切相關，另外其還可用作感染性疾病的早期預后指標[2]。目前關于外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14 的表達與穿孔性闌尾炎間的相關性研究尚不深入，基于此本研究擬分析外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與小兒穿孔性闌尾炎患者臨床診療的相關性，旨在為小兒穿孔性闌尾炎的早期診治提供合理依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇西安市兒童醫(yī)院2016年1月～2017年5月收治的49 例經(jīng)傳統(tǒng)開腹闌尾切除術治療的穿孔性闌尾炎患兒為開腹術組，選擇同期我院經(jīng)腹腔鏡闌尾切除術治療的55 例穿孔性闌尾炎患兒為腹腔鏡組，另選取同期我院健康體檢25 例患兒為對照組。比較三組的平均年齡、平均身高和平均體重差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

納入標準：符合穿孔性闌尾炎的診斷標準。 排除標準：①精神異常者；②并發(fā)嚴重臟器疾病者；③糖皮質(zhì)激素、免疫抑制藥物服用史者。

1.2 儀器與試劑 CD14-PE，HLA-DR/異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)，小鼠免疫球蛋白(immunoglobulin，IgG)-FITC，醫(yī)用低速離心機(德國Heraeus 公司)，F(xiàn)ACSCalibur 型流式細胞儀(美國Becton-Dickinson 公司)，流式專用試管(上海百賽生物有限公司)。

1.3 方法 采集開腹術組患兒、腹腔鏡組患兒和對照組EDTA-K3靜脈抗凝血2 ml，取三個干凈的流式試管，分別標注為開腹術組、腹腔鏡組和對照組，于開腹術組管和腹腔鏡組管加入5 μl HLADR/FITC，5 μlCD14-PE，對照組管加入5 μl 小鼠IgG1/FITC，10 μl CD14-PE。手動或振動儀混勻靜脈抗凝血，各取10 μl 分別加入開腹術組管和腹腔鏡組管及對照組管中，完全充分震蕩混勻后放于室溫暗室內(nèi)作用15 min，于各管中加入20 μl 紅細胞裂解液充分振動混勻后放于室溫下暗室內(nèi)作用15～20 min，待混懸液至清亮，準備開始上機離心，將轉速設定為1 000 r/min 離心5 min 后棄掉上清。每管中各加入5ml PBS，以1 ml 鞘液充分混勻后上機進行分析。以CD14/PE 射門，檢測HLA-DR/FITC+/PE+雙性細胞的百分率。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 21.0 統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，符合正態(tài)分布計量資料采用以均值±標準差(x±s)表示，行t檢驗，計數(shù)資料以n(%)表示，行χ2檢驗。P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 三組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率的比較 見表1。術前開腹術組和腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率均低于對照組，其差異具有統(tǒng)計學意義(F=50.231，P=0.002)，術后2和5天，開腹術組和腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率較術前均顯著升高，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，對照組外周血HLA-DR/CD14表達率較術前升高，但是其差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。術后2 天和5 天，腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率高于開腹術組，且低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義。

表1 三組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率的比較(x±s,%)

2.2 腹腔鏡組與開腹術組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率變化的比較 見表2。相較于開腹術組，腹腔鏡組外周血單核細胞表面HLADR/CD14表達率變化的幅度較大，其差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.001，表2)。

表2 腹腔鏡組與開腹術組外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率變化的比較(x±s,%)

3 討論

闌尾炎是常見的外科急腹癥，診斷和治療的不及時易發(fā)展為穿孔性闌尾炎。隨著醫(yī)療技術的進步，手術方法已由傳統(tǒng)的開腹闌尾切除術逐漸變?yōu)楦骨荤R闌尾切除術。小兒急性闌尾炎穿孔較為多發(fā)，6～10 歲是患兒的高發(fā)階段。近年來，小兒急性闌尾炎穿孔的發(fā)病率呈逐年攀升趨勢，對患兒的身體和心理帶來了極大的負面影響。治療的關鍵是早期診斷和及時手術。

CD14 是一種糖基磷脂酰肌醇錨定蛋白，參與機體免疫反應中的固有免疫應答，CD14 與多種疾病相關，在宿主抵御感染中具有雙重作用[3]。HLADR 是單核細胞表面參與外來抗原加工、處理和提呈的關鍵分子，已有研究指出HLA-DR/CD14 足量表達對機體的固有免疫極為重要[4-5]，另外當嚴重感染并發(fā)膿毒癥時，患者 HLA-DR/CD14 的表達量顯著下調(diào)[6-7]，因此HLA-DR/CD14 的表達率與機體的免疫功能密切相關[8-9]，臨床診療上其還可用作感染性疾病的早期預后指標[10]。目前關于外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14 的表達與穿孔性闌尾炎間的相關性研究尚不深入，本研究擬分析外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率與小兒穿孔性闌尾炎患者臨床診療的相關性，結果顯示術后腹腔鏡組的外周血HLA-DR/CD14表達率高于開腹術組，并且腹腔鏡組外周血HLA-DR/CD14表達率變化的幅度較大，能促使患兒的HLA-DR/CD14表達率盡快恢復至正常值，增強患兒的免疫功能，促進康復。

綜上所述，腹腔鏡闌尾切除術患兒外周血單核細胞表面HLA-DR/CD14表達率較高，能有效增強患兒免疫功能，對康復產(chǎn)生積極作用。