經(jīng)陰道彩色多普勒超聲聯(lián)合血清miR-130a，miR-425-5p水平檢測對宮頸癌的診斷效能分析

趙白信，于慧娟，焦方杰，邢麗麗，黃 蕾，姚輝梅

（鄭州市第七人民醫(yī)院功能科，鄭州 450000）

宮頸癌是威脅女性生命健康的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤[1]。流行病學顯示[2]，我國宮頸癌的發(fā)病率居于女性惡性腫瘤的第2 位，每年約有13 萬宮頸癌的新發(fā)病例，且發(fā)病年齡有年輕化趨勢。做好宮頸癌的篩查診斷，及早采取有效地干預對于降低宮頸癌病死率有重要意義[3]。目前影像學檢查是惡性腫瘤診斷的常用輔助手段，彩色多普勒超聲在傳統(tǒng)二維超聲結(jié)構(gòu)圖像的基礎(chǔ)上，能提供淺表器官的血流動力學信息，是婦科疾病診斷中應用最廣泛的影像學檢查方式，但該方式受醫(yī)生專業(yè)經(jīng)驗、體位等因素影響，常有漏診或誤診的情況發(fā)生[4-5]。近年來分子生物學標志物檢測開始在疾病的診斷中應用，為惡性腫瘤的診斷提供了新途徑。微小核糖核酸（micro ribonucleic acid，miRNA）是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼小RNA，參與細胞的增殖、分化等生理過程，與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究表明[6]，miR-130a，miR-425-5p 在宮頸癌患者中有異常表達，且與宮頸癌的病理參數(shù)密切相關(guān)，可作為宮頸癌的參考診斷標志物。目前關(guān)于彩色多普勒超聲及血清分子生物學標志物在宮頸癌中的診斷研究較多，但關(guān)于二者聯(lián)合應用的效能仍未明確。故此，本研究特探討經(jīng)陰道彩色多普勒超聲聯(lián)合血清miR-130a，miR-425-5p表達水平檢測對宮頸癌的診斷效能，以期為宮頸癌的早期診斷方式提供補充與參考?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2017年1月～2019年1月鄭州市第七人民醫(yī)院收治的宮頸癌患者58 例為癌癥組，同期于門診（體檢）診斷為宮頸炎及宮頸上皮瘤變者77 例為疾病組。癌癥組及疾病組均經(jīng)活檢或手術(shù)病理檢查確診。癌癥組年齡30～66 歲，平均年齡45.32±6.35 歲；已婚48 例，未婚10 例；經(jīng)產(chǎn)婦45 例；癥狀表現(xiàn)：接觸性陰道出血6 例，高危型乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染10 例，絕經(jīng)后陰道出血15 例，宮頸刮片細胞學檢查陽性或疑似陽性15 例，碘試驗或醋酸試驗陽性12 例。疾病組年齡28～65 歲，平均年齡45.02±6.50歲；已婚64例，未婚13例；經(jīng)產(chǎn)婦63例；癥狀表現(xiàn)：接觸性陰道出血24 例，HPV 感染28 例，絕經(jīng)后陰道出血13 例，宮頸刮片細胞學檢查陽性或疑似陽性7 例，碘試驗或醋酸試驗陽性5 例。另選取同期來院體檢的健康女性60 例為對照組，年齡26～65 歲，平均年齡43.50±6.50 歲；已婚48 例，未婚12 例；經(jīng)產(chǎn)婦43 例。三組受檢者的年齡、婚育史比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究開展前已獲得醫(yī)院倫理委員會批準，納入研究者均簽署知情同意書。

1.2 試劑與儀器 Voluson E8（美國GE 公司）多普勒超聲診斷系統(tǒng)；miRNeasy Mini Kit 試劑盒（德國Qiagen 公司）；Prime ScriPtTM反轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國TaqMan）；熒光定量PCR 試劑盒檢測（美國ABI 公司）。

1.3 方法

1.3.1 宮頸癌診斷方法：參照《宮頸癌診斷與治療指南(第四版)》[7]：宮頸活檢或?qū)嵤m頸高頻電波刀（loop electrosurgical excisionprocedure，LEEP）宮頸錐切術(shù)病理檢查確診，以上診斷結(jié)果作為金標準。

1.3.2 陰道彩色多普勒超聲檢查：檢查開始前叮囑受檢者排空膀胱，仰臥于檢查床，取膀胱截石位，少量耦合劑涂抹于超聲探頭頂端后套上避孕套，將探頭緩慢插入受檢者陰道中段，進行橫、縱、斜多切面檢查，后觀察宮頸內(nèi)、外口，查看宮頸管回聲及宮頸的整齊性。后使用彩色多普勒血流顯象（color Doppler flow imaging，CDFI）查看宮頸血流分布，記錄收縮期血流速度（peak systolic velocity，PSV）和阻力指數(shù)（resistive index，RI）。最后對宮體、卵巢及宮旁各組織情況進行仔細觀察。超聲檢查均為具有5年以上臨床經(jīng)驗的同一超聲科醫(yī)師進行操作。以Adler 血流分級進行性質(zhì)判斷，其中0～Ⅰ級為良性，Ⅱ～Ⅲ級為惡性。

1.3.3 血清miR-130a，miR-425-5p 檢測：抽取受檢者空腹外周靜脈血4 ml，3 500 r/min 離心10 min，離心半徑12.5 cm，分離上層血清，保存于-80℃待檢。提取總RNA，擴增反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物cDNA，取0.5 μl cDNA 模板，以熒光定量PCR 試劑盒檢測血清中miR-130a，miR-425-5p 水平，目的基因的相對表達量以2-△△Ct表示。實驗步驟均嚴格按照試劑盒操作說明進行。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS19.0 統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，正態(tài)分布資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩樣本比較采用LSD-t檢驗；超聲，miR-130a，miR-425-5p 診斷效能評價采用靈敏度、特異度、準確度表示，并以Med Calc 繪制受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC）分析單獨檢測和聯(lián)合檢測的診斷價值，以Hanley-McNeil 方法比較ROC 曲線下面積（area under curve，AUC）。以α=0.05 為校驗水準。

2 結(jié)果

2.1 經(jīng)陰道彩色多普勒超聲診斷參數(shù)比較 見表1。三組PSV，RI 水平比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；癌癥組、疾病組、對照組的PSV依次降低，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.001） ；癌癥組、疾病組和對照組的RI 依次升高，兩兩比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。

表1 三組的PSV，RI 水平比較（±s）

項目癌癥組（n=58）疾病組（n=77）對照組（n=60）FP PSV（cm/s）12.01±2.85 9.53±1.98 8.52±1.23 43.178 ＜0.001 RI0.42±0.10 0.58±0.12 0.66±0.14 60.098 ＜0.001

2.2 血清miR-130a，miR-425-5p 表達情況比較 見表2。三組的血清miR-130a，miR-425-5p表達水平比較差異有統(tǒng)計學意義（均P＜0.001），癌癥組的血清miR-130a，miR-425-5p表達水平均高于疾病組和對照組，疾病組均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.001）。

表2 三組的血清miR-130a，miR-425-5p 表達情況比較（±s）

表2 三組的血清miR-130a，miR-425-5p 表達情況比較（±s）

項目癌癥組（n=58）疾病組（n=77）對照組（n=60）FP miR-130a0.092±0.0300.045±0.0120.030±0.008181.070＜0.001 miR-425-5p0.733±0.2030.365±0.0980.205±0.048259.304＜0.001

2.3 經(jīng)陰道彩色多普勒超聲與血清miR-130a，miR-425-5p 單獨及聯(lián)合診斷宮頸癌的效能分析 見表3。以病理結(jié)果為標準，分析經(jīng)陰道彩色多普勒超聲與血清miR-130a，miR-425-5p 單獨及聯(lián)合診斷宮頸癌的靈敏度、準確度、特異度。陰道彩色多普勒超聲與血清miR-130a，miR-425-5p 聯(lián)合檢測的敏感度比單獨檢測低，但特異度和準確度比單獨檢測高。

表3 經(jīng)陰道彩色多普勒超聲與血清miR-130a，miR-425-5p 單獨及聯(lián)合診斷宮頸癌的效能（%）

2.4 經(jīng)陰道彩色多普勒超聲與血清miR-130a，miR-425-5p 聯(lián)合診斷宮頸癌的ROC 曲線分析 見圖1。經(jīng)陰道彩色多普勒超聲、血清miR-130a，miR-425-5p及聯(lián)合診斷宮頸癌的AUC分別為0.889，0.820，0.785，0.932，三者聯(lián)合檢測的AUC 大于單獨檢測（P＜0.05）。

圖1 系列聯(lián)合檢測ROC 曲線圖

3 討論

宮頸癌在病變早期多無明顯的癥狀體征，容易被忽視、漏診，患者就診時已進入中晚期，病死率較高，因此做好宮頸癌的早期篩查，診斷是降低病死率的有效手段[8]。目前宮頸癌的篩查方式較多，如何需求一種安全、客觀、有效、可重復性強的篩查方法是臨床醫(yī)師的關(guān)注重點。HPV 感染是導致宮頸癌病變的首要因素，因此HPV 是宮頸癌的主要篩查方式之一，但該方式的敏感度和特異度不高，臨床應用具有一定的局限性[9]。脫落細胞學、病理檢查是指南推薦的宮頸癌診斷方式，雖有較高的特異度，但對檢查技術(shù)的要求較高，且費用昂貴[10]。以彩色多普勒超聲為主的影像學檢查和分子生物學檢測以安全、無創(chuàng)、可重復性好的特點成為臨床首選。

本研究結(jié)果中，癌癥組的PSV 大于疾病組和對照組，RI 小于疾病組和對照組，血清miR-130a，miR-425-5p表達水平高于疾病組和對照組（P＜0.001），提示經(jīng)陰道彩色多普勒超聲對宮頸癌診斷有特異性，且血清miR-130a，miR-425-5p表達水平與宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。經(jīng)陰道彩色多普勒超聲是產(chǎn)科超聲的新突破，血流信息是彩色多普勒超聲判斷病灶性質(zhì)的關(guān)鍵，新生血管是惡性腫瘤生成和發(fā)展的基礎(chǔ)。宮頸的惡性腫瘤因細胞生長活躍，代謝和組織生長快速，出現(xiàn)大量的異常新生血管結(jié)構(gòu)，并形成動靜脈短路，此類血管平滑肌相較于正常組織的血管彈性差，經(jīng)彩色多普勒超聲檢查可探及豐富的血流信號，頻譜多普勒內(nèi)為低阻動脈血流，PSV 數(shù)值明顯增加，RI 較小[11-12]。慢性宮頸炎或?qū)m頸上皮瘤變者患者多存在宮頸囊腫和肥大，可發(fā)現(xiàn)少量宮頸血流信號，而正常宮頸組織無明顯的血流信號，因此其PSV 值小，而RI 值大[13]。何玉春等[14]研究結(jié)果中顯示癌癥組的PSV，RI 與其他疾病患者有顯著差異，與本研究結(jié)果相似，證實經(jīng)陰道彩色多普勒超聲對宮頸癌的診斷鑒別有一定的價值。

miRNA 作為非編碼的RNA 分子，主要參與真核生物轉(zhuǎn)錄后基因的表達與調(diào)控，與細胞的增殖、分化與凋亡等生理過程密切相關(guān)，在多種癌組織的病理中均有異常表達[15]。馬向薇等研究顯示[16]，miR-130a 可促進惡性腫瘤細胞的增殖與轉(zhuǎn)移，其機制與激活NF-κB 等信號通絡(luò)有關(guān)。朱軍等[17]研究顯示，miR-425-5p 能抑制程序性細胞死亡因子10（programmed cell death 10，PDCD10）的表達，促進腫瘤的增殖、遷移和侵襲。以上分析與結(jié)果說明血清miR-130a，miR-425-5p參與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展，可作為潛在分子生物學標志物。

經(jīng)陰道彩色多普勒超聲在宮頸癌的診斷鑒別中雖可清晰的顯示病灶聲像特征及血流信息，但早期的宮頸癌及癌前應變者宮頸陰道外觀多正常，且未出現(xiàn)浸潤和遠處轉(zhuǎn)移，超聲聲像圖表現(xiàn)不典型，無明顯的血流信號，有誤診及漏診的可能[18]。miRNA 在外周血中含量較為豐富且穩(wěn)定，在胃癌、結(jié)直腸癌、卵巢癌等惡性腫瘤中均有異常表達，作為潛在的腫瘤分子生物學標志物，對于診斷宮頸癌的特異度不高[19-20]。本研究中ROC 曲線分析顯示，經(jīng)陰道彩色多普勒超聲聯(lián)合血清miR-130a，miR-425-5p 診斷宮頸癌的敏感度、特異度、準確度、AUC 分別為74.14%，90.91%，83.70%和0.932，陰道多普勒超聲分別為77.59%，87.01%，82.96%和0.889，血清miR-130a 分別為79.31%，80.52%，80.00%和0.820，miR-425-5p 分別為74.07%，65.19%，76.30%和0.785，提示經(jīng)陰道彩色多普勒超聲聯(lián)合血清miR-130a，miR-425-5p 診斷宮頸癌有更高的特異度、準確度和AUC，具有良好的診斷效能。

綜上所述，在宮頸癌的診斷中，應用經(jīng)陰道彩色多普勒超聲、血清miR-130a，miR-425-5p 聯(lián)合診斷較單獨應用具有更高的效能，且具有安全、無創(chuàng)、可重復強的優(yōu)勢，可作為宮頸癌篩查、診斷的首選方式。宮頸癌的發(fā)生涉及因素較多且機制復雜，是否有其更加特異性生化指標有待進一步探討，且是下一步研究方向。