補(bǔ)體系統(tǒng)C1q/C3介導(dǎo)的膠質(zhì)細(xì)胞激活在小鼠抑郁樣行為中的作用

王 睿，王清波，謝 婷，郭開(kāi)華

（中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院人體解剖學(xué)教研室，廣東廣州 510080）

抑郁癥是較為常見(jiàn)的神經(jīng)精神疾病，全球發(fā)病率逐年升高，目前患病率約為6%［1］。關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制及干預(yù)辦法已經(jīng)開(kāi)展了大量的研究，藥物在一定程度上可以減緩相關(guān)癥狀，但是治療效果仍然不理想［2］。因此尋找新的抗抑郁治療靶點(diǎn)藥物有重要意義。有文獻(xiàn)報(bào)道杏仁核與社會(huì)情緒記憶密切相關(guān)［3］。杏仁核部位突觸減少可能是小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為原因之一，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞作為免疫細(xì)胞，具有修剪突觸的作用。文獻(xiàn)報(bào)道在抑郁狀態(tài)下中樞系統(tǒng)產(chǎn)生神經(jīng)炎癥［4］，小膠質(zhì)細(xì)胞在炎癥狀態(tài)下被激活，進(jìn)一步誘導(dǎo)神經(jīng)毒性星形膠質(zhì)細(xì)胞的產(chǎn)生［5］。有文獻(xiàn)報(bào)道小膠質(zhì)細(xì)胞可以產(chǎn)生補(bǔ)體成分（complement component 1，C1q）［6］，因此我們推測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞激活、神經(jīng)元突觸修剪可能與補(bǔ)體系統(tǒng)有密切的關(guān)系。補(bǔ)體系統(tǒng)是人類體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)中重要的一環(huán)，研究表明補(bǔ)體系統(tǒng)在神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮了重要作用［7］，也有研究證實(shí)在精神疾病中腦內(nèi)補(bǔ)體含量發(fā)生變化［8］，補(bǔ)體C1q 是補(bǔ)體系統(tǒng)中經(jīng)典途徑的起始蛋白，在補(bǔ)體系統(tǒng)中扮演重要的角色。研究證明，補(bǔ)體蛋白C1q 和下游補(bǔ)體蛋白C3（complement component 3，C3）定位于未成熟的突觸，C3 與小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的補(bǔ)體蛋白C3a 受體（C3aR）結(jié)合，在無(wú)功能的網(wǎng)狀突觸的發(fā)育修剪方面起了重要作用［9］。在突觸修剪過(guò)程中，這些受體表達(dá)在小膠質(zhì)細(xì)胞中被上調(diào)，隨后被下調(diào)。此外，有研究進(jìn)一步證明，星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的C3 和小膠質(zhì)細(xì)胞C3aR之間的交互作用調(diào)節(jié)C3/C3a-C3aR 信號(hào)通路，從而動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元突觸修剪過(guò)程［10］。這些發(fā)現(xiàn)提示抑郁癥發(fā)病過(guò)程中的抑郁狀態(tài)可能與補(bǔ)體C1q 和C3 激活小膠質(zhì)細(xì)胞修剪突觸有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)研究杏仁核補(bǔ)體途徑C1q/C3 介導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞激活修剪突觸誘發(fā)小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為的分子機(jī)制，為抗抑郁癥藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)需要的C57BL/6 小鼠購(gòu)自廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心［許可證號(hào)：SYXK（粵）2018-0209］，CX3CR1-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠（B6.129P-CX3CR1tm1 Litt/J）購(gòu)自Jackson Laboratory，C1q-/-購(gòu)自南方模式生物公司。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于SPF 屏障環(huán)境：動(dòng)物房環(huán)境在（22±2）℃，相對(duì)濕度在（55±5）%，光照時(shí)間12 h黑暗時(shí)間12 h，水和食物獲取自由。選取12只8 周齡雄性C57BL/6 小鼠，12 只8 周齡雄性C1q-/-小鼠群養(yǎng)5～7 d，使小鼠適應(yīng)環(huán)境，隨機(jī)分為對(duì)照（WT）組，抑郁模型（CRS）組，C1q敲除組（C1q-/-），C1q敲除模型組（C1q-/-+CRS）每組6只，單籠單只飼養(yǎng)，中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)機(jī)構(gòu)審批并通過(guò)本實(shí)驗(yàn)所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作。

1.2 抑郁模型建立

慢性束縛動(dòng)物建立抑郁模型是目前公認(rèn)的抑郁癥動(dòng)物模型之一，建立該動(dòng)物模型的方法在參考文獻(xiàn)［11］基礎(chǔ)上，進(jìn)行了適當(dāng)修改。具體建模方法為：每天將模型組小鼠置于通風(fēng)良好的50 mL 圓錐形管內(nèi)，采用一根3 cm 長(zhǎng)的空心管塞到錐形管的蓋子內(nèi)，將其尾部伸出錐形管外，防止小鼠尾部壓傷。在此裝置中小鼠不能向前或向后移動(dòng)，每天束縛6～7 h，給予慢性束縛應(yīng)激，對(duì)照組小鼠在籠內(nèi)自由活動(dòng)，連續(xù)14 d。CX3CR1-GFP轉(zhuǎn)基因小鼠與C1q-/-造模方法與上述方法相同。

1.3 行為學(xué)檢測(cè)

1.3.1 懸尾實(shí)驗(yàn) 參照Depino 等［12］報(bào)道的方法測(cè)定小鼠的抑郁狀態(tài)，用膠帶纏繞在小鼠尾部，將小鼠懸掛在空中，并將膠帶固定在距離木質(zhì)表面25 cm的線上。通過(guò)SuperTst高通量懸尾測(cè)試軟件（上海欣軟信息技術(shù)有限公司）記錄小鼠5 min 內(nèi)的不動(dòng)時(shí)間。

1.3.2 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 參照Depino 等［12］報(bào)道的方法測(cè)定小鼠的抑郁狀態(tài)，將小鼠輕輕放入玻璃燒杯中（直徑15 cm；高度25 cm）裝入14 cm 深的水（水溫為25 ℃）用SuperFst 高通量強(qiáng)迫游泳測(cè)試軟件（上海欣軟信息技術(shù)有限公司）記錄小鼠5 min內(nèi)不動(dòng)的時(shí)間。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用紙巾將小鼠擦干，放在有墊料的籠子里。

1.4 免疫熒光染色方法

腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉小鼠，注射劑量按照0.2 g/L 注射。從劍突上方打開(kāi)胸腔，暴露心臟，剪開(kāi)右心耳，在左心尖處插管，生理鹽水灌注，待流出血液轉(zhuǎn)為澄清液體后改用4 ℃含多聚甲醛（paraformaldehyde，PFA）磷酸緩沖液灌注，固定組織，濃度為40 g/L，迅速取腦并在相同濃度的溶液中后固定24 h，蔗糖溶液梯度脫水后進(jìn)行連續(xù)冰凍切片（厚度40 μm）。

單標(biāo)染色：將全腦冰凍切片經(jīng)磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗片3 次，5 min/次后，用含0.3% Triton X-100 的牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）37 ℃環(huán)境下孵育30 min，加入一抗在37 ℃孵育2 h后4 ℃孵育過(guò)夜，次日復(fù)溫至室溫后PBS洗3次，5 min/次，加入二抗，37 ℃孵育2 h，PBS洗3次5 min/次，晾干，熒光封片劑封片。

置于激光共聚焦顯微鏡（Zeiss 780）下拍照，使用Image J 圖像分析軟件對(duì)Iba-1、GFAP、C1q、C3、PSD95和Syn熒光強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS25.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，4 組間數(shù)據(jù)通過(guò)組間方差齊性檢驗(yàn)，采用雙因素方差分析，采用LSD 進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抑郁模型小鼠行為學(xué)以及各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)變化

2.1.1 兩組小鼠抑郁狀態(tài)比較 為檢測(cè)WT 組和CRS 組小鼠的抑郁狀態(tài)，在造模結(jié)束后，對(duì)兩組小鼠進(jìn)行懸尾和強(qiáng)迫游泳行為學(xué)檢測(cè)。行為學(xué)結(jié)果顯示兩組結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=9.136，P＜0.000 1；t=6.513，P＜0.000 1），5 min 內(nèi)CRS 組搖擺不動(dòng)時(shí)間明顯高于WT組，具有抑郁樣行為（圖1）。

2.1.2 兩組小鼠杏仁核內(nèi)突觸變化情況 免疫熒光染色檢測(cè)小鼠杏仁核內(nèi)Syn 與PSD95 熒光強(qiáng)度，兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。WT 組杏仁核內(nèi)Syn 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS組（t=13.62，P＜0.000 1；圖2A～G），說(shuō)明CRS 組正常突觸丟失更多。WT 組杏仁核內(nèi)PSD95 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS 組（t=4.032，P=0.003 8；圖2 H～N）。

圖2 免疫熒光法檢測(cè)杏仁核內(nèi)Syn和PSD95熒光強(qiáng)度Fig.2 Fluorescence intensity of Syn and PSD95 in the amygdala by immunofluorescence

2.1.3 兩組小鼠杏仁核內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞變化 本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明在抑郁模型小鼠杏仁核部位突觸含量減少，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)炎癥狀態(tài)下通常伴有小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，修剪細(xì)胞周圍突觸。因此造模結(jié)束后，通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)小鼠杏仁核的小膠質(zhì)細(xì)胞（Iba-1）與星形膠質(zhì)細(xì)胞（GFAP）熒光強(qiáng)度，兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CRS組杏仁核內(nèi)Iba-1熒光強(qiáng)度明顯高于WT 組（t=5.921，P=0.000 4；圖3A～G）。CRS組杏仁核內(nèi)GFAP熒光強(qiáng)度明顯高于WT組（t=4.189，P=0.003；圖3H～N）。

圖3 免疫熒光檢測(cè)杏仁核內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞熒光強(qiáng)度Fig.3 Fluorescence intensity of microglia and astrocytes in amygdala detected by immunofluorescence

星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的C3 和小膠質(zhì)細(xì)胞C3aR之間的交互作用調(diào)節(jié)C3/C3a-C3aR 信號(hào)通路，從而動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞修剪功能［10］。通過(guò)免疫熒光染色檢測(cè)GFP小鼠杏仁核的小膠質(zhì)細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞相互作用情況。結(jié)果顯示，與GFP組相比，GFP+CRS 組星形膠質(zhì)細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞相互作用明顯，小膠質(zhì)細(xì)胞分支變粗，突起增多（圖4）。

圖4 免疫熒光比較杏仁核內(nèi)小膠質(zhì)細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞相互作用情況Fig.4 Comparison of interaction between microglia and astrocytes in the amygdala by immunofluorescence

2.1.4 兩組小鼠杏仁核內(nèi)C1q、C3變化情況 上述結(jié)果已經(jīng)證實(shí)CRS 組星形膠質(zhì)細(xì)胞與小膠質(zhì)細(xì)胞均明顯激活，且相互作用明顯，接下來(lái)，觀察兩種膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生補(bǔ)體情況。免疫熒光染色檢測(cè)小鼠杏仁核內(nèi)C1q 與C3 熒光強(qiáng)度，兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CRS 組杏仁核內(nèi)C1q 熒光強(qiáng)度明顯高于WT 組（t=6.667，P=0.000 2；圖5A～G）。CRS 組杏仁核內(nèi)C3 熒光強(qiáng)度明顯高于WT組（t=3.24，P=0.0119；圖5H～N）。

圖5 免疫熒光法檢測(cè)杏仁核內(nèi)C1q、C3熒光強(qiáng)度Fig.5 Fluorescence intensity of C1q and C3 in the amygdala detected by immunofluorescence

2.2 WT、CRS、C1q-/-、C1q-/-+CRS 四組小鼠抑郁狀態(tài)與突觸的變化

2.2.1 WT、CRS、C1q-/-、C1q-/-+CRS 四組小鼠模型組抑郁狀態(tài)比較 為評(píng)估4 組小鼠的抑郁狀態(tài)，懸尾實(shí)驗(yàn)雙因素方差分析結(jié)果顯示：基因型的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=24.032，P＜0.001），抑郁模型處理的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.542，P＜0.001），組間兩兩比較顯示：與WT 組比較，CRS 組不動(dòng)時(shí)間明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（161.15±10.11vs.240.32±14.30，P＜0.001）與CRS 組比較，C1q-/-+CRS 組不動(dòng)時(shí)間明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（240.32±14.30vs.155.28±10.02，P＜0.001）；強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)雙因素方差分析結(jié)果顯示：基因型的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=29.918，P＜0.001），抑郁模型處理的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=22.862，P＜0.001），組間兩兩比較顯示，與WT 組比較，CRS組不動(dòng)時(shí)間明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（152.39±14.32vs.192.55±4.79，P＜0.001）與CRS 組比較，C1q-/-+CRS 組不動(dòng)時(shí)間明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（192.55±4.79vs.148.03±23.95，P＜0.001；圖6）。

圖6 懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳比較各組小鼠抑郁樣行為Fig.6 Comparison of depression-like behaviors between groups by using the tail suspension test and the forced swimming test

2.2.2C1q敲除模型組與C57小鼠模型組杏仁核內(nèi)突觸變化情況 Syn熒光強(qiáng)度結(jié)果雙因素方差分析顯示：基因型的主效應(yīng)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.937，P=0.347），抑郁模型處理的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=18.647，P＜0.001），組間兩兩比較顯示：WT 組杏仁核內(nèi)Syn 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（100.00±10.41vs.26.67±0.87，P＜0.001）；C1q-/-+CRS 組杏仁核內(nèi)Syn 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（50.37±10.90vs.26.67±0.87，P＜0.05），說(shuō)明C1q-/-+CRS 組正常突觸消除減少（圖7）。PSD95熒光強(qiáng)度結(jié)果雙因素方差分析顯示：基因型的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.672，P=0.029），抑郁模型處理的主效應(yīng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.085，P=0.016），組間兩兩比較顯示：WT 組杏仁核內(nèi)PSD95 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（100.00±20.99vs.53.97±14.53，P=0.0185）；C1q-/-+CRS 組杏仁核內(nèi)Syn 熒光強(qiáng)度明顯高于CRS 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（97.09 ± 11.44vs.53.97±14.53，P=0.0283；圖8）。

圖7 免疫熒光法檢測(cè)各組杏仁核內(nèi)Syn熒光強(qiáng)度Fig.7 Detection of Syn fluorescence intensity in the amygdala among groups by immunofluorescence

圖8 免疫熒光法檢測(cè)各組杏仁核內(nèi)PSD95熒光強(qiáng)度Fig.8 Detection of PSD95 fluorescence intensity in the amygdala among groups by immunofluorescence

3 討論

抑郁癥影響全球近3.22億人口的生活，嚴(yán)重影響人們?nèi)粘Ｉ睿?3］，了解抑郁癥作用機(jī)制有助于更好防治抑郁癥，提高人們生活質(zhì)量。目前有研究表明抑郁癥與腦內(nèi)的前額葉皮質(zhì)［14］和前扣帶皮質(zhì)關(guān)系密切［15］，杏仁核作為應(yīng)對(duì)情緒潛在壓力的重要中樞［16］，嚴(yán)重抑郁癥患者存在杏仁核基本結(jié)構(gòu)和功能損害［17-18］，但是關(guān)于抑郁癥患者杏仁核部位的病理機(jī)制的相關(guān)報(bào)道較少，因此本研究將杏仁核作為研究部位。

抑郁癥與炎癥的發(fā)生密不可分，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥激活是抑郁癥發(fā)病機(jī)制中的關(guān)鍵。已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道在焦慮癥中可以在杏仁核引起神經(jīng)炎癥［19］。但是在抑郁癥中杏仁核部位的神經(jīng)炎癥產(chǎn)生及機(jī)制尚不清楚，因此本研究探索在抑郁模型鼠杏仁核部位神經(jīng)炎癥相關(guān)指標(biāo)的變化情況。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥因子失衡會(huì)導(dǎo)致小膠質(zhì)細(xì)胞功能損傷，小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的免疫細(xì)胞，參與神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的突觸修剪，修復(fù)神經(jīng)損傷，腦內(nèi)炎癥反應(yīng)，發(fā)揮先天免疫應(yīng)答作用［20］。在本研究中也證實(shí)了這一觀點(diǎn)，在抑郁模型組的小膠質(zhì)細(xì)胞明顯激活，細(xì)胞胞體變大，突起增多。星形膠質(zhì)細(xì)胞被炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子激活，激活的星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生許多可能影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)因子，并向激活的小膠質(zhì)細(xì)胞提供正反饋，而且在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后會(huì)被誘導(dǎo)變成具有神經(jīng)毒性的反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞［21］。本研究同樣證明這一觀點(diǎn)，在抑郁模型組的星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯激活，胞體變大，突起同樣增多。而且在本研究中還發(fā)現(xiàn)在抑郁模型組中小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞具有明顯交互作用。有研究發(fā)現(xiàn)在抑郁癥動(dòng)物模型中M1型激活的小膠質(zhì)細(xì)胞增加［22］。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，小膠質(zhì)細(xì)胞激活誘發(fā)神經(jīng)毒性星形膠質(zhì)細(xì)胞增多［5］，進(jìn)一步加重腦內(nèi)神經(jīng)炎癥的產(chǎn)生。

小膠質(zhì)細(xì)胞與突觸的相互作用在維持神經(jīng)元連接和影響神經(jīng)元可塑性方面非常重要。在健康和發(fā)育中的腦中，小膠質(zhì)細(xì)胞修剪突觸前和突觸后的突觸，從而調(diào)節(jié)突觸的神經(jīng)支配。最近，已經(jīng)有文獻(xiàn)證明小膠質(zhì)細(xì)胞自噬在突觸修剪中的關(guān)鍵作用［23］。本研究對(duì)突觸素蛋白和突觸后蛋白進(jìn)行熒光標(biāo)記，也發(fā)現(xiàn)在抑郁模型組突觸素蛋白和突觸后蛋白明顯減少。人們認(rèn)為補(bǔ)體C1q 和C3“標(biāo)記”了這樣的突觸，從而將小膠質(zhì)細(xì)胞導(dǎo)向它們進(jìn)行吞噬［24］，因此我們認(rèn)為補(bǔ)體途徑可能在抑郁癥產(chǎn)生的神經(jīng)炎癥中扮演重要角色。

補(bǔ)體途徑是先天免疫調(diào)節(jié)關(guān)鍵途徑，補(bǔ)體途徑中C1q 是經(jīng)典補(bǔ)體途徑多亞單位復(fù)合體C1 的識(shí)別成分。C1q不依賴于C1r和C1s，它可以增強(qiáng)凋亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片的清除，下調(diào)吞噬細(xì)胞的促炎細(xì)胞因子的表達(dá)［25-27］。文獻(xiàn)報(bào)道小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)C1q 的主要來(lái)源［28］，星形膠質(zhì)細(xì)胞可以表達(dá)C3［5］，星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的C3 和小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的C3aR 之間的交互作用調(diào)節(jié)C3/C3a-C3aR 信號(hào)通路，從而動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬功能，本研究中CRS 組杏仁核部位C1q、C3 均增多，因此我們推測(cè)補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)一步加劇神經(jīng)系統(tǒng)炎癥，促使小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬突觸，加重小鼠抑郁樣行為。研究結(jié)果表明C1q 可能在抑郁癥中杏仁核部位的神經(jīng)炎癥起到關(guān)鍵作用，因此本研究引入C1q-/-小鼠，對(duì)C1q的作用進(jìn)行進(jìn)一步探究。

為了進(jìn)一步確定C1q 在抑郁癥中的作用，我們對(duì)C57BL/6 小鼠和C1q-/-小鼠同時(shí)進(jìn)行慢性束縛刺激，行為學(xué)結(jié)果顯示C1q-/-模型鼠抑郁樣行為減輕，免疫熒光結(jié)果顯示杏仁核區(qū)突觸丟失減少。以上結(jié)果證明了我們的推測(cè)，C1q 在抑郁癥中起關(guān)鍵作用，C1q-/-模型組行為更接近WT 組，杏仁核內(nèi)突觸蛋白含量也明顯增多。推測(cè)抑郁癥產(chǎn)生的機(jī)制可能是杏仁核內(nèi)產(chǎn)生炎癥因子，激活小膠質(zhì)細(xì)胞，產(chǎn)生C1q，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞變?yōu)榫哂猩窠?jīng)毒性星形膠質(zhì)細(xì)胞，星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)C3，與小膠質(zhì)細(xì)胞表面C3aR受體相互作用，進(jìn)一步激活小膠質(zhì)細(xì)胞修剪周圍突觸，敲除C1q后小膠質(zhì)細(xì)胞激活減輕，神經(jīng)毒性星形膠質(zhì)細(xì)胞減少，兩膠質(zhì)細(xì)胞相互作用減少，突觸丟失減少，抑郁樣行為減輕。

本研究結(jié)果表明抑郁樣行為小鼠杏仁核內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞激活并表達(dá)補(bǔ)體蛋白，介導(dǎo)補(bǔ)體依賴的小膠質(zhì)細(xì)胞突觸修剪，導(dǎo)致神經(jīng)元突觸大量丟失，C1q-/-模型小鼠杏仁核內(nèi)突觸丟失減少，抑郁樣行為減輕，證實(shí)C1q在介導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞突觸修剪在抑郁癥發(fā)生中具有關(guān)鍵作用。為抑郁癥中補(bǔ)體作用途徑提供新思路，補(bǔ)體途徑在抑郁癥中詳細(xì)的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。