兩種大孔樹脂提取都勻毛尖茶兒茶素對比探究

杜文靜，李 靜

（黔南民族師范學院生命科學系，貴州都勻 558000）

兒茶素又稱兒茶精、茶單寧，是茶葉中的主要成分，天然的兒茶素主要有6 種單體，分別為表兒茶素、兒茶素、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯［1-2］。兒茶素由于其抗氧化性及清除自由基的功能而日益受到人們的重視，具有抗氧化、抗癌、抗衰老和降脂降壓等作用，在醫(yī)藥領域有廣泛應用，主要用于生產(chǎn)抗腫瘤藥物、心血管保健藥物、抗病毒制劑、抗糖尿病及肥胖癥保健藥品等［3］。提取茶葉中的這些重要活性化學物質(zhì)有著重要意義。目前我國對于提取兒茶素的主要來源是茶葉，方法主要有溶劑萃取法、離子沉淀法和柱色譜分離法［4-6］。

本研究改進傳統(tǒng)的兒茶素提取工藝，采用樹脂法提取純兒茶素。以綠茶提取物——茶粉樣品為原料，經(jīng)浸提、大孔吸附樹脂吸附洗脫，最后經(jīng)乙醇解離烘干得單體，用樹脂法進行兒茶素提取。研究不同濃度乙醇對于樹脂提取兒茶素是否有影響；并用兩種樹脂進行比較，樹脂的吸附能力對于兒茶素提取含量進行比較。區(qū)別于其他傳統(tǒng)方法，本研究對于提取的兒茶素沒有污染，沒有重金屬殘留。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、KD-80 三孔電熱恒溫水槽（上海齊欣科學儀器有限公司）、GZX-9140MBE 電熱鼓風干燥機（上海博訊實業(yè)有限公司）、自制填充管、CP214 電子天平（奧豪斯儀器有限公司）、紫外分光光度計（上海元析儀器有限公司UV-6100S）、CTFD-10S抽真空器（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）、SE602FZH 電子天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］。

甲醇、乙醇、丙醇、乙酸乙酯、蒸餾水等。

1.2 實驗材料

干茶葉，品種為都勻毛尖，采于貴州省都勻市；茶多酚，購于好再來天然植物館；D101 大孔樹脂，購于慧贏實驗廠家；AB-8 大孔樹脂，購于天津市凱威化工有 限公司。

1.3 方法

1.3.1 大孔樹脂篩選

1）取材。稱取14 組茶多酚，每組茶多酚均為2 g，分別溶于50 mL 水。2）加熱。放入水浴鍋加熱，水溫恒定在75 ℃。3）冷卻。材料溶液冷卻至常溫。4）樹脂吸附。將茶多酚溶液分別倒入裝有D101 樹脂和AB-8 樹脂的燒杯中［7-9］，靜置10 min；將有吸附樹脂和茶多酚的混合溶液倒入自制的填充柱中進行過濾，濾干。5）解離。將40 mL 濃度為35%、45%、55%、65%、75%、85%和95%乙醇，分別倒入7 支填充柱中進行解離，重復3 次。6）測OD。取2 mL 解離液用紫外光分光光度計在210 nm、270 nm 和280 nm 處測吸光度。7）濃縮干燥。將解離液用蒸發(fā)儀抽真空濃縮，濃縮液放到干燥箱內(nèi)干燥12 h。

1.3.2 不同浸提劑提取兒茶素

按照上述步驟取材后，在75 ℃的恒溫水浴鍋中浸提30 min，然后取出，待溶液冷卻至常溫，使用樹脂吸附及過濾，用40 mL 的浸提劑水、50%甲醇、50%乙醇、50%丙醇和乙酸乙酯，分別倒入5 支填充柱中進行解離，重復3 次。最后測OD 值、濃縮干燥。

1.3.3 不同原料提取兒茶素

稱取一組20 g 干茶葉和一組2 g 的茶多酚成品，分別溶于50 mL 溫度為75 ℃的水中恒溫浸提后冷卻，樹脂吸附、過濾，將濃度85%乙醇40 mL 倒入填充柱中進行解離，重復2～3 次，使兒茶素充分解離，最后測OD 值、濃縮干燥。

1.4 兒茶素提取質(zhì)量

將解離液放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空濃縮5 倍，濃縮液放入烘干箱60 ℃烘干12 h，用電子天平稱量，得到兒茶素提取質(zhì)量。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔樹脂篩選結(jié)果

在D101 大孔樹脂中不同濃度梯度乙醇對提取兒茶素的結(jié)果如圖1 所示。根據(jù)圖1 可知，不同乙醇濃度對兒茶素提取會有不同的影響。乙醇濃度在75%時對于吸附在樹脂上的兒茶素解離的較充分，提取最多。

圖1 兒茶素提取質(zhì)量圖

在AB-8 大孔樹脂中不同濃度梯度乙醇對提取兒茶素的結(jié)果如圖2 所示。根據(jù)圖2 可知，AB-8 大孔樹脂對兒茶素的提取量在乙醇濃度為35%～85%時隨濃度升高提取量升高，在乙醇濃度為85%提取量最高，提取效果最好，乙醇濃度大于85%提取量降低。

圖2 兒茶素提取質(zhì)量圖

2.2 不同溶劑對干茶葉提取兒茶素的結(jié)果

不同浸提劑條件下，干茶葉提取兒茶素的結(jié)果見 表1。根據(jù)表1 可知，不同溶劑對兒茶素提取量不同，乙醇的提取量最高。

表1 不同浸提劑對干茶葉提取兒茶素的比較結(jié)果

2.3 不同原料對兒茶素提取的影響

干茶葉和茶多酚成品提取兒茶素含量見表2。根據(jù)表2 可知，不同原料對兒茶素提取有不同的影響，干茶葉提取兒茶素比茶多酚提取量高。

表2 干茶葉和茶多酚成品提取兒茶素含量比較

3 結(jié)論與討論

1）在D101 大孔樹脂實驗中，兒茶素提取在乙醇濃度75%時最多。而AB-8 大孔樹脂提取的最佳條件和D101 大孔樹脂的不同。AB-8 大孔樹脂對兒茶素的提取率在乙醇濃度為35%～85%會隨濃度升高提取量升高。該大孔樹脂乙醇濃度為85%時提取的兒茶素量是最高的。乙醇是作為解離劑，在85%的時候?qū)τ谖皆跇渲系膬翰杷亟怆x較充分，提取效果最好。且圖2 直觀的呈現(xiàn)兒茶素提取量與乙醇濃度間的關系，乙醇濃度為35%～85%時，兒茶素提取量與乙醇濃度呈正比關；乙醇濃度為85%～95%時，茶素提取量與乙醇濃度呈反比關系。

2）根據(jù)相似相溶的原理，應是乙酸乙酯對于兒茶素的選擇性最強，但其提取兒茶素的得率最低。乙醇的得率最高，這是由于乙醇的羥基與兒茶素及茶多酚分子中含有的酚羥基能形成氫鍵而具有良好的溶解性，而且天然狀態(tài)的兒茶素與茶多酚往往以氫鍵與蛋白質(zhì)、多糖等大分子物質(zhì)結(jié)合成復合物形式存在，乙醇溶液具有斷裂氫鍵的能力，有利于使締合態(tài)的兒茶素及茶多酚游離出來。

3）在干茶和茶多酚兩種原料提取兒茶素的實驗中，干茶葉的提取率比茶多酚的提取率高。