慢性丙型肝炎患者基因型分布及相關(guān)基因型血清學(xué)指標(biāo)分析

陳玫君，郭飛波

天門市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北天門 431700

丙型病毒性肝炎簡(jiǎn)稱為丙型肝炎、丙肝，其是由丙型肝炎病毒感染導(dǎo)致的疾病，傳播方式包括輸血、吸毒、針刺等，丙型肝炎病毒感染率高，全世界范圍內(nèi)感染丙型感染病毒的患者數(shù)量為1.7億人左右，丙型肝炎病毒感染的發(fā)生不僅可能導(dǎo)致急慢性肝炎，甚至可能引發(fā)肝纖維化或肝癌，危及患者生命[1]。丙型肝炎病毒基因型差異的存在，使得患者的肝損害程度、抗病毒治療效果以及疾病預(yù)后均存在明顯差異[2]。慢性丙型肝炎疾病發(fā)展過程中脂類代謝產(chǎn)生的影響受到的重視度不斷提高，但不同基因型患者機(jī)體血清脂質(zhì)代謝間的差異尚未明確[3]。該次研究方便選取2016年1月—2019年12月天門市第一人民醫(yī)院收治的慢性丙型肝炎患者185例，探討慢性丙型肝炎患者基因型分布及相關(guān)基因型血清學(xué)指標(biāo)差異?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的慢性丙型肝炎患者185例，其中男101例，女84例；年齡16～85歲，平均（51.8±6.5）歲。采集患者的靜脈血進(jìn)行血清分離，放置于-80℃冰箱保存，對(duì)存在其他類型肝炎病毒感染的患者進(jìn)行排除?；颊叩募膊≡\斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)制定的丙型肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。該次研究所選病例經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，且取得患者及其家屬知情同意。

1.2 方法

采集患者的空腹靜脈血，依據(jù)Sanger測(cè)序法開展丙型肝炎病毒基因分型，應(yīng)用ABI 3730xl測(cè)序儀開展測(cè)序操作，按照儀器使用說明書進(jìn)行測(cè)序。

丙型肝炎病毒定量檢測(cè)應(yīng)用試劑盒開展，檢測(cè)方法為熒光定量PCR法，在羅氏480熒光定量PCR儀上開展樣本丙型肝炎病毒RNA載量檢測(cè)。應(yīng)用日立7600全自動(dòng)生化分析儀對(duì)血清谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、載脂蛋白-B（Apo-B）、載脂蛋白-AⅠ（Apo-AⅠ）、總膽固醇（TC）與三酰甘油（TG）水平進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

①該組患者的丙型肝炎病毒基因型分布；②不同基因型患者丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)結(jié)果；③不同基因型患者的GGT、AST與ALT水平，包括1b型、3b型、2a型、1b/2a型與3a型；④不同基因型患者LDL-C、Apo-B、Apo-AⅠ、TC與TG水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件予以數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用（±s）表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分比(%)表示，組間差異比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 該組患者的丙型肝炎病毒基因型分布

該組患者中包括142例（76.76%）1b型患者，20例（10.81%）2a型 患 者，12例 （6.49）3b型 患 者，6例（3.24%）1b/2a型患者，5例（2.70%）3a型患者。

2.2 不同基因型患者丙型肝炎病毒RNA定量檢測(cè)分析

丙型肝炎病毒RNA載量范圍為5.0 E+2 IU/mL～1.0 E+7 IU/mL，采用對(duì)數(shù)形式對(duì)丙型肝炎病毒RNA載量進(jìn)行表示，對(duì)均值予以計(jì)算，1b型患者為（6.57±1.00），3b型患者為 （6.62±1.05），2a型患者為 （5.82±1.03），1b/2a型患者為（5.40±1.15），3a型患者為（6.95±0.88）。不同基因型患者間的丙型肝炎病毒RNA定量結(jié)果實(shí)施單因素方差分析，結(jié)果表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.628，P=0.001）。

2.3 不同基因型患者肝生化結(jié)果比較

不同基因型患者的GGT、AST與ALT水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同基因型患者肝生化結(jié)果比較（±s）

表1 不同基因型患者肝生化結(jié)果比較（±s）

基因型GGT（U/L）AST（IU/L） ALT（IU/L）1b型（n=142）2a型（n=20）3b型（n=12）1b/2a型（n=6）3a型（n=5）F值P值78.26±21.25 74.06±16.35 72.74±12.42 71.24±20.32 41.48±10.20 66.47±23.35 69.18±21.45 75.81±23.65 48.48±18.54 39.09±8.52 94.38±26.58 120.85±43.25 112.83±34.54 75.36±12.58 68.83±18.54 15.325 10.471 25.311 0.001 0.001 0.001

2.4 不同基因型患者LDL-C、Apo-B、Apo-AⅠ、TC與TG水平比較

相較于1b與2a型，3b型患者TC與Apo-B水平更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；不同基因型患者的肝生化與其余脂代謝指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。通過對(duì)不同基因型患者的Apo-B與TC水平相關(guān)性開展分析，結(jié)果顯示兩者存在明顯相關(guān)性（r=0.817，P＜0.05）。

3 討論

肝炎屬于常見肝部病變，有資料顯示[4]，全球范圍內(nèi)病毒肝炎病毒的感染率為3.8%，我國(guó)丙型肝炎病毒的感染率為3.1%。由于丙型肝炎病毒基因存在著高度變異性，因此不同基因型丙型病毒肝炎的治療方法、療效、治療周期以及取得的效果存在著較大的爭(zhēng)議。丙型病毒肝炎1b亞型患者發(fā)展為肝硬化以及肝癌的風(fēng)險(xiǎn)較其他亞型的患者更高，同時(shí)1b亞型患者對(duì)干擾素的反應(yīng)弱于2型與3型，容易演變?yōu)槁约膊　Ｔ趯?duì)肝炎進(jìn)行治療時(shí)，需根據(jù)肝炎病毒的類型開展治療方案制定，同時(shí)治療中需考慮宿主自身的因素，病毒方面主要為丙型肝炎病毒的基因型以及病毒載量，丙型肝炎病毒RNA含量可對(duì)病毒復(fù)制的活躍度以及患者自身病程情況予以直接反映，是對(duì)抗病毒治療的療效進(jìn)行反饋的有效病毒學(xué)應(yīng)答指標(biāo)。而通過開展基因分型檢測(cè)，可對(duì)療程確定提供參考，因此通過對(duì)丙型肝炎病毒基因型以及血清病毒載量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，對(duì)于慢性丙型肝炎的治療具備重要的價(jià)值。

表2 不同基因型患者LDL-C、Apo-B、Apo-AⅠ、TC與TG水平比較（±s）

表2 不同基因型患者LDL-C、Apo-B、Apo-AⅠ、TC與TG水平比較（±s）

基因型LDL-C（mmol/L）Apo-B（g/L）Apo-AⅠ（g/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）1b型（n=142）2a型（n=20）3b型（n=12）1b/2a型（n=6）3a型（n=5）F值P值1.75±0.44 4.50±0.71 1.70±0.46 1.75±0.61 1.35±0.28 0.72±0.18 0.59±0.25 0.69±0.13 0.76±0.26 0.65±0.18 1.12±0.06 1.00±0.15 1.24±0.26 1.06±0.27 1.33±0.25 4.08±0.92 3.35±1.06 4.26±0.81 4.06±1.03 3.71±0.56 1.42±0.32 1.05±0.28 1.13±0.35 1.42±0.61 1.18±0.27 3.542 0.035 1.525 0.068 0.578 0.421 0.845 0.125 1.362 0.084

受到地域差異的影響，丙型肝炎病毒的基因型以及亞型分布和流行存在差異，丙型肝炎病毒1型、2型、3型以及6型為我國(guó)的主要丙型肝炎病毒基因型[5]。該次研究結(jié)果顯示，該組患者中包括142例（76.76%）1b型患者，20例（10.81%）2a型患者，12例（6.49）3b型患者，6例（3.24%）1b/2a型患者，5例（2.70%）3a型患者。其中主要的基因型為1b型，與前人研究報(bào)道中[6]：1b型占比為75.00%，2a型占比為12.00%，3b型占比為5.00%，1b/2a型占比為4.00%，3a型占比為4.00%基本相符。2a型與3b型率均較高，表明2a型與3b型發(fā)病率呈現(xiàn)出升高趨勢(shì)。3型以及6型屬于我國(guó)西南、華南以及港澳地區(qū)的主要丙型肝炎病毒基因型，也是靜脈吸毒人員的主要流行基因型，提示靜脈吸毒群體中存在的丙型肝炎病毒基因型正在擴(kuò)散至普通人群[7]。

肝功能是對(duì)肝臟損害進(jìn)行反映的最為靈敏的指標(biāo)之一，GGT、AST與ALT水平是最為常用的肝臟代謝酶，當(dāng)機(jī)體內(nèi)的GGT、AST與ALT水平逐漸升高，則提示患者機(jī)體肝臟組織受到的損傷不斷加重[8]。該次研究結(jié)果顯示，不同基因型患者的GGT、AST與ALT水平無明顯差異。有研究報(bào)道[9]丙型病毒肝炎患者非單基因型的ALT水平較單基因型水平更高，但單基因型與非單基因型患者的AST與GGT水平無明顯差異，可能是由于ALT位于細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)肝細(xì)胞被破壞，則其會(huì)被大量釋放入血，在血液內(nèi)的水平會(huì)明顯升高，因此可被有效檢測(cè)。AST的位置在細(xì)胞線粒體內(nèi)，需要受到嚴(yán)重的損傷才會(huì)進(jìn)入到機(jī)體血液內(nèi)，而GGT在機(jī)體肝細(xì)胞受到損傷后，細(xì)胞膜具備的通透性會(huì)提高，從而使GGT被有效釋放，但GGT具備的敏感性仍舊低于ALT。肝臟是機(jī)體多種凝血因子的生成場(chǎng)所，當(dāng)肝臟功能受到損傷，則會(huì)導(dǎo)致多種凝血因子水平降低，并且丙型肝炎病毒對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答作用產(chǎn)生刺激，形成免疫復(fù)合物，會(huì)對(duì)造血干細(xì)胞產(chǎn)生直接或間接損害，會(huì)導(dǎo)致患者機(jī)體血小板水平降低，進(jìn)而使患者機(jī)體凝血功能受到損傷[10]。

該次研究結(jié)果顯示，不同基因型患者間的丙型肝炎病毒RNA定量結(jié)果實(shí)施單因素方差分析，結(jié)果表明存在明顯差異，由于1b型與3b型的病毒載量較為相似。目前臨床上在對(duì)慢性丙型肝炎進(jìn)行治療時(shí)，聚乙二醇化干擾素-α與利巴韋林聯(lián)合用藥為標(biāo)準(zhǔn)方案，通過對(duì)我國(guó)流行的1b與2a基因型進(jìn)行分析，1b基因型為難治型，其難以對(duì)干擾素產(chǎn)生持續(xù)性應(yīng)答，同時(shí)容易出現(xiàn)復(fù)發(fā)，具備較長(zhǎng)的治療周期，而2a型對(duì)于干擾素具備較好的應(yīng)答，復(fù)發(fā)率低，可取得較好的抗病毒治療效果[11]。當(dāng)機(jī)體受到丙型病毒肝炎感染后，若抗病毒治療不及時(shí)或治療不合理，則有超過80%的患者會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿腥?。該次研究結(jié)果顯示，相較于2a與1b/2a型，1b與3b型患者病毒載量更高；相較于1b與2a型，3b型患者TC與Apo-B水平更低；不同基因型患者的肝生化與其余脂代謝指標(biāo)無明顯差異，由此可知，慢性丙型肝炎病毒感染容易導(dǎo)致脂代謝紊亂，不同基因型患者機(jī)體肝功能無明顯差異，但1b型患者的病毒載量更高，3型患者容易發(fā)生脂代謝指標(biāo)異常[12]。

綜上所述，慢性丙型肝炎1b基因型為常見的感染類型，其次為2a型，不同丙型肝炎病毒基因型患者肝生化無明顯差異。