天津市靜海區(qū)醫(yī)院(301600)張瑩
臨床對(duì)結(jié)核性胸膜炎的診斷仍然以聯(lián)合診斷結(jié)果為準(zhǔn),主要包括了解病史、體征檢查、X線表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查及組織病理學(xué)。隨著分子生物學(xué)與免疫學(xué)的發(fā)展,多種新型技術(shù)開始應(yīng)用于結(jié)核性胸膜炎的診斷中[1][2]。為明確胸腔積液腺苷脫氨酶(ADA)/血清ADA檢測(cè)、結(jié)核分枝桿菌/利福平耐藥基因檢測(cè)(Xpert MTB/RIF)及外周血結(jié)核分枝桿菌(MTB)感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(T-SPOT.TB)聯(lián)合檢測(cè)在診斷結(jié)核性胸膜炎中的應(yīng)用價(jià)值[3][4]。本文對(duì)我院檢驗(yàn)科2015年2月~2020年10月經(jīng)多種方式聯(lián)合確診的65例結(jié)核性胸膜炎患者開展回顧性分析,均接受胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)、外周血T-SPOT.TB檢測(cè)及三種方式聯(lián)合檢測(cè),現(xiàn)就本次研究成果作如下的分析論述。
1.1 一般資料 對(duì)我院檢驗(yàn)科2015年2月~2020年10月經(jīng)多種方式聯(lián)合確診的65例結(jié)核性胸膜炎患者為研究對(duì)象,所有患者一般資料齊全,對(duì)本次研究知情,且本次研究已經(jīng)獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)執(zhí)行。65例患者中男41例,女24例,年齡37~76歲,平均(56.3±7.4)歲。
1.2 方法 胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)[5]:采集患者5ml抗凝的胸腔積液,以3000r/min離心處理15min,取上層清液,同時(shí)采集患者空腹?fàn)顟B(tài)下3ml的外周靜脈血,以3000r/min離心處理3min,分離血清。而后采用C8000全自動(dòng)分析儀測(cè)定胸腔積液中的ADA和血清ADA,計(jì)算兩者比值。若胸腔積液ADA與血清ADA比值>1.0且胸腔積液ADA>24U/L則可判定為胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)臨界值。
Xpert MTB/RIF檢測(cè)[6]:離心處理胸腔積液后,在其中加入2ml的樣本處理液重懸沉淀物充分混勻,取2ml加入至試劑匣。而后采用Gene Xpert MTB/RIF檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè),2h后讀取結(jié)果。
外周血T-SPOT.TB檢測(cè)[7]:借助肝素鈉抗凝管采集患者5ml的外周血液,并加入淋巴細(xì)胞分解液,以此實(shí)現(xiàn)分離單個(gè)核細(xì)胞的目的。隨后使用MD-AIM-V細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞濃度調(diào)整為2.5×106ml,對(duì)已經(jīng)經(jīng)過γ干擾素單抗的為微孔板進(jìn)行測(cè)定,設(shè)定陽性孔與陰性孔,分別加入50μl的植物血凝素、AIM-V、CEP-10及ESAT-6培養(yǎng)液。同時(shí)每一個(gè)孔中加入100μl稀釋好的單個(gè)核細(xì)胞,開展孵育、洗板、顯色、蒸餾水終止反應(yīng)。陽性:陰性孔斑點(diǎn)數(shù)≤5時(shí),陽性孔斑點(diǎn)數(shù)-陰性斑點(diǎn)數(shù)≥6;陰性孔斑點(diǎn)數(shù)≥6時(shí),陽性斑點(diǎn)數(shù)≥2倍陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)。
1.3 觀察指標(biāo)與評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 以聯(lián)合診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn),比較胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)、外周血T-SPOT.TB檢測(cè)及三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率、靈敏度、特異性。靈敏度=[真陽性/(真陽性+假陰性)]×100%;特異性=[真陰性/(真陰性+假陽性)]×100%。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 研究結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS23.0完成處理,計(jì)量資料、計(jì)數(shù)資料分別用±s、(n,%)表示,差異性分別對(duì)應(yīng)t檢驗(yàn)、X2檢驗(yàn);檢驗(yàn)依據(jù):P<0.05表示差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 單項(xiàng)檢測(cè)與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率比較 胸腔積液A D A/血清A D A檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)及外周血T-SPOT.TB檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率均低于聯(lián)合診斷(金標(biāo)準(zhǔn)),比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=26.481/14.444/9.669,P=0.000/0.000/0.002<0.05);三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率低于聯(lián)合診斷(金標(biāo)準(zhǔn)),但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=2.031,P=0.154>0.05)。胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)及外周血T-SPOT.TB檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率均低于三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè),比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=20.440/9.119/4.866,P=0.000/0.000/0.027<0.05)。見附表1。
附表1 單項(xiàng)檢測(cè)與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率比較(n,%)
2.2 單項(xiàng)診斷與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)靈敏度、特異性比較 胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)及外周血T-SPOT.TB檢測(cè)靈敏度均低于三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè),比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.952/1.605/0.818,P=0.132/0.205/0.366>0.05);胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)及外周血T-SPOT.TB檢測(cè)特異性均高于三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè),比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=0.113/0.152/0.417,P=0.737/0.696/0.519>0.05)。見附表2。
附表2 單項(xiàng)診斷與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)靈敏度、特異性比較(n,%)
2.3 診斷的ROC曲線 胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)、外周血T-SPOT.TB及聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線下面積分別為0.90(95%CI:0.83~0.97,P<0.05),0.89(0.80~0.96,P<0.05),0.91(0.82~0.98,P<0.05),和0.92(0.82~0.99,P<0.05)。見附圖。
附圖 單項(xiàng)診斷與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線
結(jié)核性胸膜炎是臨床一種常見的肺外結(jié)核病,其發(fā)病與結(jié)核分枝桿菌感染及機(jī)體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)。診斷方面,以實(shí)驗(yàn)室檢查、X線檢查、胸部CT檢查及胸膜活檢為主,均可取得較好的診斷效果[1][2]。尤其是組織病理學(xué)是結(jié)核性胸膜炎診斷的依據(jù),有極高的診斷效果,但組織病理學(xué)檢查是一種有創(chuàng)檢查,操作較為復(fù)雜,多數(shù)的患者無法順利完成檢查[8][9]。
胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)及外周血T-SPOT.TB檢測(cè)均是近年來廣泛應(yīng)用于結(jié)核性胸膜炎診斷的方式[10]。Xpert MTB/RIF檢測(cè)是一種新型的分子診斷技術(shù),優(yōu)勢(shì)在于有較強(qiáng)的自動(dòng)化水平,可以有效減少非特異性擴(kuò)增[10][11]。更為重要的一點(diǎn)是,可以在2h內(nèi)得到測(cè)定結(jié)果,同時(shí)可以最大限度減少人為干預(yù),特異性高。但也有一定的局限性,比如靈敏度不高,多在37%~77%。ADA是臨床診斷結(jié)核性胸膜炎的理想指標(biāo),當(dāng)結(jié)核分枝桿菌的結(jié)核蛋白進(jìn)入到患者胸腹腔后會(huì)導(dǎo)致淋巴細(xì)胞增殖,繼而導(dǎo)致ADA含量升高,通過胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)可以提升診斷的特異度[12]。外周血T-SPOT.TB檢測(cè)是干擾素-γ釋放試驗(yàn)的一種,可以通過CEP-10及ESAT-6培養(yǎng)液來檢測(cè)出結(jié)核分枝桿菌,外周血中的結(jié)核分枝桿菌特異性T細(xì)胞可以有效分離,經(jīng)過培養(yǎng)后可以分泌出干擾素γ,繼而借助相應(yīng)的抗體來測(cè)定其濃度,測(cè)定患者是否存在結(jié)核分枝桿菌感染[13]。在單項(xiàng)診斷與三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)靈敏度、特異性比較中發(fā)現(xiàn),三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度高于單項(xiàng)診斷,但比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,分析原因可能與樣本量較少有一定的關(guān)系。三種方式聯(lián)合檢測(cè)的準(zhǔn)確率高于單一檢測(cè)方式,且與金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,表明三種方法聯(lián)合檢測(cè)在診斷結(jié)核性胸膜炎中有良好的效果,值得推廣。同時(shí)筆者發(fā)現(xiàn)胸腔積液ADA/血清ADA檢測(cè)、Xpert MTB/RIF檢測(cè)、外周血T-SPOT.TB及聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線下面積分別為0.90(95%CI:0.83~0.97,P<0.05),0.89(0.80~0.96,P<0.05),0.91(0.82~0.98,P<0.05),和0.92(0.82~0.99,P<0.05),三者差異不明顯,但聯(lián)合檢測(cè)可提高ROC曲線下面積,提示聯(lián)合檢測(cè)診斷效能更高。
綜上所述,三種方式聯(lián)合檢測(cè)在結(jié)核性胸膜炎診斷中有較高的準(zhǔn)確性,臨床應(yīng)用價(jià)值顯著。