• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    多角度分析P.ostreatus改性對玉米秸厭氧消化產(chǎn)氣性能的影響

    2021-05-27 08:11:32黃文博袁海榮李秀金
    可再生能源 2021年5期
    關(guān)鍵詞:玉米秸聚糖甲烷

    黃文博,袁海榮,李秀金

    (北京化工大學(xué) 環(huán)境科學(xué)與工程系,北京100029)

    0 引言

    以玉米秸為原料,通過厭氧消化技術(shù)生產(chǎn)甲烷是一種高效的可再生能源生產(chǎn)方式[1]。玉米秸的纖維素和半纖維素含量達(dá)55.0%~75.0%,具有很高的甲烷轉(zhuǎn)化潛力[2]。由木質(zhì)素、纖維素和半纖維素的復(fù)雜交聯(lián)結(jié)構(gòu)形成的生物質(zhì)抗降解屏障具有一定的疏水作用,阻礙了厭氧微生物對纖維素和半纖維素的利用,尤其是影響水解階段纖維素酶和木聚糖酶在秸稈上的吸附和反應(yīng)[2]。為提高玉米秸的厭氧消化性能,須對其進(jìn)行改性處理。

    白腐菌能通過木質(zhì)素氧化酶系統(tǒng)對木質(zhì)素進(jìn)行高效降解,提高秸稈的可利用性[3]。P.ostreatus是可食用白腐菌,除了對木質(zhì)素具有高效降解性外,對纖維素和半纖維素也具有降解能力,以提供自身生長所需的營養(yǎng)。劉紅菊研究了P.ostreatus對麥秸木質(zhì)纖維素的降解效果,結(jié)果顯示,預(yù)處理10 d的麥秸木質(zhì)素含量降低43.8%,纖維素含量提高37.2%[4]。Mustafa使用P.ostreatus預(yù)處理稻草20 d,木質(zhì)素降解率為33.4%,纖維素與半纖維素的降解率分別只為7.9%和16.9%[5]。由此可見,P.ostreatus能夠明顯降解秸稈中的木質(zhì)素,對纖維素和半纖維素的降解程度較低,提高了它們的可利用性。以往研究表明,經(jīng)P.ostreatus改性后的木質(zhì)纖維類底物的乙醇和甲烷轉(zhuǎn)化率均有所提高。Worfa研究了不同P.ostreatus改性時(shí)間對木薯乙醇產(chǎn)率的影響,結(jié)果顯示,改性1周的木薯可發(fā)酵糖得率最高為34.1g/L,乙醇產(chǎn)率較對照組提高35.0%左右[6]。Kainthola對P.ostreatus改性5周的稻草進(jìn)行厭氧消化,甲烷產(chǎn)率提高至對照組的1.6倍[7]。

    P.ostreatus的生長過程分為菌絲生長、原基形成和子實(shí)體分化3個(gè)階段。P.ostreatus在不同生長階段中,對木質(zhì)纖維素的降解能力不同,因此,經(jīng)過不同P.ostreatus改性時(shí)間的玉米秸的酶水解性和甲烷產(chǎn)率也有明顯差異[8]。Worfa將P.ostreatus對木薯的改性時(shí)間由1周延長至2~8周,木薯發(fā)酵糖轉(zhuǎn)化率降低[6]。已有研究認(rèn)為,延長白腐菌改性時(shí)間,使纖維素和半纖維素的消耗增加是影響乙醇或甲烷轉(zhuǎn)化的主要原因[6]。近期研究發(fā)現(xiàn),菌絲穿透可以提高秸稈的孔隙度和表面積,從而提高改性秸稈的酶吸附性和反應(yīng)性,但隨著白腐菌生長時(shí)間的延長,菌絲蛋白在秸稈表面的附著又會阻礙酶對秸稈的接觸[9]。因此,須要對不同P.ostreatus改性時(shí)間的玉米秸的酶吸附、酶水解和甲烷轉(zhuǎn)化進(jìn)行多角度分析,研究各因素間的關(guān)聯(lián)性,通過機(jī)理分析,確定最佳的改性時(shí)間。

    本文采用P.ostreatus對玉米秸進(jìn)行45 d改性試驗(yàn),通過動力學(xué)模型擬合,量化改性參數(shù),對不同改性時(shí)間的玉米秸的木質(zhì)纖維素降解、酶吸附、酶水解和甲烷轉(zhuǎn)化性能的變化進(jìn)行多視角綜合分析,探究提高玉米秸厭氧消化產(chǎn)氣性能的最佳條件。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    實(shí)驗(yàn)所用菌種P.ostreatus購自黑龍江省科學(xué)院微生物研究所。玉米秸取自北京市延慶區(qū),將其風(fēng)干粉碎至20目備用。接種物為北京順義區(qū)某中溫沼氣站消化殘余物,發(fā)酵原料為豬糞。原料和接種物基本性質(zhì)示于表1。

    表1 玉米秸及接種物基本性質(zhì)Table 1 Characteristics of corn stover and inoculum

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    (1)P.ostreatus改性

    將360 g(以TS計(jì))玉米秸置于17 cm×33 cm×5 cm的聚丙烯塑料薄膜袋中;以玉米秸∶石膏=99∶1配比混合均勻;用純水調(diào)節(jié)至含水率為65%,pH值為6~7;121℃高壓蒸汽滅菌1 h。滅菌原料接種P.ostreatus,接種量(W菌種/W原料)為10%。將接種后的玉米秸置于恒溫培養(yǎng)箱中,在溫度為28℃、濕度為85%~90%條件下進(jìn)行45 d改性處理。

    在45 d改性周期中,每間隔5 d取樣,測定玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的吸附性和水解性。通過動力學(xué)分析,表征改性玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的可及性和反應(yīng)性。每個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)做3組平行實(shí)驗(yàn)。

    (2)厭氧消化

    以不同改性時(shí)間的玉米秸為試驗(yàn)組,以未改性的玉米秸為對照組,只添加接種物為空白組,進(jìn)行甲烷潛力(BMP)測定。反應(yīng)器工作體積300 mL,頂空體積200mL(圖1)。玉米秸有機(jī)負(fù)荷為4 g/L(以VS計(jì)),接種污泥有機(jī)負(fù)荷為8 g/L(以VS計(jì)),pH為7.0±0.2。在35±2℃下厭氧消化45 d。實(shí)驗(yàn)組、對照組及空白組均設(shè)3組重復(fù)。

    圖1 甲烷潛力測定實(shí)驗(yàn)裝置Fig.1 Schematic diagram of BMP test device

    1.3 分析方法

    (1)基本性質(zhì)測定

    根據(jù)APHA測定總固體含量(TS)及揮發(fā)性固體含量(VS)[10]。采用元素分析儀測定有機(jī)元素含量(TC,TH,TO及TN)。采用pH計(jì)測定pH值。采用全自動纖維分析儀測定木質(zhì)纖維素含量。采用排水法測定厭氧消化過程產(chǎn)氣量(標(biāo)況下計(jì)算)。采用氣相色譜測定所得氣體組分含量。

    (2)酶吸附性能測定

    纖維素酶吸附性能的測定方法:在檸檬酸鈉緩沖溶液(0.05M,pH 4.8)中加入2.5%改性玉米秸,纖維素酶濃度為10 FPU/g,在4℃條件下反應(yīng)2 h。反應(yīng)結(jié)束后,將樣品以4 000 r/min離心15min,采用Bradford法測定反應(yīng)前后上清液中蛋白質(zhì)含量的變化[11]。根據(jù)公式(1)計(jì)算纖維素酶吸附率。采用相同方法測定木聚糖酶,木聚糖酶添加量為20 IU/g。

    式中:A為初始酶添加量,mg;B為上清液中未吸附酶量,mg。

    (3)酶水解性能分析

    參照文獻(xiàn)[8],[12]所用的方法對改性玉米秸的纖維素酶及木聚糖酶水解率進(jìn)行測定。根據(jù)式(2),(3)計(jì)算酶水解率:

    通過Nidetzky和Ohmine動力學(xué)模型,分析改性玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的反應(yīng)性以及反應(yīng)速率的影響,如式(4)和(5)所示[13]。

    式中:Y為不同水解時(shí)間的纖維素酶或木聚糖酶水解率,%;t為水解時(shí)間,h;P為玉米秸初始纖維素或半纖維素含量,%;K為達(dá)到最大纖維素或半纖維素水解量一半所需時(shí)間,h。

    (4)厭氧消化動力學(xué)分析

    利用BMP甲烷產(chǎn)率可擬合分析一級動力學(xué)厭氧消化產(chǎn)氣性能,擬合方程如式(6)所示[14]。

    式中:BMP(t)為以VS計(jì)甲烷產(chǎn)率,mL/g;BMPmax為最大產(chǎn)甲烷潛力(以VS計(jì)),mL/g;k為以VS計(jì)的甲烷轉(zhuǎn)化速率常數(shù),mL/(g·d);θ為延滯期,d。

    玉米秸有機(jī)組分采用概化分子式CnHaOb表示[14]。理論甲烷產(chǎn)量是當(dāng)?shù)孜锿耆D(zhuǎn)化成甲烷時(shí)的最大體積(標(biāo)況)。玉米秸的理論甲烷產(chǎn)量和生物降解性可由式(7)和式(8)得到。

    式中:BD為生物降解性,%;BMP0為理論甲烷產(chǎn)率(以VS計(jì)),mL/g;BMPexp為實(shí)驗(yàn)所得甲烷產(chǎn)率(以VS計(jì)),mL/g。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 改性玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶吸附性能的影響

    圖2給出了改性玉米秸纖維素酶、木聚糖酶吸附曲線、木質(zhì)纖維素降解率及降解擬合曲線。

    圖2 改性玉米秸纖維素酶、木聚糖酶吸附曲線、木質(zhì)纖維素降解率及降解擬合曲線Fig.2 Enzymes adsorption capacity,degradation ratio and liner fit for lignocellulose of the corn stovermodified by P.ostreatus

    圖2(a)為不同改性時(shí)間的玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶吸附率的變化。結(jié)果顯示,改性5~25 d的玉米秸對兩種酶的吸附率隨著改性時(shí)間的延長而上升。改性25~35 d的玉米秸對纖維素酶的吸附率仍隨時(shí)間的延長而上升,但改性35~45 d上升趨勢停止,對木聚糖酶吸附率隨時(shí)間延長而降低。經(jīng)過25 d改性后,玉米秸對纖維素酶的吸附率提高19.3%。改性45 d后,玉米秸對纖維素酶的吸附率提高42.5%。這表明P.ostreatus改性能夠明顯提高玉米秸對纖維素酶的吸附率。文獻(xiàn)[15]的研究表明,纖維素酶是通過與秸稈纖維疏水基團(tuán)結(jié)合而附著在纖維表面,木質(zhì)素和半纖維素均含有疏水基團(tuán),能夠吸附纖維素酶,干擾纖維素對纖維素酶的吸附。因此,須要結(jié)合改性玉米秸木質(zhì)纖維素降解情況,進(jìn)一步分析改性玉米秸對纖維素酶吸附的有效性。

    圖2(b)為不同改性時(shí)間下P.ostreatus對玉米秸的木質(zhì)纖維素降解率。由圖2(b)可以看出,木質(zhì)素和半纖維素降解率始終高于纖維素。玉米秸初始木質(zhì)素和半纖維素含量低于纖維素,隨著改性時(shí)間延長,木質(zhì)素和半纖維素不斷減少,對纖維素酶的吸附減少,因此,纖維素對纖維素酶特異性吸附提高。改性30 d后,纖維素降解率達(dá)到20.5%,改性玉米秸的纖維素含量較低,對纖維素酶的吸附無法進(jìn)一步提高。

    木聚糖是半纖維素的主要組成部分,木聚糖酶的吸附性能對半纖維素的降解效果具有主要影響。由圖2(a)可以看出,改性25 d的玉米秸對木聚糖酶吸附率提高21.0%,但改性時(shí)間超過30 d后吸附率降低了43.6%,表示部分吸附的木聚糖酶發(fā)生脫附,但殘余木聚糖酶繼續(xù)催化半纖維素水解,半纖維素降解率持續(xù)提高。

    對不同階段半纖維素降解速率進(jìn)行線性擬合,如圖2(c)所示。如圖2(c)所示,改性處理30 d后,半纖維素降解速率降低,表明木聚糖酶吸附性降低對半纖維素的降解產(chǎn)生了影響。此外,Noori和Karimi研究認(rèn)為,木聚糖是維持秸稈持水性的主要物質(zhì),而酶的吸附與秸稈持水性相關(guān)[15]。因此,隨著半纖維素的降解,木聚糖酶的吸附性也受到影響。綜上所述,改性25 d的玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的吸附效果最佳。

    2.2 改性玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶水解性能的影響

    酶水解性可以定量分析不同改性時(shí)間的玉米秸中纖維素和半纖維素對纖維素酶和木聚糖酶的可及性和反應(yīng)性。圖3所示為改性玉米秸纖維素酶水解二級反應(yīng)模型擬合曲線及動力學(xué)參數(shù)。圖中c-0,c-5,c-10,c-15,c-20,c-25,c-30,c-1 flush,c-2 flush分別表示經(jīng)P.ostreatus改性0,5,10,15,20,25,30,35,45 d的玉米秸。

    圖3 改性玉米秸纖維素酶水解二級反應(yīng)模型擬合曲線及動力學(xué)參數(shù)Fig.3 Nidetzky and Ohminemodel and kinetics parameter of cellulase hydrolysis of corn stovermodified by P.ostreatus

    不同改性時(shí)間的玉米秸在不同水解時(shí)間下的纖維素酶水解率如圖3所示。由圖3(a),(c)可以看出,0~24 h改性玉米秸稈的纖維素酶水解率快速上升,120 h后水解達(dá)到平衡。對不同改性時(shí)間玉米秸的纖維素酶水解率分析結(jié)果表明,改性5~45 d的玉米秸纖維素酶水解率先上升后降低。其中,改性25 d的玉米秸纖維素酶水解率最高,較對照組提高12.9%。這可能是因?yàn)樵诟男郧?5 d,玉米秸對纖維素酶的吸附率提高明顯,促進(jìn)了對纖維素的水解。改性35~45 d的玉米秸稈對纖維素酶吸附率的提高趨于停止;在此階段玉米秸的纖維素含量相較初始含量降低了36.0%,纖維素酶可催化水解反應(yīng)的纖維素減少,導(dǎo)致最終纖維素水解率比對照組降低了2.3%。

    Nidetzky纖維素酶水解模型擬合曲線如圖3(a)所示,擬合獲得的纖維素酶反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)P如圖3(b)所示。P值表示底物對纖維素酶的反應(yīng)性,K值表示達(dá)到最大纖維素水解率一半時(shí)的水解時(shí)間。隨著改性時(shí)間的延長,玉米秸P值先增大后減小。改性25 d的玉米秸P值最大,為33.0%,較對照組提高18.7%,表明改性25 d的玉米秸對纖維素酶的反應(yīng)性最高。改性45 d的玉米秸P值與對照組差異不顯著(p>0.05),表明延長改性時(shí)間使玉米秸的水解性能降低。K值隨改性時(shí)間的延長也呈先上升后下降趨勢,且改性玉米秸K值是對照組K值的1.9~3.3倍,表明改性玉米秸對纖維素酶的反應(yīng)速率的影響更小,水解反應(yīng)更穩(wěn)定。

    圖3(c)為Ohmine纖維素酶水解模型擬合曲線,圖3(d)為擬合獲得的纖維素酶反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)酶水解反應(yīng)初始速率ν0和酶在秸稈上的失活速率k。結(jié)果顯示,改性5~25 d的玉米秸稈ν0低于對照組,改性30~45 d的玉米秸稈ν0與對照組相近,表明纖維素酶在改性玉米秸上的初始反應(yīng)速率降低。改性玉米秸的k值隨改性時(shí)間的延長先降低后增高,改性25 d的玉米秸k值最小,為0.16,表明在水解過程中,纖維素酶在改性25 d的玉米秸上失活速率最低,水解持續(xù)時(shí)間最長。

    采用相同模型對木聚糖酶水解率進(jìn)行擬合的結(jié)果如圖4所示。圖4中c-0,c-5,c-10,c-15,c-20,c-25,c-30,c-1flush,c-2flush分別表示經(jīng)P.ostreatus改性0,5,10,15,20,25,30,35,45 d的玉米秸。結(jié)果顯示,水解120 h后木聚糖酶水解率仍在上升,表明半纖維素水解達(dá)到平衡所需的理論時(shí)間更長。改性25 d的玉米秸木聚糖酶水解率最高,較對照組提高75.3%。

    圖4 改性玉米秸木聚糖酶水解二級反應(yīng)模型擬合曲線及動力學(xué)參數(shù)Fig.4 Nidetzky and Ohminemodel and kinetics parameter of xylanase hydrolysis of corn stovermodified by P.ostreatus

    Nidetzky木聚糖酶水解模型擬合結(jié)果顯示,改性時(shí)間延長,玉米秸的P值先增大后降低,改性30 d玉米秸P值最大,較對照組提高24%。改性玉米秸K值較對照組也有不同程度增大,改性玉米秸對木聚糖酶的水解反應(yīng)也更加穩(wěn)定。Ohmine模型擬合結(jié)果顯示,木聚糖酶在改性玉米秸上的初始反應(yīng)速率ν0低于對照組,尤其在改性時(shí)間大于30 d時(shí),ν0明顯降低,這是由于改性玉米秸對木聚糖酶吸附率降低導(dǎo)致的。改性玉米秸k值隨改性時(shí)間延長先減小后增加,改性25 d和30 d時(shí)k值最小,木聚糖酶在這兩組改性秸稈上失活速率最低,水解持續(xù)時(shí)間最長。

    綜合纖維素酶和木聚糖酶的兩組模型擬合結(jié)果表明,P.ostreatus改性會降低玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的初始反應(yīng)速率,但玉米秸的反應(yīng)性提高,纖維素酶和木聚糖酶在玉米秸上的有效反應(yīng)時(shí)間延長,有利于甲烷轉(zhuǎn)化,25 d是最佳改性時(shí)間。

    2.3 P.ostreatus改性對玉米秸厭氧消化產(chǎn)氣性能的影響

    通過BMP試驗(yàn)分析P.ostreatus改性對玉米秸厭氧發(fā)酵甲烷產(chǎn)率、甲烷轉(zhuǎn)化速率和生物降解消化性能的影響(表2)。改性25 d的玉米秸甲烷產(chǎn)率最大,為272mL/g,較對照組提高16.7%。8組改性時(shí)間中,改性35 d的玉米秸甲烷產(chǎn)率較對照組降低約1.3%,改性45 d的玉米秸甲烷產(chǎn)率降低12.4%。通過一級動力學(xué)擬合計(jì)算初始甲烷轉(zhuǎn)化速率和生物降解性的結(jié)果顯示,改性25 d的玉米秸初始甲烷轉(zhuǎn)化速率較對照組提高19.0%,生物降解性提高19.7%。改性45 d的玉米秸甲烷轉(zhuǎn)化速率降低4.8%,生物降解性降低6.6%。由此表明,改性25 d的玉米秸厭氧消化性能最佳,改性45 d的玉米秸厭氧消化性能最差。

    表2 不同改性時(shí)間玉米秸甲烷產(chǎn)率、生物降解率及動力學(xué)參數(shù)Table 2 Biomethane yield,BD%and kinetic parameters of the corn stovermodified for different time

    通過對改性玉米秸酶吸附、酶水解和厭氧消化性能進(jìn)行多角度分析結(jié)果表明,改性25 d后,玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶吸附率提升,進(jìn)而在酶水解過程中反應(yīng)性提高,失活率降低,酶水解效率提高。盡管酶初始反應(yīng)速率在改性25 d的玉米秸上降低,但水解過程更穩(wěn)定,促進(jìn)了玉米秸厭氧消化水解階段的正向進(jìn)行,提高了初始階段甲烷轉(zhuǎn)化速率。此外,改性25 d的玉米秸生物降解性上升,表明玉米秸可利用性提高,微生物對其中的木質(zhì)纖維素利用更充分,總甲烷產(chǎn)率提高。改性時(shí)間超過30 d時(shí),玉米秸酶吸附和酶水解性能下降,使初始甲烷轉(zhuǎn)化速率降低。另外,此階段玉米秸的纖維素和半纖維素已被菌絲體大量消耗,生物降解性下降,導(dǎo)致甲烷產(chǎn)率降低。

    3 結(jié)論

    P.ostreatus改性會改變玉米秸對纖維素酶和木聚糖酶的吸附和水解性,影響玉米秸厭氧消化甲烷產(chǎn)率。改性25 d的玉米秸纖維素酶和木聚糖酶吸附率分別提高42.5%和21.0%,纖維素酶和木聚糖酶水解率分別提高12.9%和75.3%,甲烷產(chǎn)率提高16.7%,甲烷轉(zhuǎn)化速率提高19.0%,生物降解性提高19.7%,最佳改性時(shí)間為25 d。

    猜你喜歡
    玉米秸聚糖甲烷
    相對分子質(zhì)量對木聚糖結(jié)晶能力的影響
    液氧甲烷發(fā)動機(jī)
    論煤炭運(yùn)輸之甲烷爆炸
    水上消防(2020年1期)2020-07-24 09:26:02
    飼料用β-甘露聚糖酶活力的測定
    湖南飼料(2019年5期)2019-10-15 08:59:10
    Gas from human waste
    應(yīng)用康奈爾凈碳水化合物/蛋白質(zhì)體系評價(jià)甜高粱、玉米秸稈的營養(yǎng)價(jià)值
    秋季玉米秸青貯技術(shù)
    產(chǎn)木聚糖酶菌株的篩選、鑒定及其酶學(xué)性質(zhì)研究
    中國釀造(2016年12期)2016-03-01 03:08:21
    血清半乳甘露聚糖試驗(yàn)對侵襲性肺曲霉菌感染的診斷價(jià)值
    基于VB6.0的紅外甲烷檢測儀串行通信的實(shí)現(xiàn)
    可以免费在线观看a视频的电影网站| 狠狠狠狠99中文字幕| 黄色视频,在线免费观看| 国产一区二区三区综合在线观看| 变态另类丝袜制服| 女性生殖器流出的白浆| 色综合站精品国产| 天天添夜夜摸| 香蕉丝袜av| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产伦人伦偷精品视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产欧美日韩一区二区精品| 精品熟女少妇八av免费久了| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 久久久国产成人精品二区| 老司机福利观看| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜日韩欧美国产| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 欧美激情久久久久久爽电影 | or卡值多少钱| 丝袜美腿诱惑在线| 大型av网站在线播放| 久久久久国内视频| 亚洲成av人片免费观看| bbb黄色大片| 亚洲成国产人片在线观看| 精品日产1卡2卡| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久久国产成人免费| 国产成人av教育| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 美女扒开内裤让男人捅视频| 久久热在线av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 国产又爽黄色视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 两个人视频免费观看高清| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一进一出抽搐动态| 免费不卡黄色视频| 亚洲avbb在线观看| 校园春色视频在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 脱女人内裤的视频| 免费在线观看日本一区| 91在线观看av| 在线国产一区二区在线| 91九色精品人成在线观看| 一级a爱视频在线免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 欧美日本亚洲视频在线播放| 无遮挡黄片免费观看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久亚洲精品不卡| 一级a爱片免费观看的视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 69av精品久久久久久| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成人影院久久av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 中文字幕人妻熟女乱码| 人妻久久中文字幕网| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲av片天天在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产99白浆流出| 波多野结衣av一区二区av| 国产私拍福利视频在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国内精品久久久久久久电影| svipshipincom国产片| 欧美最黄视频在线播放免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲电影在线观看av| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲伊人色综图| 午夜福利一区二区在线看| 久久中文字幕一级| 久久亚洲真实| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 在线av久久热| 9色porny在线观看| 国产免费男女视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 丁香欧美五月| 变态另类丝袜制服| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美黄色淫秽网站| 国产成人av激情在线播放| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品人妻1区二区| 99国产精品免费福利视频| 18禁美女被吸乳视频| 香蕉国产在线看| 少妇的丰满在线观看| 人人澡人人妻人| 欧美精品啪啪一区二区三区| 999精品在线视频| 亚洲国产看品久久| 亚洲久久久国产精品| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲男人的天堂狠狠| 中文字幕高清在线视频| 黄色成人免费大全| 亚洲精品在线观看二区| 国产欧美日韩一区二区三| 黄色视频,在线免费观看| 成人手机av| 午夜福利成人在线免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 午夜激情av网站| 97碰自拍视频| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产色视频综合| 欧美成人免费av一区二区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 成人国产一区最新在线观看| av在线播放免费不卡| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久久久国内视频| 午夜福利视频1000在线观看 | 欧美日韩黄片免| 中文字幕人成人乱码亚洲影| videosex国产| 欧美激情高清一区二区三区| 久久精品成人免费网站| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久人妻av系列| 色综合婷婷激情| 亚洲成人免费电影在线观看| 日韩免费av在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜福利免费观看在线| 亚洲黑人精品在线| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲成国产人片在线观看| 午夜免费鲁丝| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜影院日韩av| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品 国内视频| 午夜老司机福利片| 精品一区二区三区av网在线观看| 成人国产综合亚洲| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 欧美精品亚洲一区二区| 色在线成人网| 国产三级黄色录像| 久久久久国内视频| 校园春色视频在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲欧美激情在线| 久久狼人影院| 国产av精品麻豆| av福利片在线| 人人澡人人妻人| 国产亚洲av高清不卡| 少妇被粗大的猛进出69影院| 51午夜福利影视在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 69精品国产乱码久久久| 在线播放国产精品三级| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av成人av| www.www免费av| 国产激情久久老熟女| 欧美日本视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲国产精品合色在线| 午夜福利18| 免费高清在线观看日韩| 国产欧美日韩综合在线一区二区| av天堂久久9| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产精品野战在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 宅男免费午夜| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美成人免费av一区二区三区| 又黄又粗又硬又大视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 长腿黑丝高跟| 国产99久久九九免费精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲精品在线美女| 免费av毛片视频| 久久久久久久精品吃奶| 精品久久蜜臀av无| 一本综合久久免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 黄色视频不卡| 国产熟女午夜一区二区三区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 久久中文字幕一级| 操美女的视频在线观看| 丝袜美足系列| 自线自在国产av| 天堂√8在线中文| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲精品国产色婷婷电影| 午夜两性在线视频| 免费在线观看完整版高清| av超薄肉色丝袜交足视频| 色av中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 视频区欧美日本亚洲| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲国产精品成人综合色| 成人国语在线视频| 国产熟女xx| 久久久国产欧美日韩av| 免费看美女性在线毛片视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 成人精品一区二区免费| 亚洲全国av大片| 亚洲无线在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产亚洲精品av在线| 国产精品影院久久| 欧美激情高清一区二区三区| 老司机福利观看| 在线观看66精品国产| 久久中文看片网| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品一区二区三区av网在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲人成电影观看| 亚洲在线自拍视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲av电影在线进入| 女人精品久久久久毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 精品一区二区免费观看| 嫁个100分男人电影在线观看| 精品久久久噜噜| 国产高潮美女av| 亚洲最大成人av| 亚洲精品456在线播放app | 免费看美女性在线毛片视频| 精品日产1卡2卡| 欧美日韩综合久久久久久 | x7x7x7水蜜桃| 日本熟妇午夜| 国产精品久久久久久精品电影| 中亚洲国语对白在线视频| 99热这里只有是精品50| 国产爱豆传媒在线观看| av在线天堂中文字幕| 成人亚洲精品av一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 天堂√8在线中文| 无人区码免费观看不卡| 国产探花极品一区二区| 精品一区二区免费观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 日韩欧美在线乱码| 午夜福利欧美成人| 超碰av人人做人人爽久久| 精品午夜福利视频在线观看一区| 婷婷精品国产亚洲av| 国产精品,欧美在线| 黄色日韩在线| 五月伊人婷婷丁香| 俺也久久电影网| 精品久久久久久久久久免费视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产美女午夜福利| 欧美最黄视频在线播放免费| 99久久精品热视频| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲第一区二区三区不卡| 午夜亚洲福利在线播放| av专区在线播放| 一a级毛片在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 天天躁日日操中文字幕| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品久久久久久精品电影| 美女高潮的动态| 悠悠久久av| 欧美黑人巨大hd| 国产精品99久久久久久久久| 国产精品女同一区二区软件 | 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一区二区三区激情视频| 97热精品久久久久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 极品教师在线免费播放| 亚洲午夜理论影院| 亚洲无线在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 97超视频在线观看视频| 亚洲不卡免费看| 精品久久久久久,| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 桃红色精品国产亚洲av| 国语自产精品视频在线第100页| 国产精品一区二区三区四区久久| 又爽又黄无遮挡网站| 国产极品精品免费视频能看的| 午夜福利在线观看吧| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 99精品在免费线老司机午夜| 床上黄色一级片| 性欧美人与动物交配| 久久精品人妻少妇| 久久久久九九精品影院| 亚洲国产高清在线一区二区三| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品久久久久久久久亚洲 | 1000部很黄的大片| 日本欧美国产在线视频| 日韩国内少妇激情av| 欧美精品国产亚洲| 亚洲av成人精品一区久久| 中文字幕高清在线视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲图色成人| 国产 一区精品| 免费看av在线观看网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲黑人精品在线| 网址你懂的国产日韩在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 高清在线国产一区| 久久这里只有精品中国| 麻豆精品久久久久久蜜桃| h日本视频在线播放| 丝袜美腿在线中文| 91在线观看av| 俄罗斯特黄特色一大片| 99精品在免费线老司机午夜| 我的女老师完整版在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲,欧美,日韩| 天堂√8在线中文| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 两个人视频免费观看高清| 久久久久久久亚洲中文字幕| 五月伊人婷婷丁香| 韩国av在线不卡| 亚洲av中文av极速乱 | 中文字幕高清在线视频| 亚洲国产欧美人成| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲人与动物交配视频| 永久网站在线| 午夜爱爱视频在线播放| 一区二区三区激情视频| 国产精品久久久久久av不卡| 在线天堂最新版资源| 精品免费久久久久久久清纯| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲专区中文字幕在线| 男人的好看免费观看在线视频| 一区二区三区激情视频| 久久九九热精品免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 97热精品久久久久久| 国产熟女欧美一区二区| 成人无遮挡网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本a在线网址| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 69人妻影院| 在线国产一区二区在线| 精品久久久久久久久av| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲av.av天堂| 亚洲avbb在线观看| 午夜福利欧美成人| 直男gayav资源| 亚洲av.av天堂| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久久色成人| 久久精品人妻少妇| 桃色一区二区三区在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 国产亚洲欧美98| 国产高潮美女av| 亚洲成人久久爱视频| 成人国产综合亚洲| 在线观看午夜福利视频| 一区二区三区激情视频| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 久久香蕉精品热| 欧美在线一区亚洲| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 两个人的视频大全免费| 日本一二三区视频观看| 亚洲 国产 在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 精品人妻熟女av久视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美3d第一页| 精品国产三级普通话版| 男女那种视频在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产在线男女| 综合色av麻豆| 欧美精品啪啪一区二区三区| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 一本久久中文字幕| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产高清不卡午夜福利| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久精品91蜜桃| 欧美xxxx性猛交bbbb| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产淫片久久久久久久久| 在线观看av片永久免费下载| 欧美3d第一页| 久久人人精品亚洲av| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美高清成人免费视频www| 变态另类丝袜制服| 成人一区二区视频在线观看| 日韩欧美免费精品| 欧美人与善性xxx| 一个人观看的视频www高清免费观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 成人无遮挡网站| av福利片在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 一进一出抽搐gif免费好疼| 毛片女人毛片| 国产三级中文精品| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 99国产极品粉嫩在线观看| 国内精品久久久久久久电影| 看十八女毛片水多多多| 久久久国产成人免费| 999久久久精品免费观看国产| 国产美女午夜福利| 波多野结衣高清无吗| 最新在线观看一区二区三区| 成人三级黄色视频| 国产69精品久久久久777片| 嫩草影视91久久| 能在线免费观看的黄片| 亚洲国产精品sss在线观看| 乱系列少妇在线播放| 欧美又色又爽又黄视频| 三级毛片av免费| 一a级毛片在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久久久久黄片| 99热这里只有是精品50| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲午夜理论影院| 久久午夜福利片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 51国产日韩欧美| 亚洲 国产 在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品人妻视频免费看| 国产精品伦人一区二区| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 免费av观看视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 日韩中文字幕欧美一区二区| 成年免费大片在线观看| 午夜a级毛片| 内地一区二区视频在线| 国国产精品蜜臀av免费| 黄色一级大片看看| 久久亚洲真实| 国产乱人视频| 亚洲美女搞黄在线观看 | 69人妻影院| 国内精品一区二区在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 特级一级黄色大片| 最近中文字幕高清免费大全6 | 十八禁网站免费在线| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲五月天丁香| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 精品人妻熟女av久视频| 午夜免费成人在线视频| 精品久久久久久久久久久久久| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国内精品久久久久久久电影| 久久久久久久久大av| 一本精品99久久精品77| 亚洲内射少妇av| netflix在线观看网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 日本黄大片高清| 日本黄色片子视频| 成人国产麻豆网| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 久久精品综合一区二区三区| av福利片在线观看| xxxwww97欧美| 成人三级黄色视频| 联通29元200g的流量卡| 日日干狠狠操夜夜爽| 少妇高潮的动态图| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 观看免费一级毛片| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 搞女人的毛片| 欧美zozozo另类| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美最新免费一区二区三区| 日本一二三区视频观看| 一级a爱片免费观看的视频| 国产亚洲欧美98| 国产精品人妻久久久影院| 一个人看视频在线观看www免费| 欧美成人a在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产69精品久久久久777片| 国产精品人妻久久久影院| 老司机深夜福利视频在线观看| 丝袜美腿在线中文| 亚洲av中文av极速乱 | 色噜噜av男人的天堂激情| 成人欧美大片| 久久久精品欧美日韩精品| 熟女电影av网| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 香蕉av资源在线| 亚洲无线观看免费| 男女之事视频高清在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲自偷自拍三级| 成人国产综合亚洲| 日本一二三区视频观看| www日本黄色视频网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 黄色视频,在线免费观看| 在线天堂最新版资源| 乱系列少妇在线播放| 一进一出好大好爽视频| 搞女人的毛片| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产色爽女视频免费观看| 我要看日韩黄色一级片| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 精品人妻熟女av久视频| 久久精品国产自在天天线| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产欧美日韩精品亚洲av| 麻豆一二三区av精品| 日韩高清综合在线| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 日本黄色片子视频| 九色成人免费人妻av| 一个人看视频在线观看www免费| 人妻少妇偷人精品九色| 12—13女人毛片做爰片一| 黄色丝袜av网址大全| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产视频一区二区在线看| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av不卡在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲av五月六月丁香网| 麻豆精品久久久久久蜜桃|