兩種藥物對兩個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗

周陸 王軍 王成輝 張友良 余陸偉 張國奇

(1 上海市松江區(qū)水產(chǎn)良種場，上海 201616； 2 上海海洋大學，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點實驗室，水產(chǎn)科學國家級實驗教學示范中心，上海水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，上海 201306)

翹嘴鲌(Culteralburnus)隸屬于硬骨魚綱、鯉形目、鯉科、鲌亞科、鲌屬，俗稱白絲、大白魚、翹嘴白魚等。該魚以體型好、味道鮮美、肉質(zhì)細嫩而著稱，是我國重要的經(jīng)濟水產(chǎn)品種[1]。翹嘴鲌的分布較為廣泛，在我國各大水系均有分布，但由于南北水域地理位置差異較大，形成了如長江水系、珠江水系、黑龍江水系等多個不同地理群體，不同水系群體的生殖生理特性具有顯著差異[2-5]。

近年來，隨著翹嘴鲌人工繁育技術(shù)的突破和人們對該品種的認知度逐漸提高，其養(yǎng)殖規(guī)模越來越大，養(yǎng)殖前景普遍看好。目前大量的研究聚焦于翹嘴鲌的良種選育、人工繁育、苗種培育、養(yǎng)殖病害和營養(yǎng)組成等，旨在提升翹嘴鲌養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[6-11]。之前的研究表明，不同水系的翹嘴鲌群體由于生存環(huán)境的差異，其遺傳、生長和生理性能等方面存在明顯差異[1-2]。但目前有關(guān)不同水系翹嘴鲌群體病害防治和藥物使用的研究較少?；钚缘夂桶⒕S菌素作為常用的消毒劑和殺蟲劑被廣泛運用在水產(chǎn)動物的養(yǎng)殖生產(chǎn)中[12-13]，對漁業(yè)生產(chǎn)具有重要的意義。為研究南北水系翹嘴鲌群體對這2種常用水產(chǎn)藥物的耐受性差異，本文對前期構(gòu)建的南北水系2個翹嘴鲌選育群體的魚種進行了2種藥物的急性毒性試驗，試驗結(jié)果可為翹嘴鲌養(yǎng)殖過程中進行消毒和殺蟲工作提供數(shù)據(jù)參考和理論支持。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

試驗魚來自上海市松江區(qū)水產(chǎn)良種場五厙基地，分別為南方水系翹嘴鲌群體F1(S-F1)和北方水系翹嘴鲌群體F1(N-F1)，南方水系翹嘴鲌群體的奠基群體來自于長江和淮河水系，北方水系翹嘴鲌群體的奠基群體來自于黑龍江水系。2個群體試驗魚的規(guī)格無明顯差異，其中，南方水系群體試驗魚500尾，體長73～83 mm，體質(zhì)量3.8～5.8 g；北方水系群體試驗魚500尾，體長67～75 mm，體質(zhì)量4.2～5.9 g。試驗前，將試驗魚放入暫養(yǎng)池內(nèi)馴養(yǎng)48 h，每日換水，清除池底污物，保持水質(zhì)清新，溶解氧充足。待試驗魚適應(yīng)暫養(yǎng)池的水體環(huán)境后開始正式試驗。選擇活力好，無傷無病的個體作為試驗對象。

試驗藥物為“金碘”(有效活性碘質(zhì)量分數(shù)為1.8%～2.0%)和“混養(yǎng)安”(阿維菌素有效含量為1.0%)。用純凈水將“金碘”和“混養(yǎng)安”分別配制成質(zhì)量濃度為100 mg/L和10 mg/L的母液待用。試驗時，使用養(yǎng)殖水將藥物母液稀釋配制成試驗所需的不同質(zhì)量濃度。保持各試驗組飼養(yǎng)環(huán)境一致，試驗水溫為22.7 ℃，鹽度為0，pH為7.9～8.3，氨氮為0.24 mg/L，亞硝酸鹽為0.09 mg/L，溶解氧為8.7 mg/L。

表1 試驗藥物質(zhì)量濃度設(shè)置

1.2 試驗方法

為了評估兩種藥物的合理試驗濃度，本試驗先開展了試驗魚耐受藥物濃度的預(yù)試驗。在8口規(guī)格為60 cm×50 cm×50 cm(長×寬×高)的玻璃缸中，分別放入質(zhì)量濃度依次為0.1、1、10、100 mg/L的兩種藥物的溶液，每缸放入10尾試驗魚，每隔6 h觀察魚的死亡情況并進行記錄，及時將死魚撈出，試驗時長為24 h。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果逐漸縮小藥物的濃度區(qū)間，以確定試驗魚耐受的藥物濃度范圍。

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，每種藥物以等差數(shù)列設(shè)置5個質(zhì)量濃度梯度，每個濃度組設(shè)3個平行，同時設(shè)1個空白對照組。具體試驗藥物濃度設(shè)置情況見表1。每個容器(60 cm×50 cm×50 cm)中放20尾試驗魚，同時在試驗開始的6 h內(nèi)不間斷觀察試驗魚的游動能力、平衡能力、體色變化等。隨后分別在6、12、24、48和96 h時記錄試驗魚的死亡數(shù)量并撈出死魚，同時適時監(jiān)測水體中溶解氧的情況，確保水體中溶解氧含量不低于5 mg/L。如發(fā)現(xiàn)試驗魚停止任何運動行為，且用玻璃棒觸碰其身體無反應(yīng)則可認定其死亡。

1.3 數(shù)據(jù)處理

運用SPSS 25.0軟件建立各藥物濃度與死亡率之間的線性回歸方程[14]，分別計算活性碘和阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的半致死濃度(LC50)和95%置信區(qū)間[15]。安全質(zhì)量濃度(SC)計算公式如下：

SC=0.3×48 h LC50/(24 h LC50/48 h LC50)2

(1)

式中，24 h LC50為24 h的半致死質(zhì)量濃度，48 h LC50為48 h的半致死質(zhì)量濃度。

根據(jù)《化學農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準則第12部分：魚類急性毒性試驗》(GB/T 31270.12—2014)中規(guī)定的有毒物質(zhì)對魚類毒性等級評價標準，96 h半致死質(zhì)量濃度劃分為4個等級：<0.1 mg/L為劇毒；0.1～1.0 mg/L為高毒；1～10 mg/L為中毒；>10 mg/L為低毒。

2 結(jié)果和分析

2.1 中毒癥狀

2個翹嘴鲌群體在安全質(zhì)量濃度的活性碘藥液和阿維菌素藥液中能夠正?；顒?，與空白對照組試驗魚的活動情況幾無差異。在質(zhì)量濃度分別為16 mg/L和20 mg/L的活性碘溶液中，2個群體的試驗魚表現(xiàn)出基本相同的行為或表觀變化，主要表現(xiàn)為：呼吸困難，鰓蓋張開，吸氣時口部和鰓蓋張大，體色逐漸加深轉(zhuǎn)為暗白，體表黏液增多，停止游動，身體逐漸失去平衡，腹部向上翻轉(zhuǎn)。在質(zhì)量濃度分別為0.5 mg/L和0.6 mg/L的阿維菌素藥液中，2個翹嘴鲌群體的試驗魚亦表現(xiàn)出相同的行為或表觀變化，主要表現(xiàn)為：前期神經(jīng)性興奮，快速游動，有個別魚撞擊容器壁；中后期則游動無力，反應(yīng)遲緩，體色逐漸轉(zhuǎn)暗加深，身體失去平衡，腹部向上翻轉(zhuǎn)，身體微微彎曲變形。

2.2 活性碘對2個翹嘴鲌群體的毒性比較

活性碘對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果及分析見表2、表3。結(jié)果顯示，當活性碘質(zhì)量濃度為4 mg/L時，2個水系的翹嘴鲌96 h內(nèi)均無死亡。當質(zhì)量濃度高于4 mg/L時，隨著濃度的增加，2個水系翹嘴鲌的死亡率逐漸上升，與藥液濃度呈正相關(guān)的關(guān)系。經(jīng)計算，活性碘對南方水系和北方水系翹嘴鲌群體的安全質(zhì)量濃度分別為2.140 mg/L和2.163 mg/L。

表2 活性碘對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果

表3 活性碘對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果分析

2.3 阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的毒性比較

阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果和結(jié)果分析見表4、表5。試驗結(jié)果表明，隨著阿維菌素藥液濃度的增加，南北水系翹嘴鲌的死亡率逐漸上升，與藥液濃度呈正相關(guān)關(guān)系。當阿維菌素質(zhì)量濃度達到0.3 mg/L以上時，南北水系翹嘴鲌的死亡率隨著藥物脅迫時長的增加而上升。阿維菌素對南方水系和北方水系翹嘴鲌群體的安全質(zhì)量濃度分別為0.085 mg/L和0.089 mg/L。

表4 阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果

表5 阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的急性毒性試驗結(jié)果分析

3 總結(jié)和討論

3.1 翹嘴鲌對2種藥物的抗應(yīng)激行為

活性碘是1種溫和型消毒劑，在合理濃度范圍內(nèi)可使魚體表的細菌、真菌等菌體內(nèi)的蛋白質(zhì)變性，致使病原生物死亡。阿維菌素是1種廣譜殺蟲劑，其作用機理與活性碘完全不同。阿維菌素通過干擾神經(jīng)生理活動形成神經(jīng)傳導抑制，從而起到殺蟲作用[16]。當翹嘴鲌在2種藥物的安全質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，其活動不受影響，而當藥物濃度超過翹嘴鲌承受范圍時，翹嘴鲌產(chǎn)生了不同的抗應(yīng)激行為。主要區(qū)別在于活性碘中毒時，魚體反應(yīng)較為溫和，無猛烈運動，通過張開口和鰓蓋等行為適應(yīng)周邊環(huán)境變化；而阿維菌素中毒時，因刺激其神經(jīng)生理活動，魚體則形成相對于活性碘較猛烈的運動，但當其神經(jīng)元受損后又陷入無力狀態(tài)，通過身體彎曲變形以適應(yīng)周邊環(huán)境變化。

3.2 活性碘對2個翹嘴鲌群體的毒性

活性碘是翹嘴鲌養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中常用的消毒劑，對翹嘴鲌養(yǎng)殖中的病害具有良好的防治作用。李琳琳等[17]研究了聚維酮碘對興凱湖翹嘴鲌的毒性，其安全質(zhì)量濃度為3.95 mg/L；王連琪[18]研究了復合碘對興凱湖翹嘴鲌的毒性，其安全質(zhì)量濃度為8.818 mg/L；于振海等[19]研究了聚維酮碘對大鱗鲃的毒性，其安全質(zhì)量濃度為13.397 mg/L。這些研究結(jié)果與本試驗結(jié)果有所差異。本研究中，活性碘對南方水系和北方水系翹嘴鲌的安全質(zhì)量濃度分別為2.140 mg/L和2.163 mg/L，相對較低，這可能與所使用的藥品碘成分不同以及試驗環(huán)境不同所致。北方水系翹嘴鲌對活性碘的耐受能力稍強于南方水系。根據(jù)國家標準化管理委員會公布的毒性等級評價標準(GB/T 31270.12—2014)，活性碘的藥性等級應(yīng)為中毒(1～10 mg/L)，因此在實際生產(chǎn)過程中使用活性碘作為消毒劑時，應(yīng)將用量控制在其安全質(zhì)量濃度范圍內(nèi)。

3.3 阿維菌素對2個翹嘴鲌群體的毒性

在翹嘴鲌養(yǎng)殖過程中，發(fā)生寄生蟲病害的概率相對較小，阿維菌素的使用頻率較低，因此在養(yǎng)殖生產(chǎn)上對其用量的把握應(yīng)更為謹慎。阿維菌素作為養(yǎng)殖生產(chǎn)中常用殺蟲劑，其對魚類的急性毒性已有較多研究[20-22]，但針對鲌亞科魚類的研究較少。本研究中，南方水系和北方水系翹嘴鲌對阿維菌素的安全質(zhì)量濃度分別為0.085 mg/L和0.089 mg/L，北方水系翹嘴鲌對阿維菌素的適應(yīng)能力稍強于南方水系。根據(jù)國家標準化管理委員會的毒性等級標準，阿維菌素的藥性等級應(yīng)為劇毒(<0.1 mg/L)。鑒于阿維菌素的作用機理是損壞受體的神經(jīng)系統(tǒng)，因此在實際生產(chǎn)過程中，要精確計算用量，不得超過其安全質(zhì)量濃度。

3.4 結(jié)論

本研究表明，活性碘和阿維菌素這2種藥物的生產(chǎn)廠家所推薦的治療藥物濃度均低于該藥物的安全質(zhì)量濃度，可用于翹嘴鲌的養(yǎng)殖生產(chǎn)中。但藥物使用對魚的影響除了藥物的濃度外，還受到許多其他因素的影響，如水溫、天氣、溶解氧、有機物、給藥方式、魚類攝食及活動情況等，應(yīng)根據(jù)實際情況，在不超過安全質(zhì)量濃度的條件下進行合理用藥，以確保用藥安全有效。