不同維生素C源對吉富羅非魚生長性能、抗氧化能力和免疫力的影響

龔福來 林 雪 王紅權(quán)*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，長沙 2410128；2.廣州天科生物科技有限公司，廣州 2510896)

隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)不斷追求高額經(jīng)濟效益，不斷擴大養(yǎng)殖規(guī)模，發(fā)展高密度集約化養(yǎng)殖，致使魚類常處于不同應(yīng)激狀態(tài)下，導(dǎo)致魚體抵抗力下降，病害頻發(fā)，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成較大的經(jīng)濟損失。維生素因其廣泛的生理和免疫作用，能緩解魚類的應(yīng)激狀態(tài)，應(yīng)用于魚類以抵抗多種感染病的侵襲[1]。維生素C，又稱抗壞血酸，是一種水溶性維生素，具有還原作用，是天然的抗氧化劑和免疫增強劑，通常被添加到飼料和水體中，以提高水產(chǎn)動物機體抗氧化酶的活性，緩解其氧化應(yīng)激反應(yīng)[2]。維生素C對水產(chǎn)動物有促生長、增強免疫、抗病力的功能[3]。維生素C是維持魚類正常生理功能必需的微量營養(yǎng)素，除鱘形目魚類和七鰓鰻能合成少量維生素C外，大多數(shù)魚類缺乏L-古洛糖酸內(nèi)酯氧化酶(L-gulonolactone oxidase，GLO)而不具備這種能力，必須由外源補充[4]。

羅非魚(Oreochromisniloticus)又名非洲鯽魚，屬鱸形目(Perciformes)，麗鯛科(Cichlidae)，羅非魚屬，原產(chǎn)地非洲，主要集中在熱帶和亞熱帶地區(qū)養(yǎng)殖[5]。羅非魚是全球養(yǎng)殖最廣泛的淡水魚類之一，具有適應(yīng)能力強、生長速度快、養(yǎng)殖周期短、出肉率高、無肌間刺、蛋白質(zhì)豐富和肉質(zhì)鮮美等優(yōu)點[6]。目前我國主要飼養(yǎng)的羅非魚品種為吉富羅非魚(GIFT)[7]。羅非魚被引進我國后發(fā)展迅速，現(xiàn)我國已經(jīng)成為世界上最大的羅非魚養(yǎng)殖國和出口國。羅非魚是我國的出口導(dǎo)向性的水產(chǎn)品之一[8]，2019年我國羅非魚總產(chǎn)量達到164.16萬t，苗種產(chǎn)量達到215億尾[9]。Falcon等[10]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加600 mg/kg維生素C能夠有效緩解低溫對尼羅羅非魚造成的應(yīng)激。El-Sayed等[11]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加500 mg/kg維生素C能夠有效防止尼羅羅非魚因鎘導(dǎo)致的肝臟中毒。宋學宏等[12]對異育銀鯽的試驗結(jié)果表明，飼料中添加一定量的維生素C能顯著提高魚體的生長速度和增重率(weight gain rate，WGR)。冷向軍等[13]在青魚魚種飼料中添加不同劑型維生素C的研究結(jié)果表明，隨飼料中維生素C含量的增加，青魚魚種的增重率、存活率(survival rate，SR)均顯著上升。王吉橋等[14]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中當添加一定量的維生素C多聚磷酸酯能夠提高黃顙魚的抗病力。目前，市面上大都是以維生素C磷酸酯作為飼料添加劑來滿足魚類對維生素C的需求，研究主要集中在維生素C磷酸酯、包膜維生素C和普通維生素C對魚類生長和免疫等方面的影響。鋅螯合維生素C主要是由維生素C以鋅為配位體螯合而成，與維生素C磷酸酯相比結(jié)構(gòu)上更穩(wěn)定，關(guān)于鋅螯合維生素C對魚類生長、抗氧化功能等的影響尚處在研究探索階段。因此，本試驗以吉富羅非魚為研究對象，比較在飼料中添加3種不同來源的維生素C(普通維生素C、維生素C磷酸酯和鋅螯合維生素C)對吉富羅非魚生長、血清抗氧化與免疫指標以及肝臟抗氧化指標的影響，以期為維生素C在水產(chǎn)飼料中的高效應(yīng)用和吉富羅非魚的健康養(yǎng)殖提供理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鋅螯合維生素C：由維生素C以鋅為配位體螯合而成，維生素C含量為35%，實際添加量為285.71 g/kg鋅螯合維生素C；維生素C磷酸酯：飼料級，維生素C含量為35%，實際添加量為285.71 g/kg 維生素C磷酸酯；普通維生素C：飼料級，維生素C含量為99%，實際添加量為101.01 g/kg普通維生素C。

1.2 試驗飼料

以豆粕、菜籽粕、棉籽粕等為主要原料，根據(jù)水產(chǎn)行業(yè)標準《羅非魚配合飼料》(SC/T 1025—2004)配制基礎(chǔ)飼料，該基礎(chǔ)飼料不額外添加維生素C，其組成及營養(yǎng)水平見表1。在基礎(chǔ)飼料中分別添加100 mg/kg(以維生素C計)的普通維生素C、維生素C磷酸酯和鋅螯合維生素C配制3種試驗飼料，普通維生素C、維生素C磷酸酯和鋅螯合維生素C的實際添加量分別為101.01、285.71、285.71 g/kg。本試驗中維生素C添加量是參照羅非魚飼料維生素C推薦添加量150 mg/kg的基礎(chǔ)上，根據(jù)試驗魚規(guī)格并結(jié)合本試驗所用維生素C源產(chǎn)品特性等綜合因素確定。先將飼料原料分別進行粉碎，過60目篩，再用V型混合機攪拌均勻，通過F-75型雙螺桿擠條機制成直徑為2 mm的顆粒飼料，擠壓腔內(nèi)物料溫度45 ℃、擠壓時間1 min。然后使用55 ℃的溫度對顆粒飼料進行烘干處理，待其冷卻至室溫之后放入-4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

續(xù)表1項目 Items含量 Content維生素預(yù)混料 Vitamin premix1)0.50礦物質(zhì)預(yù)混料 Mineral premix2)1.00氯化膽堿 Choline chloride0.20合計 Total100.00營養(yǎng)水平 Nutrient levels3)水分 Moisture6.90粗蛋白質(zhì) CP31.60粗脂肪 EE6.11粗灰分 Ash7.15總磷 TP1.21

1.3 試驗魚與飼養(yǎng)管理

在正式進行試驗之前，調(diào)試養(yǎng)殖循環(huán)系統(tǒng)設(shè)備是否正常，將養(yǎng)殖桶消毒和清洗干凈后注水，從廣東羅非魚良種場購買一定數(shù)量的吉富羅非魚魚苗，魚苗購買回來后放在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)容積為400 L的養(yǎng)殖桶(上口外徑：955 mm；底部外徑：810 mm；高度：740 mm)中，為了使魚苗能夠盡快適應(yīng)環(huán)境，減少魚苗應(yīng)激帶來的不利影響，魚苗在養(yǎng)殖桶中暫養(yǎng)2周。2019年6月5日對其進行進一步的挑選，選出體格相近、活潑健康的魚苗500尾[初始平均體重為(21.18±0.24) g]進行分組，本試驗設(shè)1個對照組(飼喂基礎(chǔ)飼料)，3個維生素C添加組，即普通維生素C組、維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組，分別飼喂在基礎(chǔ)飼料中添加100 mg/kg(以維生素C計)相應(yīng)維生素C源的試驗飼料。每組設(shè)5個重復(fù)，每個重復(fù)放養(yǎng)25尾魚。分組后暫養(yǎng)1周，2019年6月12日正式開始試驗，2019年8月13日禁食1 d后，8月14日開始取樣，具體取樣方法見樣本采集。

試驗期間每天08：00和17：00各投喂1次，日投喂量為魚體重的4%～10%[15]，上午投喂40%，下午投喂60%，具體投喂量按試驗魚實際攝食情況而定，每天記錄投喂量。每日投喂完后巡視試驗魚的采食情況，發(fā)現(xiàn)死魚及時撈出并稱重記錄，觀察魚群的活動情況。通過增氧泵進行供氧，每隔3 d使用溶氧試劑盒檢測水體中溶氧含量。在試驗期間每2 d更換養(yǎng)殖用水(1/3體積)，保證水質(zhì)干凈清潔，定期進行水質(zhì)檢測，保持水體pH 7.0～8.5，氨氮含量<0.3 mg/L，亞硝酸鹽含量<0.1 mg/L，溶氧含量>5.0 mg/L。試驗養(yǎng)殖周期為63 d，試驗期間水溫為27～32 ℃。

1.4 樣本采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，試驗魚禁食24 h，以桶為單位稱重。從養(yǎng)殖桶中隨機選取6尾魚，稱量每尾魚的體重，隨后測量體長和體高，并嚴格準確地記錄生長數(shù)據(jù)；然后使用標準為1 mL的注射器從魚(無麻醉處理)的尾靜脈采血，靜置之后3 500 r/min離心15 min，取上層血清分裝后放入-80 ℃冰箱待用，用于血清抗氧化與免疫指標的測定。采血后的魚置于冰盤上解剖，剝離內(nèi)臟團稱重，再剝離出肝臟稱重，隨后把肝臟裝入編號后的小號封口袋中，放入-80 ℃冰箱待用，用于肝臟抗氧化指標的測定。

1.5 指標測定

1.5.1 常規(guī)營養(yǎng)成分

飼料中水分、粗脂肪、粗蛋白質(zhì)、粗灰分和總磷含量的測定分別采用105 ℃恒溫干燥法(GB/T 5009.3—2003)、索氏抽提法(GB/T 5009.6—2003)、凱氏定氮法(GB/T 5009.5—2003)、550 ℃馬福爐灰化法(GB/T 5009.4—2003)和分光光度法(GB/T 6437—2018)。

1.5.2 生長性能

生長性能指標使用以下公式進行計算：

式中：N0表示初始魚尾數(shù)；Nt表示終末魚尾數(shù)；Wf表示終末平均體重(g)；Wi表示初始平均體重(g)；t表示飼養(yǎng)的總天數(shù)(d)；Wr表示飼料消耗量(g)；Wz表示體重增加量(g)；Wg表示肝臟重(g)；Wq表示全魚重(g)；Wzz表示內(nèi)臟團重(g)；Lb表示平均終末體長(cm)。

1.5.3 抗氧化與免疫指標

總抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)與總谷胱甘肽(total glutathione，T-GSH)含量以及總超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase，T-SOD)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)和溶菌酶(lysozyme，LSZ)活性均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒，按說明書測定。皮質(zhì)醇(cortisol，COR)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M，IgM)、補體3(complement 3，C3)、補體4(complement 4，C4)含量以及6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6-phosphogluconate dehydrogenase，6PGDH)和異檸檬酸脫氫酶(isocitrate dehydrogenase，ICDH)活性采用上海酶鏈生物有限公司生產(chǎn)的試劑盒，按說明書測定。檢測儀器為Infinite 200多功能酶標儀。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 2010整理后，用SPSS 25.0軟件進行方差齊性檢驗和單因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。若組間有顯著差異，再用Duncan氏法進行多重比較檢驗。結(jié)果均以平均值±標準誤表示。

2 結(jié) 果

2.1 不同維生素C源對羅非魚生長性能的影響

由表2可知，以鋅螯合維生素C組的終末平均體重和增重率最高，增重率達到697.09%，與對照組相比有顯著差異(P<0.05)；維生素C磷酸酯組的終末平均體重顯著高于對照組(P<0.05)；增重率從高到低順序為：鋅螯合維生素C組>維生素C磷酸酯組>普通維生素C組>對照組。鋅螯合維生素C組的特定生長率顯著高于對照組和普通維生素C組(P<0.05)。各組的存活率都在90%以上，組間差異不顯著(P>0.05)。相比對照組和普通維生素C組，鋅螯合維生素C組的飼料系數(shù)顯著降低(P<0.05)，維生素C磷酸酯組則與其他各組均差異不顯著(P>0.05)。各組的總采食量差異不顯著(P>0.05)。鋅螯合維生素C組的肝體指數(shù)最低，顯著低于維生素C磷酸酯組(P<0.05)。各組間臟體指數(shù)和肥滿度差異不顯著(P>0.05)。

表2 不同維生素C源對羅非魚生長性能的影響

2.2 不同維生素C源對吉富羅非魚血清抗氧化與免疫指標的影響

由表3可知，維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組血清T-GSH含量顯著高于對照組和普通維生素C組(P<0.05)。鋅螯合維生素C組血清T-AOC顯著高于對照組(P<0.05)，與普通維生素C組和維生素C磷酸酯組差異不顯著(P>0.05)。與對照組相比，維生素C磷酸酯組血清MDA含量顯著降低(P<0.05)，普通維生素C組和維生素C磷酸酯組雖有所降低，但差異不顯著(P>0.05)。各組之間血清T-SOD活性均差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同維生素C源對吉富羅非魚血清抗氧化指標的影響

由表4可知，各組間血清IgM含量差異不顯著(P>0.05)。鋅螯合維生素C組血清C3、C4含量顯著低于維生素C磷酸酯組(P<0.05)，與對照組和普通維生素C組差異不顯著(P>0.05)。對照組血清LSZ活性顯著低于普通維生素C組、維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組(P<0.05)。

表4 不同維生素C源對吉富羅非魚血清免疫指標的影響

維生素C磷酸酯組血清AKP活性顯著高于對照組、普通維生素C組和鋅螯合維生素C組(P<0.05)。維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組血清COR含量顯著低于對照組(P<0.05)，與普通維生素C組差異不顯著(P>0.05)。

2.3 不同維生素C源對吉富羅非魚肝臟抗氧化指標的影響

由表5可知，各組間肝臟T-AOC以及T-SOD、AKP和6PGDH活性與T-GSH含量差異不顯著(P>0.05)。維生素C磷酸酯組肝臟MDA含量顯著低于對照組、普通維生素C組和鋅螯合維生素C組(P<0.05)。鋅螯合維生素C組肝臟ICDH活性顯著高于對照組、普通維生素C組和維生素C磷酸酯組(P<0.05)。

表5 不同維生素C源對吉富羅非魚肝臟抗氧化指標的影響

3 討 論

3.1 不同維生素C源對吉富羅非魚生長性能的影響

維生素C對魚類的生長有著重要的作用，缺乏維生素C會使魚類出現(xiàn)生長緩慢、骨骼畸形[13]、表皮出血等癥狀[16]。本試驗中，對照組吉富羅非魚并未出現(xiàn)明顯維生素C缺乏癥狀，可能是由于基礎(chǔ)飼料中含有一定量的維生素C，短期能夠維持魚類基本生理需求，但會影響其生長速度。這與吳凡等[17]在羅非魚試驗中未添加維生素C對照組未發(fā)現(xiàn)明顯維生素C缺乏癥狀的研究結(jié)果一致。本試驗結(jié)果表明，普通維生素C和維生素C磷酸酯這2種維生素C源對吉富羅非魚的生長性能的影響不顯著，但鋅螯合維生素C有顯著的促生長效果，優(yōu)于普通維生素C和維生素C磷酸酯。在本試驗條件下，綜合各項生長性能指標，鋅螯合維生素C是吉富羅非魚飼料的最佳維生素C源。這可能是由于鋅螯合維生素C比普通維生素C和維生素C磷酸酯具有更穩(wěn)定的特性或者更好的吸收利用途徑，但其具體原因尚有待深入研究。

維生素C是維持魚類正常生長發(fā)育必需的營養(yǎng)物質(zhì)，飼料中添加適量的維生素C能夠促進魚類生長。研究表明，維生素C能促進吉富羅非魚[17]、翹嘴鲌(Culteralburnus)[18]、黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)[4]的生長。Wilson等[19]的研究結(jié)果表明，飼養(yǎng)斑點叉尾16周后，飼料中添加維生素C磷酸酯和包膜維生素C組的增重率分別為1 235%和916%。石文雷等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加3種不同來源維生素C的試驗組草魚均比對照組生長快、增重率高、飼料系數(shù)低，結(jié)果表明以包膜維生素C促生長效果最優(yōu)，其次是維生素C磷酸酯，普通維生素C最差。宋進美等[21]研究了不同劑型維生素C對奧尼羅非魚的飼喂效果，結(jié)果表明各維生素C組的增重率和飼料轉(zhuǎn)化率均優(yōu)于對照組。胡斌等[22]的研究結(jié)果表明，飼料中添加維生素C磷酸酯后草魚的飼料系數(shù)顯著下降。本試驗結(jié)果表明，鋅螯合維生素C組的飼料系數(shù)顯著低于對照組和普通維生素C組，與維生素C磷酸酯組無顯著差異。這一方面可能是由于魚體對不同形式的維生素C利用效率不同；另一方面可能與鋅螯合維生素C經(jīng)螯合作用后增強了其穩(wěn)定性，使得維生素C的吸收利用率提高有關(guān)。

飼料中添加適量的維生素C能夠降低異鰓鲇(Heterobranchuslongifilis)的肥滿度和肝體指數(shù)[23]，本試驗研究結(jié)果與之相似，鋅螯合維生素C組的肝體指數(shù)顯著低于維生素C磷酸酯組。但是，本試驗結(jié)果中的臟體指數(shù)和肥滿度各組間均無顯著差異，與萬金娟[24]的研究結(jié)果相似，即在飼料中添加一定量的包膜維生素C對團頭魴幼魚的肥滿度無顯著影響。另外，也有研究表明，在飼料中添加維生素C磷酸酯對吉富羅非魚[17]和草魚[22]的肥滿度、臟體指數(shù)和肝體指數(shù)均無顯著影響。這些差異可能與維生素C來源不同等因素有關(guān)。

3.2 不同維生素C源對吉富羅非魚血清抗氧化與免疫指標的影響

血液成分的變化被普遍用來評價魚類的健康狀況、營養(yǎng)狀況和對環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學指標[3]。在應(yīng)激環(huán)境中，機體會產(chǎn)生大量的自由基，它能夠?qū)ι锬ず械亩嗖伙柡椭舅岙a(chǎn)生攻擊作用，進而產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。維生素C是一種重要的抗氧化劑，能夠中和體內(nèi)所產(chǎn)生的自由基，緩解氧化損傷[17]。MDA是動物機體脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，MDA含量越高，說明細胞膜脂質(zhì)過氧化程度則越高，細胞膜的損傷就越嚴重[25-26]。血清MDA含量上升，說明動物機體的抗氧化能力降低，因此，血清MDA含量通常被作為機體抗氧化能力評價指標之一[15]。池磊[27]在幼建鯉上的研究表明，飼料中添加維生素C磷酸酯能夠極顯著降低血清MDA含量。本試驗結(jié)果也表明，飼料中添加維生素C磷酸酯顯著降低了吉富羅非魚血清MDA含量，說明維生素C磷酸酯組吉富羅非魚的細胞膜損傷程度較輕。T-AOC是反映機體酶促及非酶促體系總抗氧化水平高低的主要指標，T-AOC越高則表示機體清除氧自由基的能力越強，反之則越弱，其提高表明魚體抗氧化系統(tǒng)功能得到改善，機體的抗氧化能力提高[28-29]。本試驗中，鋅螯合維生素C組吉富羅非魚血清T-AOC較對照組提高，表明鋅螯合維生素C增強吉富羅非魚抗氧化能力的作用突出，在一定程度能夠提高其對疾病的抵抗力。谷胱甘肽(glutathione，GSH)在維持機體氧化狀態(tài)的平衡中起著重要的作用，是組織細胞抵抗活性氧損害的主要低分子物質(zhì)，能敏感并綜合反映組織細胞抗氧化應(yīng)激能力及受氧化損傷的程度[27]。本試驗中，維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組血清T-GSH含量顯著高于對照組和普通維生素C組，進一步表明飼料中添加維生素C磷酸酯和鋅螯合維生素C更有利于機體抗氧化能力的增強。

魚類受到外部刺激后會產(chǎn)生COR，這種物質(zhì)主要從丘腦下部經(jīng)過垂體和腎間組織軸進行分泌，是一種十分關(guān)鍵的應(yīng)激激素，通常來說，魚類應(yīng)激的靈敏信號高低同魚類血液COR含量的高低關(guān)系密切[30]。在高度集約化養(yǎng)殖過程中不可避免地使魚受到輕度的應(yīng)激，COR含量長期的升高則會抑制機體免疫功能，而維生素C能有效緩解魚類的應(yīng)激狀態(tài)，從而有提高魚體的抗病力。明建華等[3]研究發(fā)現(xiàn)，高劑量維生素C磷酸酯能顯著降低團頭魴血清COR含量。本試驗中，維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組血清COR含量較對照組顯著降低，說明維生素C磷酸酯和鋅螯合維生素C能夠增強吉富羅非魚緩解應(yīng)激的能力，有助于提高魚體的抗病力。

AKP是動物機體重要的功能調(diào)節(jié)酶，與動物機體的生長密切相關(guān)[31]。AKP廣泛存在于動物體內(nèi)，催化水解磷酸單酯，直接參與磷酸基團的轉(zhuǎn)移，是動物體內(nèi)重要的解毒體系[32]。血清AKP活性受生長階段、攝食狀況、環(huán)境等因素影響而發(fā)生變化[33]。一般認為，魚體內(nèi)的AKP參與了魚類腸上皮細胞的吸收與轉(zhuǎn)運，協(xié)助腸上皮細胞吸收葡萄糖、脂類、鈣和無機磷[34]。張道波等[35]在牙鲆飼料中以維生素C多聚磷酸酯形式添加100～900 mg/kg維生素C，結(jié)果顯示血清AKP活性隨著飼料中維生素C添加量的增加而升高，說明高劑量維生素C能顯著提高魚體血清AKP活性，有利于其他營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。在本試驗中，維生素C磷酸酯組血清AKP活性顯著高于對照組、普通維生素C組和鋅螯合維生素C組，表明維生素C磷酸酯能顯著提高血清AKP活性，可能有利于細胞代謝和維生素C的利用。

IgM是硬骨魚類主要的免疫球蛋白之一，魚體內(nèi)含有IgM含量越高，則魚體免疫力越強，反之則越弱，二者呈現(xiàn)出正相關(guān)的關(guān)系[36]。魚類的非特異性免疫中重要的組成部分之一是魚類的補體系統(tǒng)[37]。其中，在補體途徑中C4起到激活的作用，而C3不僅具有激活作用，還具備了的經(jīng)典途徑替代作用。C3是血清中含量最高的補體成分，可抵抗病原菌的感染、介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)[38]。宋學宏等[12]研究表明，異育銀鯽的血清補體含量隨維生素C磷酸酯含量的增加而提高。萬金娟[24]在團頭魴上的研究表明，飼料中添加包膜維生素C能夠顯著提高血清C3和C4含量，同時表明不同維生素C添加劑量能夠影響其含量。然而，王文輝等[4]研究表明，在黃顙魚飼料中添加不同劑型和劑量的維生素C，各組血清IgM、C3和C4含量差異不顯著。產(chǎn)生不同的結(jié)果可能與試驗方法、維生素C源及魚體自身健康狀況等因素不同有關(guān)。本試驗中，各組間血清IgM含量差異不顯著；維生素C磷酸酯組血清C3和C4含量顯著高于鋅螯合維生素C組，與對照組和普通維生素C組差異不顯著。這說明不同來源的維生素C可能對不同免疫指標有不同的影響。胡斌等[22]研究顯示，飼料中添加維生素C磷酸酯顯著提高了草魚血清LSZ活性。王文輝等[4]的研究也表明，不同劑型的維生素C均能顯著提高黃顙魚血清LSZ活性。本試驗中，對照組血清LSZ活性顯著低于普通維生素C組、維生素C磷酸酯組和鋅螯合維生素C組。這說明基礎(chǔ)飼料中添加適量的維生素C能夠提高吉富羅非魚的免疫力，不同來源維生素C對吉富羅非魚的血清免疫指標有不同的影響，但其作用機制有待進一步研究。

3.3 不同維生素C源對吉富羅非魚肝臟抗氧化指標的影響

在魚類進行新陳代謝時，發(fā)揮關(guān)鍵作用的器官是肝臟，它對于代謝蛋白質(zhì)、維生素等各類營養(yǎng)物質(zhì)十分重要。與此同時，肝臟還能儲存大量的營養(yǎng)物質(zhì)[39]。在長期的進化過程中，生物體為防止氧自由基對機體造成損傷，保持其內(nèi)環(huán)境平衡，逐漸形成了特定的抗氧化防御系統(tǒng)，主要包括酶系統(tǒng)[超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)]和非酶系統(tǒng)(GSH、維生素C、維生素E等)[37]。維生素C作為一種水溶性抗氧化劑進入機體后，能積極發(fā)揮抗氧化作用，清除自由基，保護機體免受氧化損傷?？寡趸窼OD、CAT、GSH-Px的活性是反映機體健康與否的重要指標[36]。關(guān)于維生素C對魚類肝臟生化指標影響的研究相對較少。萬金娟[24]在團頭魴幼魚上的研究表明，維生素C組肝臟SOD活性顯著高于對照組。本試驗中，各組間肝臟T-SOD活性差異不顯著。結(jié)果存在差異可能是試驗條件和維生素C劑型不同所致。池磊[27]在幼建鯉上的研究表明，維生素C組肝胰臟GSH含量顯著高于對照組。本試驗中，各組之間肝臟T-AOC及AKP、6PGDH活性與T-GSH含量差異不顯著。出現(xiàn)這種差異的原因可能是試驗方法和取樣時間等不同，其作用機制有待進一步研究。明建華等[3]研究顯示，高劑量維生素C磷酸酯能夠顯著降低團頭魴肝臟MDA含量。本試驗結(jié)果也表明，維生素C磷酸酯組肝臟MDA含量顯著低于對照組、普通維生素C組和鋅螯合維生素C組，這與在黑鯛仔魚飼料中添加維生素C磷酸酯能顯著降低肝臟MDA含量的結(jié)果[40]一致，表明維生素C磷酸酯能夠通過減少吉富羅非魚脂質(zhì)過氧化毒性產(chǎn)物MDA含量來提高其抗氧化能力。ICDH是一類小分子蛋白質(zhì)，是具有重要脫羧作用的氧化還原酶，在能量代謝、氨基酸和維生素合成中扮演重要角色[41]，而肝臟是魚類中間代謝的主要器官。本試驗中，鋅螯合維生素C組肝臟ICDH活性與對照組、普通維生素C組和維生素C磷酸酯組相比顯著提高，這表明鋅螯合維生素C較其他2種維生素C源對ICDH活性的提高作用更顯著。綜上可知，不同維生素C源由于產(chǎn)品自身特性的不同，在魚類中的應(yīng)用效果也不盡相同。

4 結(jié) 論

① 與普通維生素C和維生素C磷酸酯相比，飼料中添加鋅螯合維生素C對吉富羅非魚的促生長效果更好。

② 飼料中添加鋅螯合維生素C能夠提高吉富羅非魚的抗氧化能力，而添加維生素C磷酸酯則能夠提高吉富羅非魚的抗氧化能力和免疫力。

③ 依據(jù)本試驗結(jié)果，推薦吉富羅非魚飼料中使用鋅螯合維生素C作為維生素C源。