鏈球菌感染后腎炎患者血LXA4、LTB4、15-LO水平變化的意義

徐可，布海霞，郭利芹

（新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腎內(nèi)科，河南 新鄉(xiāng) 453000）

鏈球菌是自然界廣泛存在的一種細(xì)菌,可引發(fā)人化膿性炎癥、超敏反應(yīng)性疾病等。鏈球菌感染后腎炎是鏈球菌感染引發(fā)的常見疾病之一,患者癥狀以蛋白尿、血尿、水腫以及高血壓等為主[1]。本病好發(fā)于3~8 歲兒童中，男女比例約為2：1[2]。血脂氧素A4(Lipoxygenin A4，LXA4)是脂氧素家族重要成員,具有抗炎及促炎癥反應(yīng)消散能力； 白三烯B4（Leukotriene B4，LTB4）歸屬于白三烯家族，是中性粒細(xì)胞趨化因子，對單核-巨噬細(xì)胞等具有趨化及活化能力； 白細(xì)胞15-脂氧化酶 （Leukocyte 15-lipoxygenase，15-LO） 可通過細(xì)胞間的相互作用合成脂氧素[3,4]。為分析該三種指標(biāo)在鏈球菌感染后腎炎患者中的表達(dá)水平及意義,本文選取我院治療的52 例鏈球菌感染后腎炎患兒進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2017 年 1 月-2018 年 5 月在我院治療的鏈球菌感染后腎炎患兒52 例為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴診斷符合《兒科學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵發(fā)病時(shí)間≤3d； ⑶患兒監(jiān)護(hù)人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴其他原發(fā)性腎小球疾病及慢性腎臟??；⑵合并有肝、心、肺等其他重要臟器疾病、惡性腫瘤、先天性畸形。同時(shí)選取健康兒童50 例作為對照組，觀察組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 抽取兩組受檢人員外周靜脈血各7ml，置于肝素抗凝試管內(nèi), 取2ml 血樣本選用ELISA 法檢測血LXA4和LTB4水平,試劑盒由美國Neogen 公司提供，操作參照說明書進(jìn)行。采用RTPCR 檢測15-LO 相對表達(dá)： 取5ml 血樣本選用明膠沉降法進(jìn)行白細(xì)胞分離操作,并選用臺盼藍(lán)拒染色法檢測白細(xì)胞活性, 白細(xì)胞成活90%顯示成功。選用培養(yǎng)液將白細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106/ml，常溫下10cm 半徑，3600r/min 離心 8min，收集白細(xì)胞,選用Trizol 法提取總RNA，參照美國Primega 公司提供的逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)進(jìn)行 RNA 逆轉(zhuǎn)錄，15-LO、β-actin引物序列由上海生工提供，其中15-LO 引物序列為：5’GGTTTTAGCGGTAGGCGGAGT3’ 及 5’CCCAATAAACACGCCAATACGATA3’，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 PCR 反應(yīng) ，條件如 下 ：95℃，5min；92℃，30s；56℃，40s，72℃，10s，72℃，7min，共 35 個(gè)循環(huán)。選用3%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，并選用溴化乙錠進(jìn)行染色操作，選用UVP 凝膠圖像掃描儀讀取積分吸光度，并計(jì)算15-LO mRNA 相對表達(dá)強(qiáng)度[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS19.0 軟件，計(jì)量資料采用（±s)表示，組間比較使用t 檢驗(yàn)或配對t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn) α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 兩組血 LXA4、LTB4和 15-LO 水平比較 觀察組血LXA4、LTB4以及15-LO 相對表達(dá)量明顯高于對照組,差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見表2。

表2 兩組血LXA4、LTB4 和15-LO水平比較

圖1 RT-PCR圖（1：對照組；2：觀察組）

2.2 觀察組不同腎功能患者血LXA4、LTB4和15-LO 水平比較 觀察組 Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)患者血LXA4、LTB4以及15-LO 相對表達(dá)量明顯高于Ccr≥80ml/(min·1.73m2)患者，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

2.3 相關(guān)性分析 將觀察組血LXA4、LTB4和15-LO 與 Ccr 進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示：血 LXA4、LTB4和 15-LO 與 Ccr 呈負(fù)相關(guān) （r=-0.343、-0.320 和-0.351，P＜0.05）。

表3 觀察組不同腎功能患者血LXA4、LTB4 和15-LO水平比較

2.4 觀察組治療前后血LXA4、LTB4和15-LO 水平比較 觀察組治療后血LXA4、LTB4和15-LO 相對表達(dá)量明顯低于治療前，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表4。

表4 觀察組治療前后血LXA4、LTB4 和15-LO水平比較

3 討論

鏈球菌感染后腎炎患者病理改變以毛細(xì)血管內(nèi)增殖性腎小球腎炎為主,患者腎小球伴大量中性粒及單核細(xì)胞浸潤情況，本病具有明顯自限特征，其病理改變可于1~2 月后消失[6,7]。對于鏈球菌感染后腎炎的自限性，臨床認(rèn)為除與鏈球菌抗原被機(jī)體清除，局部促炎介質(zhì)消退有關(guān)外，還可能與患者內(nèi)源性炎性反應(yīng)“剎車信號”脂氧素高表達(dá)，導(dǎo)致白細(xì)胞浸潤衰退有關(guān)[8,9]。脂氧素屬于花生四烯酸代謝產(chǎn)物，可通過15-LO、5-LO 等合成。脂氧素根據(jù)分子羥基位置及構(gòu)象分為LXA4、LXB4等幾類[10]。LXA4是多種自限性疾病及炎癥消退的參與因子，并且LXA4缺陷可引發(fā)炎癥失控[11]。LXA4可抑制TNF-α、IL-1β 等促炎以你這表達(dá),并調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答，改善患者炎癥[12]。LXA4可抑制中性粒細(xì)胞向炎癥部位的轉(zhuǎn)移，并調(diào)節(jié)促炎/抗炎因子表達(dá)平衡，增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞趨化,提升其對凋亡中性粒細(xì)胞的清除能力[13]。LTB4主要存在于活化巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞內(nèi)，可通過LXA4水解酶誘導(dǎo)而表達(dá)。LTB4已被證實(shí)，其在多種腎炎中氣道致病效用，而LTB4受體拮抗劑給藥后，腎炎小鼠腎小球白細(xì)胞浸潤及血尿癥狀可顯著改善[14]。15-LO 主要表達(dá)于單核巨噬細(xì)胞、 上皮細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)。本組研究中，觀察組血LXA4、LTB4以及15-LO 相對表達(dá)量明顯高于對照組，表明15-LO 高表達(dá)可促進(jìn)LXA4亢進(jìn)，并一定程度增強(qiáng)LTB4表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)[15]，腎炎患者急性期血尿LXA4表達(dá)水平顯著上升，并且合成LXA4的前置介質(zhì)15-LO 表達(dá)水平也大幅上升，而LTB4表達(dá)水平上升2 周后逐步降低，分析其原因可能與亢進(jìn)的LXA4可對LTB4生成抑制效應(yīng)，但本組研究未證實(shí)這一結(jié)論，這與本組研究血樣抽取時(shí)間不同有關(guān)。腎炎患者LXA4絕對數(shù)量是LTB4的10 倍以上，進(jìn)一步的研究顯示，15-LO、LXA4可抑制白細(xì)胞合成 LTB4，同時(shí)抑制LTB4 的中性粒細(xì)胞趨化能力[16]。但由于炎癥患者自身具有的病理狀態(tài)，患者LTB4水平依然高于健康人群，這也可能是患者LTB4依然較高的原因。本組研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組治療后血LXA4、LTB4和15-LO 相對表達(dá)量明顯低于治療前，表明LXA4、LTB4和 15-LO 高表達(dá)與患者癥狀密切相關(guān)，臨床或可通過檢測 LXA4、LTB4和 15-LO 來評估患者預(yù)后。

肌酐是肌酸代謝產(chǎn)物，其分子量較小，可自由通過腎小球排出體外，因此，Ccr 成為臨床常用的腎小球?yàn)V過功能評估指標(biāo)。臨床研究表明，Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)提示腎小球?yàn)V過功能衰退。本組研究中，觀察組 Ccr＜80 ml/(min·1.73m2)患者血 LXA4、LTB4以及15-LO 相對表達(dá)量明顯高于Ccr≥80ml/(min·1.73m2)患者，表明 LXA4、LTB4、15-LO 與患者腎小球?yàn)V過功能密切相關(guān),或可用于評估患者腎臟功能。相關(guān)性研究顯示，血 LXA4、LTB4和 15-LO 與Ccr 呈負(fù)相關(guān)，這佐證了前述研究。

本研究通過分組實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)血LXA4、LTB4、15-LO 與鏈球菌感染后腎炎疾病發(fā)生及預(yù)后密切相關(guān)，同時(shí)還可有效反應(yīng)患者腎臟功能，臨床或可通過檢測該三個(gè)指標(biāo)來為鏈球菌感染后腎炎診斷、治療以及預(yù)后分析提供參考意見。但由于本組研究取樣地域單一，所納入的數(shù)量有效，研究還存在一定不足，這有待我們進(jìn)一步的大范圍、大樣本研究。

綜上所述，鏈球菌感染后腎炎患者血LXA4、LTB4、15-LO 水平升高，與患兒腎功有一定關(guān)系，或可成為鏈球菌感染后腎炎診治的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)。