MCV和MicroR對不同方法計數(shù)血小板準確性的影響

龔人杰，武錦彪，王星，王必斌

（浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州 310003）

自動化血細胞分析儀以其快速、精準、重復(fù)性高等優(yōu)勢，作為實驗室開展臨床檢驗工作的常規(guī)儀器。也因其檢測原理的局限性，一些干擾因素仍會對血小板計數(shù)產(chǎn)生影響。正常紅細胞平均直徑7.2μm，小紅細胞（microcyte）直徑小于 6μm。本文用平均紅細胞體積 （MCV） 和小紅細胞比率（MicroR）這兩個紅細胞參數(shù)來提示小紅細胞,探討其存在時，不同檢測方法（PLT-I、PLT-O、PLT-F）對血小板計數(shù)是否有差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機收集2019 年1～9 月我院門急診血常規(guī)報告共715 例。

按 MCV 分組：A1 組 MCV≤70fL，234 例；A2組 70fL＜MCV≤85fL，244 例；A3 組 85fL＜MCV≤100fL，237 例。

按 MicroR 分組：B1 組 0%≤MicroR≤30%，489 例；B2 組 30%＜MicroR≤50%，165 例 ；B3 組50%＜MicroR＜100%，61 例。

1.2 儀器與試劑 采用 SYSMEX XN-9000、XN-2000 血液細胞分析儀，原裝配套檢測系統(tǒng)及質(zhì)控品，保證儀器性能良好，試劑在效期內(nèi)，質(zhì)控在控。

1.3 檢測方法 以EDTA-K2 抗凝真空負壓管為容器，采集靜脈血2ml，充分混勻，按照SYSMEX XN系列標(biāo)準操作規(guī)程，勾選常規(guī)DIFF 通道、RET（PLT-O）通道和PLT-F 通道，開展血常規(guī)檢測計數(shù)，1h 內(nèi)完成。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 檢測結(jié)果采用SPSS24.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以（±s)表示，組間比較采用配對t 檢驗，用Pearson 相關(guān)系數(shù)r 來表示線性變化相關(guān)性程度，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 按MCV 分組時，以PLT-F 法為基準，將PLT-I法、PLT-O 法與之比較 PLT-I 法與 PLT-F 法比較：A1 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；A2、A3 組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。PLT-O 法與 PLT-F 法比較：A2 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05) ；A1、A3組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

2.2 按 MicroR 分組時，以 PLT-F 法為基準，將PLT-I 法、PLT-O 法與之比較 PLT-I 法與 PLT-F法比較：B1 組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；B2、B3組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。PLT-O 法和 PLTF 法比較：不同組差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表2。

表1 按MCV分組時，以PLT-F法為基準，將PLT-I法、PLT-O法與之比較（±s，×109/L）

表1 按MCV分組時，以PLT-F法為基準，將PLT-I法、PLT-O法與之比較（±s，×109/L）

組別 PLT-I PLT-O PLT-F I 與 F 比較 P 值 O 與 F 比較 P 值A(chǔ)1 A2 A3 MCV(fL)≤70 70＜MCV≤85 85＜MCV≤100例數(shù)234 244 237 298.97±103.128 202.99±128.327 230.20±184.665 270.40±98.060 206.52±122.903 228.91±184.570 269.22±98.187 202.33±127.698 230.84±186.348 0.000 0.747 0.620 0.357 0.025 0.066

表2 按MicroR分組時，以PLT-F法為基準，將PLT-I法、PLT-O法與之比較（±s，×109/L）

表2 按MicroR分組時，以PLT-F法為基準，將PLT-I法、PLT-O法與之比較（±s，×109/L）

組別 PLT-I PLT-O PLT-F I 與 F 比較 P 值 O 與 F 比較 P 值B1 B2 B3 MicroR(%)0≤MicroR≤30 30＜MicroR≤50 50＜MicroR＜100例數(shù)489 165 61 218.22±158.480 292.12±103.400 313.75±106.168 217.85±155.661 266.44±98.541 285.70±97.447 216.81±158.823 264.35±97.213 285.84±101.792 0.294 0.000 0.000 0.334 0.179 0.957

2.3 MCV 與 MicroR 的線性關(guān)系 以 MicroR 為橫軸，MCV 為縱軸做散點圖： 當(dāng) 0%≤MicroR＜100%時，r=-0.928，P=0.000，見圖1； 當(dāng) 5%＜MicroR＜100%時，r=-0.961，P=0.000，見圖2。

圖1 0%≤MicroR＜100%，MCV與MicroR的線性關(guān)系

圖2 5%＜MicroR＜100%，MCV與MicroR的線性關(guān)系

3 討論

血小板是由骨髓造血組織中的巨核細胞產(chǎn)生，具有維持內(nèi)皮完整性以及黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能[1]。血小板數(shù)量是血常規(guī)檢測的重要內(nèi)容,不僅可以幫助醫(yī)生診斷血小板相關(guān)性疾病，還可以評估患者的治療效果[2]。臨床上有多種疾病可以引起血小板的假性增高： 如缺鐵性貧血，紅細胞平均體積偏小，小紅細胞增多；又如某些溶血性疾病或大面積燒傷，患者血液中出現(xiàn)較多的紅細胞碎片； 部分慢性粒細胞白血病患者經(jīng)過治療后，血液內(nèi)也會出現(xiàn)大量紅細胞碎片[3]。除疾病因素外，標(biāo)本的質(zhì)量同樣會影響血小板計數(shù)，如溶血、脂濁等。因此，準確的對血小板進行計數(shù)有著重要的意義。

我們研究發(fā)現(xiàn),小紅細胞存在時對血小板計數(shù)產(chǎn)生影響，當(dāng) MCV≤70fL，MicroR＞30%時，提示小紅細胞數(shù)量較多，對PLT 計數(shù)的影響也就較大，PLT-I 法與PLT-F 法的血小板有顯著性差異，PLT-O 法受影響較小,其原因可能是檢測原理的不同，表現(xiàn)在：⑴PLT-I 電阻抗法：僅根據(jù)顆粒的體積大小來甄別細胞，與顆粒內(nèi)容物性質(zhì)無關(guān)。儀器把2～30fl 范圍的細胞判定為血小板，把 25～250fl 范圍的細胞判定為紅細胞，故存在交叉計數(shù)區(qū)域[4]，當(dāng)血液中存在一定數(shù)量的小紅細胞或細胞碎片時，其體積趨近血小板，儀器會誤將其計數(shù)為血小板導(dǎo)致PLT 計數(shù)假性增高。⑵PLT-O 光學(xué)法：通過聚次甲基和嗯嗪對血細胞內(nèi)核酸物質(zhì)熒光染色，成熟紅細胞內(nèi)不含任何核酸成分, 而血小板內(nèi)存在DNA 和RNA，因此PLT-O 法能有效地鑒別紅細胞和血小板，使得血小板計數(shù)結(jié)果更可靠。⑶PLT-F熒光法：僅針對血小板內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的線粒體DNA 和RNA 進行噁嗪染料熒光染色。采用流式細胞數(shù)檢測前向散射光和側(cè)向熒光,對血小板內(nèi)核酸物質(zhì)鑒別計數(shù)[5]，是三種方法中唯一僅針對血小板進行計數(shù)的方法。這一方法有效避免了上述小紅細胞或細胞碎片等因素導(dǎo)致的血小板假性增高[6]。

因此, 本研究以PLT-F 法計量的血小板數(shù)為基準，將 PLT-I、PLT-O 法與其比較分析。⑴PLT-I法與PLT-F 法的統(tǒng)計學(xué)分析： 當(dāng)MCV≤70fL，A1組 PLT-I 值與 PLT-F 值相比，PLT-I 值顯著偏高（平均差 29.748）； 當(dāng) MicroR＞30%，B2 組、B3 組PLT-I 值與 PLT-F 值相比，PLT-I 值顯著偏高 （平均差 27.764，27.918）； 當(dāng) MCV＞70fL 或 MicroR≤30%，PLT-I 法與 PLT-F 法比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。由此可見，小紅細胞影響較大時，表現(xiàn)在 MCV≤70fL 或 MicroR＞30%，PLT-I 法計數(shù)血小板結(jié)果假性增高，需用PLT-F 法復(fù)查。⑵PLT-O 法與 PLT-F 法的統(tǒng)計學(xué)分析： 當(dāng) 70fL＜MCV≤85fL，A2 組 PLT-O 值與 PLT-F 值相比，PLT-O 值偏高（平均差4.197）,可能原因是PLT-O 法不僅計數(shù)含核酸物質(zhì)的血小板，還會將同樣含有核酸成分的白細胞碎片計數(shù)入內(nèi)，導(dǎo)致PLT-O 結(jié)果偏高。有研究表明PLT-O 法與鏡檢結(jié)果差異較大，結(jié)果不可信，而 PLT-F 法與鏡檢無顯著性差異[7]。PLT-O 值偏高的真因有待進一步考證。除70fL＜MCV≤85fL外，其余區(qū)間 MCV、MicroR 對 PLT-O 法和 PLT-F法比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

PLT-I 法每次可檢測20～25 萬個顆粒, 經(jīng)濟、快速，是開展篩查工作的首選方法；PLT-O 法無法分離同樣含有核酸信息的白細胞碎片,且每次僅檢測3000 個血小板，遠遠少于阻抗法[8]，但在一些尚沒有開展PLT-F 法的實驗室，PLT-O 法也可作復(fù)查使用；PLT-F 法有較強的抗紅細胞碎片干擾能力，不易受到血液中非血小板小顆粒影響，能準確檢測血小板計數(shù)[9]。同樣，也有研究發(fā)現(xiàn)，該方法抗小紅細胞干擾能力優(yōu)于其他兩種方法,檢測結(jié)果更為準確[10,11]。但因其成本較高，不適合臨床常規(guī)樣本的測定。根據(jù)本次研究, 建議在MCV≤70fL，MicroR＞30%時，用PLT-F 法進行復(fù)檢，得到較為可靠的血小板數(shù)值。

MCV 和 MicroR 的 相 關(guān) 性 表 現(xiàn) 在 ： MCV 和MicroR 顯著相關(guān)（r=-0.928,P=0.000），即隨著 MicroR 的增大，MCV 呈線性減小。進一步分析，當(dāng)MicroR≤5%，MCV 大體落在正常參考范圍內(nèi) （占92.6%，本實驗室 MCV 參考范圍 82.6fL～99.1fL）,即紅細胞大小基本正常。當(dāng) MicroR＞5%，MCV 和MicroR 顯著相關(guān)（r=-0.961,P=0.000）,且 r 更趨近于1，表示相關(guān)性更強。由此可見，MCV 和MicroR是一對較好的反應(yīng)小紅細胞的指標(biāo)，實際工作中，應(yīng)當(dāng)把這兩個參數(shù)結(jié)合起來運用。

綜上，雖然全自動血細胞分析儀高效、便捷，并可實現(xiàn)大批量標(biāo)本檢測，但仍有其局限性，無法完全保證血小板的精準計數(shù)。MCV、MicroR 數(shù)值將影響分析儀對于血小板和紅細胞的區(qū)分，因此必須重視這兩個參數(shù)。在利用血細胞分析儀進行日常檢測工作的過程中，PLT-I 法因其經(jīng)濟快速的特點，適合常規(guī)標(biāo)本的篩查，當(dāng)MCV≤70fL，MicroR＞30%時，可通過PLT-F 通道復(fù)檢，并結(jié)合相應(yīng)的直方圖、散點圖及必要的人工鏡檢，確保為臨床診斷治療提供準確可靠的血小板計數(shù)值。