2020年新疆部分地區(qū)豬瘟病毒抗體檢測及分析

孫瓊飛 王紫陽 張小玉 黨瑞瑩 常軍帥 屈勇剛*李 巖

（1石河子大學(xué)動物科技學(xué)院，新疆石河子 832003；2動物疾病防控兵團(tuán)重點實驗室，新疆石河子 832003；3新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)畜牧獸醫(yī)工作總站，新疆烏魯木齊 830063）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的家豬和野豬的一種急性、烈性、接觸性傳染病，是危害世界養(yǎng)豬業(yè)最嚴(yán)重的傳染病之一，被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報告的動物疫病之一[1]，被我國列為一類動物傳染病。目前國內(nèi)受非洲豬瘟疫情的影響，中國的生豬存欄量受到較大影響。豬瘟的防控工作，也是重中之重。通過豬瘟疫苗免疫措施的實施，我國基本控制了豬瘟的大范圍發(fā)病。但在生產(chǎn)中，由于各樣的影響因素，豬瘟免疫失敗現(xiàn)象時常發(fā)生，造成非典型性和隱性感染豬的存在。因此，通過免疫抗體水平監(jiān)測，制定合理的免疫程序，對提高疫苗免疫效果具有重要意義。為了解2020年全年新疆部分地區(qū)CSFV抗體水平，本試驗選擇烏蘇、庫車、石河子、雙河、塔城、克拉瑪依等6個地區(qū)的18個規(guī)?；i場進(jìn)行豬瘟病毒抗體檢測與分析，以期為新疆地區(qū)規(guī)?；i場的豬瘟免疫防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

血液樣品隨機采自于烏蘇（A）、庫車（B）、石河子（C）、雙河（D）、塔城（E）、克拉瑪依（F）等6個地區(qū)的18個規(guī)模豬場，共采集血樣1 085份。其中大型規(guī)?；i場4個，采集血清樣品557份；中型規(guī)?；i場8個，采集血清樣品392份；小型規(guī)?；i場6個，采集血清樣品136份。

1.2 材料與儀器

豬瘟病毒（CSFV）抗體檢測試劑盒購自北京IDEXX公司，自動酶標(biāo)儀購自美國BioTek公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 樣品采集

豬只前腔靜脈部位消毒，用一次性針管，從消毒部位刺入，采集血液3～5 mL，經(jīng)室溫靜置，待血液凝固血清析出后，按照順序吸取1 mL血清逐份轉(zhuǎn)入滅菌后1.5 mL的離心管中，逐管編號，必要時經(jīng)4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 間接ELISA檢測法

按照CSFV的ELISA抗體檢測試劑盒說明書要求進(jìn)行操作。使用前，試劑盒所有組分恢復(fù)到18～26℃。將陰性對照、陽性對照、1∶1稀釋的待檢血清樣品（50 μL樣品血清加50 μL稀釋液）對應(yīng)加入酶標(biāo)板，震蕩均勻后放入18～26℃的恒溫箱孵育2 h，用洗滌液洗3次，扣板除去殘留液體，加入酶標(biāo)抗體，放入18～26℃的恒溫箱中孵育30 min，再用洗滌液洗3次，扣板除去殘留液體后，加入底物溶液，避光放入18～26℃的恒溫箱，10 min后加入終止液終止反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀于450 nm波長測定吸光度值，并進(jìn)行結(jié)果分析。

1.3.3 結(jié)果判定

試驗有效性判定：陰性對照OD450值（NCX）＞0.500，陽性對照OD450值（PCX）阻斷率（%）＞50%。阻斷率（%）＝100×（陰性對照平均OD450nm值－樣品OD450nm值）/陰性對照平均OD450nm值。若被檢樣品阻斷率≤30%，該樣品為豬瘟病毒抗體陰性；若被檢樣品阻斷率≥40%，該樣品為豬瘟病毒抗體陽性；若被檢樣品阻斷率在30%～40%，該樣品判為可疑，需要重新檢測。變異系數(shù)CV＝（標(biāo)準(zhǔn)差/平均數(shù)）×100%。若CV≤40%，則抗體水平穩(wěn)定，免疫效果良好；若40%＜CV≤60%，則抗體水平一般；若CV＞60%，則抗體水平差異性大，整齊度不好，需要調(diào)整免疫程序[2]。

1.3.4 試驗數(shù)據(jù)分析

用SPSS 20.0對所獲數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析與判定。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟抗體水平

6個地區(qū)規(guī)?；i場血清共1 085份，平均抗體合格率為83.59%，平均阻斷率為（66.99±25.09）%，離散度為37.45%。6個地區(qū)規(guī)?；i場（A、B、C、D、E、F） 的抗體合格率分別為 92.86%、81.62%、82.93%、70.00%、70.73%和93.75%。A、B、C、D、E、F等6個地區(qū)規(guī)?；i場抗體合格率高于國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)（70%），但E場離散度比較大。使用SPSS軟件進(jìn)行方差分析顯示A、B、C、D、E地區(qū)規(guī)?；i場之間差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 新疆部分地區(qū)規(guī)?；i場豬瘟病毒抗體水平檢測結(jié)果

2.2 不同規(guī)?；i場豬瘟抗體水平

不同規(guī)?；i場豬瘟抗體水平見表2。小、中、大型規(guī)?；i場抗體合格率為70.59%、83.42%和86.54%。小型規(guī)?；i場和大型規(guī)?；i場抗體水平差別較大，其中大型規(guī)?；i場抗體合格率為86.54%，小型規(guī)?；i場的抗體合格率剛剛超過國家標(biāo)準(zhǔn)，為70.59%。小、中、大型規(guī)?；i場豬瘟抗體阻斷率分別為（56.45±25.18）%、（65.77±25.11）%和（70.70±23.91）%。

表2 不同規(guī)模豬群豬瘟免疫抗體檢測結(jié)果

3 討論

3.1 新疆部分地區(qū)免疫情況

2020年新疆烏蘇、庫車、石河子、雙河、塔城、克拉瑪依6個地區(qū)，不同規(guī)?；i場豬瘟免疫效果良好，均超過了國家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。但不同地區(qū)豬瘟抗體水平差別較大（70.00%～93.97%）。豬瘟疫苗免疫抗體平均阻斷率和變異系數(shù)是綜合評估豬瘟疫苗免疫效果的2個重要參數(shù)，通過對檢測數(shù)據(jù)的綜合分析可以幫助豬場及時發(fā)現(xiàn)豬群免疫中可能存在的漏洞并制訂相應(yīng)的優(yōu)化改進(jìn)方案[3]。馬曉艷等[4]對新疆的生豬進(jìn)行豬瘟免疫抗體檢測，發(fā)現(xiàn)豬瘟抗體平均陽性率為75.33%。劉鴿等[5]對新疆北部地區(qū)的生豬進(jìn)行豬瘟病毒抗體檢測，結(jié)果豬瘟抗體陽性率為89.89%。谷思穎等[6]對新疆石河子、昌吉、塔城、伊犁、巴州等5個地區(qū)的豬場進(jìn)行豬瘟抗體檢測，結(jié)果豬瘟抗體陽性率為84.11%。張家瑞等[7]對新疆巴州、伊犁、塔城、阿克蘇、奎屯、石河子等6個地區(qū)的豬場進(jìn)行豬瘟病毒抗體檢測，結(jié)果豬瘟抗體陽性率為85.02%。通過分析2018—2020年新疆部分地區(qū)豬瘟抗體水平發(fā)現(xiàn)，2020年豬瘟抗體水平低于前2年水平，應(yīng)根據(jù)實際情況查找具體因素，而制定合理的措施，提高豬群豬瘟抗體水平。從抗體水平和變異系數(shù)結(jié)果來看，A、B、C、F地區(qū)豬群的抗體水平穩(wěn)定，免疫效果良好；E地區(qū)抗體水平偏低，變異系數(shù)較大，發(fā)生疫情的風(fēng)險較大，建議查找具體原因，加強豬瘟免疫防控的力度。

3.2 不同規(guī)模養(yǎng)豬場的免疫情況

根據(jù)檢測結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，豬瘟病毒的抗體水平高低與養(yǎng)豬的規(guī)模有較大關(guān)系，大型規(guī)?；B(yǎng)豬場的豬瘟疫苗免疫合格率和變異系數(shù)均高于小型規(guī)模化養(yǎng)豬場的免疫水平。在實踐調(diào)查中發(fā)現(xiàn)大型規(guī)模化養(yǎng)豬場，有相對完善的免疫預(yù)防體系，有健全的人員培訓(xùn)制度，人員在生物安全防控時，往往表現(xiàn)得更加積極，能主動配合各項任務(wù)，保證消毒的效果，往往更有利于豬瘟的防控和凈化。在飼養(yǎng)管理方面能做到合理飼喂，保證豬群整體均勻度，能給豬群營造一個安全和干凈的環(huán)境，減少豬群應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，減少免疫失敗。大型規(guī)?；B(yǎng)豬場花費大量的物力和財力，有專業(yè)的基礎(chǔ)獸醫(yī)負(fù)責(zé)場區(qū)豬群的防疫工作，了解豬群的抗體水平，制定科學(xué)的疫苗免疫措施。大型規(guī)?；B(yǎng)豬場在疫苗購買和使用時，會更加注重疫苗的免疫效果。在疫苗運輸階段，往往按照嚴(yán)格的冷鏈運輸，保證疫苗的效價。中、小型規(guī)模化養(yǎng)豬場雖然免疫效果達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)，但應(yīng)該積極學(xué)習(xí)大型規(guī)模化養(yǎng)豬場科學(xué)的飼養(yǎng)管理制度、嚴(yán)格的生物安全理念、完善的人員培訓(xùn)體系、科學(xué)的疫苗免疫措施。豬瘟的防控依舊要靠疫苗免疫，監(jiān)測抗體水平依然是豬瘟防控的重要手段，及時做好豬瘟抗體檢測，及時發(fā)現(xiàn)問題，及時補免或改進(jìn)免疫方案，確保新疆養(yǎng)豬業(yè)的安全生產(chǎn)。