HPLC 法測定市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量

本文目的為測定不同品種市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量。方法 采用HPLC 法測定市售醋中川芎嗪的含量，色譜條件為流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20μL。結果 川芎嗪在0.29300μg·mL-1 范圍內線性關系良好,回歸方程為Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，平均回收率為98.08%，RSD 值為1.56%（n=6）。結論 本研究建立的方法操作簡便、準確性好、靈敏度高,適用于市售炮制輔料醋的質量控制。

食醋中氨基酸的種類多達18 種，具有促進胃液分泌，降低血脂和膽固醇，延緩衰老等功能 [1]。近年來，炮制輔料用醋缺少嚴格的藥用標準，有文獻測定[2]食醋中苯乳酸的含量，為炮制輔料醋的質量控制提供了依據，還有文獻[3]用HPLC 的方法測定了鎮(zhèn)江香醋中的川芎嗪，認為川芎嗪主要是由微生物的發(fā)酵而產生的，美拉德反應是川芎嗪含量增加的主要原因。但是，川芎嗪能否作為炮制輔料醋的質量控制指標未見報道。所以，本實驗采用HPLC法測定13 種市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量，結合釀造原料和工藝分析結果，為炮制輔料用醋品種的選擇和藥用標準的建立提供依據。

儀器與材料

Agilent 1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）；MS105DU 型十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；高速冷凍離心機（上海市浦東新區(qū)新金橋路27號7 號樓），pH 試紙（天津市金達化學試劑有限公司）。川芎嗪對照品（批號：110817-200305，中國藥品生物制品檢定所），其余試劑均為分析純。13 種市售炮制輔料醋：山西紫林陳醋（批號：20200531）；紫林原釀陳醋（批號：20200629）；山西溢勺香老陳醋（批號：20150318）；恒順鎮(zhèn)江香醋（批號：20110928）；海天香醋（批號：20200705）；水塔老陳醋（批號：20200310）；恒順鎮(zhèn)江香醋（批號：20200415）；山西西堡泉老陳醋（批號：20130510）；居易米醋（批號：20200616）；正堂食醋（批號：20200227）；德馨齋清香米醋（20190610）；好太太香醋王（20200703）；海天白米醋（20200617）

方法與結果

對照品溶液的制備取川芎嗪對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為300μg·mL-1 的對照品溶液。

供試品溶液的制備 精密量取食醋15mL，用10%的NaOH 溶液調pH10-11，加入CHCL320mL，混勻萃取，靜置分層。7200r·min-1 離心15min，轉移CHCL3，重復上述操作一次，合并CHCL3相。將CHCL3水浴60℃蒸干，殘渣用0.2moL·L-1 的鹽酸和甲醇以3：7 比例混合均勻的溶液定容至1mL，臨用前用0.45μm 微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

圖1 對照品（A）和供試品（B）溶液的HPLC 色譜圖 1.川芎嗪

HPLC 色譜條件采 用Inertsil ODS-3C18 色 譜 柱（250×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0 mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20μL，柱溫30 ℃。在該色譜條件下，川芎嗪色譜峰圖形較好，見圖1。

方法學考察

線性關系的考察 分別精密量取川芎嗪標準品溶液（300μg·mL-1）0.010、0.039、0.156、0.625、2.500mL，置10mL 棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取以上稀釋的溶液各20μL，進行檢測，記錄峰面積，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，回歸方程為 Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，川芎嗪在0.29300μg·mL-1有良好的線性關系。

精密度實驗 取同一供試品溶液，連續(xù)檢測6 次，記錄峰面積，計算峰面積的RSD 為2.58%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，按2.3 項下的色譜條件分別在0、2、4、8、16、24 h 進行測定，川芎嗪峰面積的RSD 為2.46%，說明供試品溶液在24h 內穩(wěn)定性良好。

重復性實驗 取同一供試品溶液6 份，按2.3 項下的色譜條件進行測定，結果川芎嗪的含量的RSD 為1.86%，說明該方法重復性良好。

加樣回收率實驗 精密吸取已知含量為9.31μg·mL-1，恒順鎮(zhèn)江香醋7.5mL（批號：20200415），共6 份，加入川芎嗪對照品溶液適量，按2.2 項下制備供試品溶液，2.3 項下色譜條件測定，測得的回收率為98.08%，RSD 為1.56%，該方法回收率高，符合含量測定的要求。

樣品測定取2.2 項下供試品溶液，按2.3 項下的HPLC色譜條件依次進行測定，計算樣品中川芎嗪的含量，見表2

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討論

本文用HPLC 法測定13 批市售炮制輔料醋中川芎嗪的含量，發(fā)現(xiàn)不同方法釀制的輔料醋中川芎嗪的含量也不同。德馨齋白醋、海天白米醋采用液態(tài)發(fā)酵技術，均未檢測到川芎嗪，這與釀造過程中的脫色[4]有關，脫色過程中選擇活性炭作為吸附劑，活性炭對極性基團的吸附能力較強，凡是分子中含有極性基團的物質都容易被活性炭吸附，川芎嗪可能在脫色過程被吸附除去。因此，白醋及白米醋不適合作為中藥炮制的輔料醋。批號為20110928 的恒順鎮(zhèn)江香醋和批號為20200415 的恒順鎮(zhèn)江香醋生產原料均為糯米、麥麩、大米、大曲，川芎嗪的含量相差較大，這與陳放過程中的美德拉反應有關，隨著醋存放時間的增長，川芎嗪的含量會持續(xù)增加[3]。米醋主要有固態(tài)發(fā)酵和液態(tài)發(fā)酵兩種發(fā)酵方式，而液態(tài)發(fā)酵法周期較短(大約7d)，而固態(tài)發(fā)酵法生產周期比較長(大約30d)，更利于多種微生物及酶的參與，所發(fā)酵醋的風味口感更好[5]。因此，固態(tài)發(fā)酵的食醋更適宜作為中藥炮制的輔料。綜上，不同食醋中川芎嗪的含量不同，炮制輔料醋的發(fā)酵方法、存放時間等都可對川芎嗪的含量產生影響，可考慮將川芎嗪作為醋的質量控制指標，下一步可進行同一品種不同批次食醋間川芎嗪含量的穩(wěn)定性試驗。