酪蛋白檢測方法的分析與研究

分析與研究GB31638-2016 酪蛋白的檢測方法，以降低檢測成本和縮短檢測時(shí)間，提高工作效率。方法：對膜分離酪蛋白的檢測方法進(jìn)行了探討，依據(jù)對具體檢測步驟的剖析，溶解樣品采用旋渦振蕩儀、器皿選擇50 mL 錐形瓶和直徑為9 cm 濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約成本和提高檢測效率。結(jié)果：改變?nèi)芙鈽悠凡捎檬謸u操作方式、選擇合適器皿及濾紙等，此法涉及藥品種類少，檢測效率高，對于檢測收集沉淀量較小的樣品，有較高的優(yōu)勢。 結(jié)論：此法操作便捷，工作效率高，精密度好，在實(shí)際的檢測工作中，可以輔助使用。

酪蛋白[1]是一種含有磷鈣的結(jié)合蛋白，對酸敏感，pH 值較低時(shí)會沉淀，這種蛋白質(zhì)主要存在哺乳動物中，是哺乳動物的主要蛋白質(zhì)，可以降低蛋白質(zhì)的降解率以及氨基酸的氧化率，從而加大蛋白質(zhì)的身體吸收和利用率。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源，也是鈣和磷的來源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。因此市場中也有很多酪蛋白產(chǎn)品，比如酪蛋白磷酸鈦、酪蛋白鈣都是以酪蛋白為主要成分的營養(yǎng)品[2]，對人體的營養(yǎng)效果也是非常的好。不僅如此，鑒于這種緩釋特性，酪蛋白還會讓你有持續(xù)的飽腹感，這樣就是為什么健身減肥的人食用酪蛋白后減肥效果更加明顯。

酪蛋白是以乳和/或乳制品為原料,經(jīng)酸法或酶法或膜分離工藝制得的產(chǎn)品[3]，它是由α、β、κ 和r 及其亞型組成的混合物,對酸敏感，pH 值較低時(shí)會沉淀。以乳及乳制品為原料，經(jīng)脫脂、膜分離酪蛋白，再經(jīng)濃縮、殺菌、干燥等工藝制得的產(chǎn)品即為膜分離酪蛋白[4]。本文主要對膜分離酪蛋白的測定方法進(jìn)行研究。

由于每位實(shí)驗(yàn)操作者的理解認(rèn)知不同，在進(jìn)行GB31638-2016 酪蛋白測定時(shí)，檢測者無法快速檢測酪蛋白?；诖?，筆者綜述實(shí)驗(yàn)過程中的問題，探討更為方便的檢測新方法。通過對膜分離酪蛋白的具體檢測步驟的分析，溶解樣品采用旋渦振蕩儀和直徑為9cm 濾紙過濾沉淀等方法操作節(jié)約時(shí)間，提高檢測效率。

材料與方法

材料與儀器

材料與試劑

硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.05 mol/L）、氫氧化鈉溶液（400 g/L）、硼酸溶液（20 g/L） 、甲基紅乙醇溶液（（1 g/L））、溴甲酚綠乙醇溶液（（1 g/L））、乙酸鈉溶液（1 mol/L）、10%乙酸溶液

主要儀器設(shè)備

定氮儀：Kjeltec8100、電子天平：AL204、旋渦振蕩器

方法

稱取0.2 克試樣移入干燥的150mL 具塞錐形瓶中，加入8 mL 水混勻后置于65-67 ℃的水浴上使其完全溶解（每隔5 分鐘輕輕振搖一次，一般為10-15 分鐘）。冷卻后再加入乙酸溶液1 mL，混勻，靜置5 分鐘，再添加乙酸鈉溶液1 mL，混勻，靜置，使酪蛋白沉淀[5]，用干濾紙過濾。用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀，將濾紙連同沉淀物折疊，置于消化管內(nèi)進(jìn)行消化，余下步驟GB5009.5-2016 操作。

研究新方法的實(shí)驗(yàn)步驟與分析

樣品的溶解

酪蛋白難溶于水，常溫下不易被混勻。稱取0.2 克試樣（精確至0.001 克）移入干燥潔凈的50 mL 錐形瓶中，加入8 mL 水于漩渦振蕩振蕩器2000 轉(zhuǎn)/min 旋渦1 min左右封口后置于65-67 ℃的水浴鍋使其完全溶解（每隔1分鐘輕輕振搖一次，一般為2-3 分鐘）。

沉淀物的轉(zhuǎn)移

國標(biāo)檢測方法中步驟是用緩沖溶液少量多次反復(fù)洗滌錐形瓶及沉淀，將濾紙連同沉淀物折疊，置于消化管內(nèi)進(jìn)行消化。實(shí)際操作時(shí)需要大量時(shí)間沖洗沉淀物也很難處理干凈，經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)得到結(jié)論：借助外物轉(zhuǎn)移沉淀即為增加一根適中長度的玻璃棒作為輔助工具，能快速、徹底地轉(zhuǎn)移沉淀物。

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濾紙的選擇和硫酸的加入量控制

消化不完全是消化完畢顏色出現(xiàn)黑色的主要原因。 導(dǎo)致消化不完全的影響因素有：消化溫度低；消化時(shí)間不夠等。本次研究新方法主要針對在消化時(shí)間、消化溫度、硫酸鉀和硫酸銅用量等滿足要求的條件下，進(jìn)行濾紙的選用的解析。

濾紙大小對消化顏色的影響

濾紙的選擇國標(biāo)檢測方法中沒有具體要求，因此選擇較小且能達(dá)到過濾效果的濾紙能節(jié)省檢測藥品（硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸和硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液）的用量，同時(shí)能更有效地解決了因催化劑、濃硫酸等用量小造成消化完畢的樣品顏色發(fā)黑無法繼續(xù)檢測的問題。新方法選擇不同濾紙?jiān)谙牡牧蛩嵊昧恳欢ㄇ闆r下對消化完畢顏色的變化進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，顏色深淺量越低表示越接近正常（淺藍(lán)色）顏色，其中濾紙直徑為9cm 時(shí)是最佳選擇。

關(guān)鍵步驟檢測樣品時(shí)間

針對酪蛋白具體檢測時(shí)間分別依據(jù)國標(biāo)方法和本次研究的新方法各做了6 組數(shù)據(jù)（表1），其中新方法中混勻樣品時(shí)間、水浴時(shí)間溶解消耗、轉(zhuǎn)移沉淀消耗時(shí)間都明顯減少很多。

根據(jù)表1 可以看出：進(jìn)行消化前處理樣品消耗總時(shí)間新方法明顯低于國標(biāo)方法。

不同人員間對比

分別取3 個不同的酪蛋白樣品，不同檢測人員在同一檢測條件下，分別對不同樣品進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果的相對偏差均小于國標(biāo)要求偏差范圍（10%），人員間對比結(jié)果偏差較小，準(zhǔn)確性可靠。

重復(fù)性

取同一個樣品進(jìn)行檢測，重復(fù)性檢測次數(shù)為10 次，結(jié)果分別是：84.5 84.9 84.7 85.3 84.8 86.0 85.7 86.0 84.8 85.7（g/100g）相對偏差百分比分別是：0.08 0.04 0.06 0.010.05 0.09 0.06 0.09 0.05 0.06。精密度的檢測：取同一批次樣品結(jié)果，對酪蛋白進(jìn)行計(jì)算，精密度較高如（表1）。

結(jié)論

本文對膜法酪蛋白的檢測方法進(jìn)行了探討，依據(jù)對具體檢測步驟的分析，在明確清晰的操作過程中達(dá)到節(jié)省藥品、時(shí)間，為檢驗(yàn)者指明方向。此法涉及藥品種類少，檢測效率高，對于檢測收集沉淀量較小的樣品，有較高的優(yōu)勢。此法操作便捷，準(zhǔn)確度高，精密度好，在實(shí)際的檢測工作中，可以輔助使用。