豨薟草對(duì)腎性血管性高血壓降壓作用機(jī)制的研究

吳冬梅，潘開瑞

1.河南省中醫(yī)院，河南 鄭州 450002； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000

由腎血管或腎實(shí)質(zhì)性病變導(dǎo)致的高血壓稱為腎血管性高血壓，腎血管性高血壓是一種腎臟實(shí)質(zhì)性病變等多種原因引起的血壓升高的心血管疾病，屬于繼發(fā)性高血壓[1]。血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensinconverting enzyme inhibitors，ACEI)、血管緊張素受體拮抗劑(angiotensin receptor blocker，ARB)是目前治療腎性高血壓的主要藥物，然而對(duì)嚴(yán)重的雙腎動(dòng)脈狹窄及進(jìn)展性腎病患者則不能應(yīng)用此類藥物。因此，血壓的控制不良會(huì)加快腎病的進(jìn)程，使臨床的防控更為棘手[2-3]。豨薟草為菊科植物腺梗豨薟或毛梗豨薟的干燥地上部分，味辛、苦，性寒，具有祛風(fēng)濕、利關(guān)節(jié)、解毒、降壓之功效，臨床多用于風(fēng)濕痹痛、筋骨無(wú)力、半身不遂、風(fēng)疹濕瘡等癥，其化學(xué)成分主要為萜類及黃酮類[4]。研究證實(shí)[5-6]，豨薟草對(duì)心腦血管疾病有較好的防控作用，特別是腺梗豨薟草提取液能顯著舒張兔耳血管，阻斷神經(jīng)刺激引起的血管收縮，并可增加腦血流量，對(duì)機(jī)體的血壓有積極的調(diào)節(jié)作用[7-8]?；诖?，本研究采用豨薟草對(duì)腎血管性高血壓大鼠的降壓作用進(jìn)行研究，以揭示豨薟草降血壓作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物SPF級(jí)大鼠雄性60只，體質(zhì)量(200±20) g，購(gòu)自河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(豫)2017-0001，倫理批號(hào)：YFYDW2018028。溫度20～25℃，濕度40%～60%，自由進(jìn)食、飲水。

1.2 藥品與試劑豨薟草(張仲景大藥房，批號(hào)：20180915)；卡托普利片(山西津華暉星制藥有限公司，批號(hào)160522)。水合氯醛(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20161108)；醛固酮(aldosterone，ALD)、血管緊張素Ⅱ(angiotension Ⅱ，AngⅡ)、內(nèi)皮素(endothelin 1，ET-1)、一氧化氮(nitric oxide，NO)、降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)試劑盒(南京建成生物工程研究所，貨號(hào)分別為：H0272、H1446、H0933、A0121、H2173)。

1.3 儀器ALC-NIBP型無(wú)創(chuàng)鼠尾血壓計(jì)(上海奧爾特生物科技有限公司)；ZNHW型數(shù)顯調(diào)溫控溫電熱套(鄭州科文儀器有限公司)；HH-4型數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋(江蘇常州實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)。

2 方法

2.1 中藥制備豨薟草的制備：取300 g豨薟草，浸泡30 min后，加水煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液后減壓濃縮，濃縮至 3.2 g 生藥·mL-1。

2.2 腎性高血壓大鼠模型的復(fù)制采用兩腎一夾法復(fù)制腎血管性高血壓(renovascular hypertension，RHR)大鼠模型[9]。10%水合氯醛溶液對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉后，于大鼠左側(cè)腹部皮膚切口，分離左腎動(dòng)脈，并縫合結(jié)扎，縫合后腹腔注射青霉素鈉預(yù)防傷口感染，假手術(shù)組只打開切口，不進(jìn)行結(jié)扎手術(shù)操作。在術(shù)后的第4周，測(cè)定大鼠微動(dòng)脈收縮壓(systolic blood pressure，SBP)、舒張壓(diastolic blood pressure，DBP)，高于160 mmHg的大鼠視為腎性高血壓模型復(fù)制成功。50只大鼠均復(fù)制成功，未出現(xiàn)死亡。

2.3 分組及給藥將RHR模型成功的大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為5組，即模型組、卡托普利(25 mg·kg-1)組、豨薟草(高、中、低劑量)(64 g·kg-1、32 g·kg-1、16 g·kg-1)組，另設(shè)假手術(shù)組，各組連續(xù)給予相應(yīng)的藥物4周，假手術(shù)組和模型組給予等量的生理鹽水。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)

2.4.1 大鼠血壓測(cè)定采用尾動(dòng)脈無(wú)創(chuàng)測(cè)壓法，將大鼠置于37℃恒溫袋內(nèi)預(yù)熱10 min，使大鼠尾動(dòng)脈充分?jǐn)U張，按照測(cè)壓標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測(cè)定SBP、DBP，連續(xù)測(cè)定3次，取平均值作為最終數(shù)據(jù)分析。

2.4.2 測(cè)定大鼠血漿細(xì)胞因子大鼠麻醉后，迅速腹主動(dòng)脈取血，注入有EDTA的抗凝管中，低溫離心15 min，分離血漿后置于-80℃保存待測(cè)。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)RHR模型大鼠血壓的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠SBP和DBP明顯升高(P<0.05)，與RHR模型指標(biāo)趨勢(shì)一致，說明模型復(fù)制成功；與模型組相比，豨薟草高、中劑量組和卡托普利組均明顯降低大鼠SBP和DBP(P<0.05)。見表1。

表1 對(duì)RHR模型大鼠血壓的影響

3.2 對(duì)RHR模型大鼠血漿細(xì)胞因子水平的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血漿AngⅡ、ALD水平明顯升高(P<0.05)，CGRP水平明顯降低(P<0.05)，與RHR模型指標(biāo)趨勢(shì)一致，說明模型復(fù)制成功。與模型組相比，豨薟草高、中、低劑量組和卡托普利組均能明顯降低大鼠血漿 AngⅡ、ALD(P<0.05)，明顯升高CGRP水平(P<0.05)。見表2。

表2 對(duì)RHR模型大鼠血漿細(xì)胞因子水平的影響

3.3 對(duì)RHR模型大鼠NO、ET-1水平的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠NO水平明顯降低(P<0.05)，ET-1水平明顯升高(P<0.05)，與RHR模型指標(biāo)趨勢(shì)一致，說明模型復(fù)制成功。與模型組相比，豨薟草高、中、低劑量組和卡托普利組均能明顯升高NO水平(P<0.05)，降低ET-1水平(P<0.05)。見表3。

表3 對(duì)RHR大鼠NO、ET-1表達(dá)水平的影響

4 討論

RHR在臨床高血壓患者中更為常見，其發(fā)病機(jī)制與多種因素有關(guān)，由于腎臟血流供應(yīng)受阻，致使腎臟缺血代謝產(chǎn)物增加，各種化學(xué)產(chǎn)物可能刺激腎臟的化學(xué)感受器，并誘導(dǎo)其活性增強(qiáng)，進(jìn)而負(fù)反饋至腎素釋放血管活性因子，使動(dòng)脈收縮增加，血管阻力增加，誘發(fā)高血壓[10-11]。

本研究采用兩腎一夾法復(fù)制大鼠RHR模型，是目前繼發(fā)性高血壓常用的動(dòng)物模型，其造模簡(jiǎn)單、成功率高，且在造模的過程中采用雄性大鼠存活率較高。通過對(duì)大鼠左腎動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎，腎動(dòng)脈血流量驟減，進(jìn)而激活腎素-血管緊張素-醛固酮(rein-angiotensin-aldosterone-system，RAAS)體系，RAAS是機(jī)體調(diào)節(jié)血壓和體液容積的重要途徑，RAAS系統(tǒng)的激活導(dǎo)致肝臟產(chǎn)生血管緊張素原釋放到靜脈血中，并被腎素水解為血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)，在經(jīng)過ACE的轉(zhuǎn)化，將AngⅠ轉(zhuǎn)化為AngⅡ，AngⅡ是RAAS的主要生物活性物質(zhì)，而腎臟是AngⅡ的重要分泌器官和靶器官，AngⅡ水平增加可誘導(dǎo)小動(dòng)脈平滑肌收縮，外周血流阻力增加[12-13]，并調(diào)控高血壓引發(fā)左心室肥大及慢性腎臟疾病。與此同時(shí)，腎上腺皮質(zhì)誘導(dǎo)ALD分泌增加，促使腎小管遠(yuǎn)端集合管的鈉離子吸收增加，最終導(dǎo)致機(jī)體水鈉潴留，引發(fā)機(jī)體血壓升高[14]。卡托普利是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，可抑制ACE的活性，導(dǎo)致AngⅡ的轉(zhuǎn)化受阻，血液中AngⅡ水平下降，AngⅠ在體內(nèi)蓄積。ALD的分泌作用受AngⅡ的調(diào)節(jié)，AngⅡ水平下降致使ALD的含量降低[15-16]。

CGRP是一種含有37個(gè)氨基酸殘基的多肽，該多肽參與高血壓發(fā)生、發(fā)展的過程，且在該過程中呈現(xiàn)負(fù)調(diào)節(jié)作用。CGRP可舒張腎血管、降低腎血管外周阻力、對(duì)抗AngⅡ引起的血管收縮、水鈉潴留等，對(duì)腎臟有保護(hù)作用[17]。值得注意的是，CGRP在一般性血壓升高時(shí)，其表達(dá)程度并沒有明顯的波動(dòng)，當(dāng)出現(xiàn)高血壓波及腎損傷時(shí)，其水平可出現(xiàn)顯著性降低，表明CGRP與高血壓并腎臟損傷有顯著性關(guān)聯(lián)，即CGRP水平增加可誘導(dǎo)腎動(dòng)脈舒張、外周血管壁阻力下降，血壓下降[18-19]。

心血管系統(tǒng)的正常工作依賴于血管內(nèi)皮細(xì)胞的分泌功能，其中對(duì)血管內(nèi)皮功能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用關(guān)鍵因子就是ET和NO。NO是機(jī)體重要的舒血管物質(zhì)，而ET-1是強(qiáng)縮血管成分，兩者之間相互協(xié)調(diào)，共同維持血管基礎(chǔ)張力。血管內(nèi)皮細(xì)胞通過調(diào)節(jié)NO、ET等舒縮因子的表達(dá)水平，維持血管的舒縮功能[20-22]。臨床研究證實(shí)[23]，高血壓患者血清NO水平較正常人低，NO降低的同時(shí)，ET-1的水平呈現(xiàn)明顯的升高趨勢(shì)。因此，臨床研究中常用NO-ET的動(dòng)態(tài)平衡作為衡量機(jī)體血壓發(fā)展的重要指標(biāo)。

研究顯示，豨薟草各劑量組均能不同程度地降低RHR大鼠的SBP和DBP，其中高劑量組降壓強(qiáng)度更為明顯，中劑量組次之，低劑量組最弱，提示豨薟草各劑量組間呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系。豨薟草各劑量均能明顯改善大鼠血漿AngⅡ、ALD、CGRP、NO、ET-1水平，提示豨薟草能抑制AngⅡ的生成，減少ALD、ET-1的釋放，增加CGRP、NO水平，從多種途徑發(fā)揮降血壓作用。

綜上所述，豨薟草對(duì)RHR有較好的改善作用，其作用機(jī)制可能是通過抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，減少AngⅡ的生成，抑制腎素ALD、ET-1的釋放，增加CGRP、NO的表達(dá)，通過多種途徑發(fā)揮降血壓作用。