果梢斑螟高毒力白僵菌菌株的篩選

陳越渠，劉慶珍，王曉霞，王曉丹，韓 姣 ，宋麗文

( 1.吉林省林業(yè)科學(xué)研究院，吉林 長春 130033；2.吉林省林業(yè)勘察設(shè)計院，吉林 長春 130022；3.長春市綠園區(qū)林業(yè)水利管理服務(wù)站，吉林 長春 130000 )

隨著紅松Pinuskoraiensis人工林面積的增加和采摘紅松球果等人為活動干擾的加劇，原有的森林生態(tài)平衡被打破，致使紅松病蟲害頻繁發(fā)生，尤其是紅松球果及枝梢害蟲猖獗發(fā)生，造成了巨大損失[1,2]。紅松球果害蟲種類較多，一般在東北林區(qū)以梢斑螟屬Dioryctria類群為主，常以兩種甚至多種害蟲同域混合發(fā)生。在吉林省東部紅松分布區(qū)以果梢斑螟(Dioryctriapryeri)、冷杉梢斑螟(D.abietella)及球果小花尺蛾(Eupitheciagigantea)三種蛀果害蟲危害為主。因紅松樹體較高、害蟲幼蟲生活隱蔽、成蟲產(chǎn)卵分散、多種害蟲混合發(fā)生等諸多因素，導(dǎo)致常規(guī)防治方法難以達到理想防治效果。

球孢白僵菌(Beauveriabassiana) 是一種廣譜性的昆蟲病原真菌，能侵染鱗翅目Lepidoptera、鞘翅目Coleoptera、膜翅目Hymenoptera等 15 個目 149 個科700 多種昆蟲[3]。由于白僵菌對環(huán)境友好，對人、畜和作物無害，殺蟲譜廣且致病性強，是目前國內(nèi)外研究較多的生防真菌，已被廣泛應(yīng)用于農(nóng)林業(yè)害蟲的防治[4]。目前，有關(guān)紅松球果害蟲生物防治方面研究開展較少，為探索防治新方法，減少化學(xué)農(nóng)藥使用，項目組開展了對紅松球果害蟲具高毒力的白僵菌菌株篩選研究，為拓展球果害蟲防治新途徑提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試菌株

球孢白僵菌菌株為野外采集、分離、培養(yǎng)獲得，共10株(表1)。

表1 菌株編號與來源

1.1.2供試蟲源

果梢斑螟幼蟲采于吉林省露水河林業(yè)局。

1.1.3培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、蒸餾水1 000 mL。

1.2不同菌株對果梢斑螟的毒力測定

1.2.1半致死時間測定

用PDA培養(yǎng)基將供試菌株于25 ℃培養(yǎng)7 d，置顯微鏡下觀察，長出分生孢子后，用0.05 %吐溫-80配制成1×107個·mL-1懸浮液。取20 mL孢子懸浮液放在培養(yǎng)皿中。接種時，將果梢斑螟幼蟲在孢子懸液中浸漬5 s后取出，25 ℃單頭飼養(yǎng)。每組20頭果梢斑螟幼蟲，3次重復(fù)，以0.05 %吐溫-80為對照。每日記錄死亡蟲數(shù)，持續(xù)10 d，統(tǒng)計幼蟲死亡率與LT50。

1.2.2致死中濃度測定

1.2.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用Excel和SPSS 19.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1不同菌株對果梢斑螟幼蟲的半致死時間(LT50)

接種后第2 d起，處理組幼蟲出現(xiàn)不同程度的感病反應(yīng)，主要表現(xiàn)為食欲不振，活動力明顯減弱等特征，隨后部分幼蟲死亡、僵化(圖1)。菌株間的致病力差異顯著(表2)，菌株A3、J2對果梢斑螟幼蟲的致病力最高，10 d死亡率均為100 %，LT50無顯著差異。

表2 不同菌株對果梢斑螟幼蟲致死中時間比較

圖1 被球孢白僵菌感染的果梢斑螟幼蟲

2.2不同菌株對果梢斑螟幼蟲的致死中濃度(LC50)

各菌株間對果梢斑螟致死中濃度有顯著差異(表3)，其中菌株A3毒力最高，LC50為2.97×105個·mL-1。其次為菌株J2，LC50為4.18×105個·mL-1。

表3 不同菌株對果梢斑螟幼蟲的致死中濃度比較

3結(jié)論與討論

通過10株球孢白僵菌對果梢斑螟幼蟲致死中濃度和致死中時間的測定，獲得了A3和J2兩株高毒力球孢白僵菌菌株。其LT50分別為4.13 d和4.22 d，處理10 d的LC50分別為2.97×105個·mL-1和4.18×105個·mL-1，具有進一步研究開發(fā)價值。

針對農(nóng)林害蟲的白僵菌毒力測定研究較多，多數(shù)靶標蟲種可在實驗室內(nèi)飼養(yǎng)或野外大量采集獲得，通常會選取低齡幼蟲開展試驗。而目前尚無成熟的紅松球果害蟲繁育技術(shù)，無法獲取低齡幼蟲用于試驗。本試驗中，供試蟲體為即將進入越冬期老齡幼蟲，與低齡幼蟲相比，其致死中濃度或為更高、致死中時間更長。在林間，球果害蟲通常散產(chǎn)卵于球果表面，幼蟲孵化后很快鉆蛀球果內(nèi)，這段時間是應(yīng)用白僵菌防治的最佳時期，所以，這與實驗室內(nèi)測試的蟲齡或許差異很大，關(guān)于所篩選菌株的林間防治效果，還有待于探索研究。