熏洗劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

彭志婷 于開(kāi)紅

江蘇省徐州市中醫(yī)院藥劑科，江蘇 徐州 221009

中藥制劑大多為復(fù)方制劑，所含化學(xué)成分極為復(fù)雜，其中多種成分的準(zhǔn)確分析及含量測(cè)定問(wèn)題至今仍是國(guó)際難題[1]。目前多以某一、兩個(gè)已知的有效成分控制制劑的質(zhì)量，但此法不能全面控制制劑的質(zhì)量，也不能全面體現(xiàn)中醫(yī)的基本理論。目前我國(guó)對(duì)中藥制劑的色譜指紋圖譜研究已有許多報(bào)道。但對(duì)醫(yī)院制劑室來(lái)說(shuō)，用色譜指紋圖譜控制藥品質(zhì)量不易實(shí)施。而利用光譜法建立中藥指紋圖譜則較易推廣，且符合中醫(yī)學(xué)的基本理論。熏洗劑為我院制劑，具有活血止痛，消腫止痛，清熱解毒，促進(jìn)傷口愈合之功效。已在臨床應(yīng)用多年，療效顯著。但質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)仍不完善，為了保證臨床用藥安全、有效與質(zhì)量可控，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用UV光譜法、紫外一階導(dǎo)數(shù)光譜法和傅立葉變換紅外分光光度法對(duì)熏洗劑樣品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

經(jīng)典恒溫法預(yù)測(cè)藥物有效期需要在若干個(gè)較高溫度下測(cè)定各個(gè)溫度下的速度常數(shù)K，按Arrhenius指數(shù)規(guī)律推算室溫的速度常數(shù)K25，進(jìn)而計(jì)算室溫貯存期[2]。這種方法測(cè)定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，但操作繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。文獻(xiàn)[3-4]報(bào)道用初均速法預(yù)測(cè)藥物的有效期，以藥物分解初始階段的平均速度(Voi)的對(duì)數(shù)代替反應(yīng)的速度常數(shù)(K)的對(duì)數(shù)，對(duì)開(kāi)氏溫度的倒數(shù)進(jìn)行線性回歸，得到符合Arrhenius指數(shù)規(guī)律的直線方程，由此可計(jì)算反應(yīng)的活化能及室溫的貯存期。初均速法在實(shí)驗(yàn)中不用求速度常數(shù)(K)，不必知道反應(yīng)級(jí)數(shù)，且所等結(jié)果與經(jīng)典恒溫法有很好的相關(guān)性。故5批熏洗劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)采用初均速法,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 TU-1201紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)；Tensor27傅立葉變換紅外分光光度計(jì)(德國(guó)BRURER公司)；DK-S28型恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，pH-2C型精密pH計(jì)(上海雷磁儀器廠產(chǎn)品)，F(xiàn)A2004N電子天平(上海雷磁儀器廠)。

1.2 試藥與試劑 五批熏洗劑[熏洗劑(Ⅰ)批準(zhǔn)文號(hào)：蘇藥制字Z04001626；批號(hào)分別為：190105、190505、190725、191009、191212，以下分別簡(jiǎn)稱為：樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5]為我院制劑室產(chǎn)品。熏洗劑模擬樣品(自制)。95%乙醇(徐州市科翔化學(xué)試劑有限責(zé)任公司)，氯仿(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)均為分析純(AR)。

2 方法與結(jié)果

2.1 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.1.1 紫外光譜測(cè)定方法[5]分別將各批熏洗劑搖勻后，用移液管移取1 mL置10 mL容量瓶中，用95%的乙醇稀釋至刻度，搖勻后過(guò)濾。用移液管移取濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用95%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試溶液，于紫外分光光度計(jì)上進(jìn)行光譜掃描，測(cè)定紫外光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜。掃描條件為：設(shè)定帶寬為2.0 nm， 采樣間隔為0.5 nm，掃描范圍為200～400 nm，最大吸收度A值為0～3.0，中速掃描。并記錄吸收峰λ值與吸收度A值。5批樣品的紫外光譜數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。據(jù)此，確定供試品溶液吸收度的測(cè)定波長(zhǎng)為272 nm。

表1 5批熏洗劑劑及模擬樣品的紫外光譜及一階導(dǎo)數(shù)光譜數(shù)據(jù)

2.1.2 恒溫加速試驗(yàn)[4-7]取五批樣品(規(guī)格為每瓶200 mL)，分裝于10mL玻璃瓶中，封口，置恒溫水浴鍋中，按預(yù)先設(shè)定的溫度和時(shí)間(50、60、68、73、76、83 ℃,分別加熱12、11、10、9、8、7 h)進(jìn)行加速試驗(yàn)，定時(shí)取出樣品，放入冷水盆中迅速冷至室溫以終止反應(yīng)，將樣品藥液充分混合，按2.1.1項(xiàng)下的方法進(jìn)行紫外光譜掃描，并記錄吸收度A值。將數(shù)據(jù)輸入Excel工作表中，按公式Voi=(CO%- Ci%)/ti(i=1,2,3…n)計(jì)算不同溫度下樣品反應(yīng)的初始平均速度Voi(即反應(yīng)開(kāi)始階段單位時(shí)間的相對(duì)百分含量Ci%的變化)和lgVoi。其中A0為室溫下的吸收度，At為不同溫度下對(duì)應(yīng)時(shí)間恒溫加熱后樣品的吸收度值，Ci%=At/A0*100%，ti為與溫度相對(duì)應(yīng)的時(shí)間(h)。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 藥液加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2 紅外光譜測(cè)定[10]

2.2.1 紅外光譜鑒定原理 紅外光譜(FTIR)屬于分子吸收光譜。中藥制劑是多種成分的混合物，其紅外圖譜是中藥所含各成分吸收光譜的疊加，不論中藥內(nèi)存在的不同物質(zhì)是什么，必定在其紅外光譜上有所反映。只要中藥制劑中所含的化學(xué)成分不同，各成分含量的比例不同，就會(huì)導(dǎo)致紅外光譜圖的差異。憑借紅外光譜的這些差異特征(峰位、峰強(qiáng)度和峰形狀)，即“宏觀指紋性”，可以用來(lái)識(shí)別中藥的真?zhèn)?。這種識(shí)別方法和判別準(zhǔn)則稱為“紅外宏觀指紋法”。本實(shí)驗(yàn)對(duì)制劑樣品提取物直接壓片測(cè)定紅外光譜，并比較其差異而得到鑒定的目的。

表3 五批熏洗劑的有效期預(yù)測(cè)結(jié)果 (n=6)

2.2.2 紅外光譜的測(cè)定方法 分別取五批熏洗劑樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5及自制模擬樣品5 mL，于分液漏斗中用10 mL氯仿萃取，靜置，分離下層氯仿液并過(guò)濾得供試液。分別取供試液2 mL于瑪瑙乳缽中，用吹風(fēng)機(jī)吹盡溶劑，加KBr適量研細(xì)混勻后，用6～8 Ton的壓力壓成厚度為1～2 mm的薄片，于紅外光譜儀上測(cè)定紅外光譜。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1～6及表4。

圖1 樣品1的氯仿提取液的紅外光譜圖

圖2 樣品2的氯仿提取液的紅外光譜圖

圖3 樣品3的氯仿提取液的紅外光譜圖

圖4 樣品4的氯仿提取液的紅外光譜圖

圖5 樣品5的氯仿提取液的紅外光譜圖

圖6 模擬樣品的氯仿提取液的紅外光譜圖

表4 六份樣品的氯仿提取液的紅外光譜數(shù)據(jù)(Ware number cm-1)

2.3 檢查

2.3.1 相對(duì)密度測(cè)定[11]分別五批熏洗劑樣品及模擬樣品按《中國(guó)藥典》2015年版四部0601相對(duì)測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。

2. 3.2 pH值的測(cè)定 分別取五批熏洗劑樣品及模擬樣品制劑按《中國(guó)藥典》2015年版四部0631pH值測(cè)定法測(cè)定其pH，并隨機(jī)抽取恒溫加速實(shí)驗(yàn)后的兩批制劑(樣品2、樣品5)同上法測(cè)定其pH，考察恒溫加速對(duì)pH的影響，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 5批熏洗劑樣品及模擬樣品的相對(duì)密度和pH值測(cè)定結(jié)果

表6 樣品恒溫加速試驗(yàn)過(guò)程中pH值的變化

3 討論

3.1 熏洗劑穩(wěn)定性測(cè)試 經(jīng)典恒溫法實(shí)驗(yàn)需在每個(gè)溫度下多次取樣分析；而初均速法在每個(gè)加速溫度下僅需取樣作一次分析，就可得到平均速度，且取樣點(diǎn)在反應(yīng)初期，可排除反應(yīng)后期副反應(yīng)的干擾。由于增加了加速實(shí)驗(yàn)的溫度數(shù)，因此提高了按Arrhenius指數(shù)定律推算室溫有效期的精確度。但加速實(shí)驗(yàn)是在較高溫度下在短時(shí)間內(nèi)獲得反應(yīng)的規(guī)律，與室溫下的反應(yīng)機(jī)制可能有一定偏差，故必須用室溫留樣觀察法加以驗(yàn)證。

3.2 熏洗劑紫外法鑒定 憑借紫外光譜的峰、谷的差異特征(位置、強(qiáng)度、形狀)，即“宏觀指紋性”可分析六個(gè)樣品的質(zhì)量。以紫外光譜為基礎(chǔ)的導(dǎo)數(shù)光譜能校正無(wú)關(guān)吸收，排除樣品測(cè)定中干擾。從表2中的數(shù)據(jù)可以看出：樣品1～6在272 nm，255 nm附近均有兩個(gè)吸收峰，但1～6號(hào)樣品的最大吸光度值A(chǔ)max和最小吸光度值A(chǔ)min有一定差異。1～6號(hào)樣品在272 nm處的吸光度A值分別為：0.9401、1.0078、1.1417、1.1278、1.5123、1.2133。根據(jù)朗伯-比耳定律，Amax越大濃度C越大，有效成分含量愈高，它們的質(zhì)量可排列為：樣品5 > 6> 3> 4> 2> 1。

3.3 熏洗劑紅外法鑒定 從圖1～6中可看出，熏洗劑樣品1、2、3、4、5的紅外光譜的形狀基本相同，均在2922、2851、1688、1454、1326、1289、708cm-1附近有強(qiáng)吸收峰。模擬樣品6的圖譜形狀與樣品有明顯差異，其與五個(gè)樣品在2921、2851、1456、1328cm-1處共有吸收峰，但在1715、1269cm-1處的吸收峰位置與樣品差異較大。

3.4 其他質(zhì)量控制 五批制劑及模擬樣品的相對(duì)密度分別為：1.0600、1.0820、1.0701、1.0787、1.0755、1.0812?？膳帕袨椋?>6>4>5>3>1。與紫外光譜分析的結(jié)果有一定差異。這表明僅以相對(duì)密度作為質(zhì)量控制指標(biāo)準(zhǔn)確度不夠。pH測(cè)定結(jié)果表明，該制劑偏酸性，防腐劑在酸性條件下的抑菌效果會(huì)更好。但隨著制劑加熱時(shí)間的延長(zhǎng)，pH值有降低趨勢(shì)。

4 結(jié)論

研究結(jié)果表明，五批熏洗劑的室溫貯存期在1.74～2.90年。據(jù)此，確定該制劑的有效期為約2.0年。溫度對(duì)該制劑的吸收度A值和pH值均有較大影響，在制劑加熱提取藥材有效成分過(guò)程中應(yīng)考慮這些因素。傅立葉變換紅外光譜法能快速、準(zhǔn)確地鑒定該制劑，以紫外光譜吸收度A值作為內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更為有效地控制該熏洗劑的質(zhì)量，且方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)。