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    飼料中蛋白質(zhì)水平對澳洲淡水龍蝦生長、肉質(zhì)及免疫力的影響

    2021-05-12 09:14:56張寶龍曲木趙子續(xù)唐子鵬侯樹旺翟勝利
    生物化工 2021年2期
    關(guān)鍵詞:蛋白組龍蝦淡水

    張寶龍,曲木,趙子續(xù),唐子鵬,侯樹旺,翟勝利

    (天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司 天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點實驗室,天津 301800)

    澳洲淡水龍蝦(Cherax quadricarinatus)是一種原產(chǎn)于澳大利亞外形酷似龍蝦、個體較大的淡水養(yǎng)殖經(jīng)濟品種,因其營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)細(xì)膩滑脆、味道鮮美香甜、風(fēng)味獨特等優(yōu)勢成為目前世界上的名貴經(jīng)濟蝦種之一[1]。王廣軍等人[2]發(fā)現(xiàn)澳洲淡水龍蝦的出肉率及肌肉中所含的氨基酸及Ca、Fe等元素顯著高于克氏原螯蝦。目前,澳洲淡水龍蝦在我國的養(yǎng)殖范圍已經(jīng)逐步擴大,在其養(yǎng)殖成本中,飼料占據(jù)將近50%。飼料中適當(dāng)?shù)牡鞍缀繉λa(chǎn)動物可以起到一定的促進作用,盲目升高蛋白含量會造成飼料成本的上升,對養(yǎng)殖動物的生長起抑制作用,同時也會加大養(yǎng)殖水體的環(huán)境負(fù)擔(dān);而飼料蛋白質(zhì)含量過低,會使水產(chǎn)動物生長緩慢、抗病力差,進而延誤生產(chǎn)時機[3]。因此,確定澳洲淡水龍蝦飼料中適宜的蛋白水平對研制低成本、高營養(yǎng)澳洲淡水龍蝦飼料具有一定的參考意義。

    1 材料與方法

    1.1 試劑與儀器

    本試驗所用指標(biāo)測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

    GZX-9070MBE電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱,上海博迅實業(yè)有限公司;HH-2水浴鍋,上海力辰儀器科技有限公司;HKL-220環(huán)模顆粒機,滕州三濃機械廠;JP-020超聲波清洗器,深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司;JW-3021HR低溫高速離心機,安徽嘉文儀器裝備有限公司;WH-2微型旋渦混合儀,上海滬西分析儀器廠有限公司;FSH-2A可調(diào)高速均質(zhì)機,青島致仕工業(yè)技術(shù)有限公司;UV-1800紫外分光光度計,翱藝儀器(上海)有限公司;BSM電子分析天平,上海卓精電子科技有限公司;SKY全波長酶標(biāo)儀,Thermo。

    1.2 飼料配方

    以全蝦粉10.00%、豆粕23.00%、啤酒酵母4.00%、花生粕8.00%、豆油1.50%、魚油1.50%、大豆卵磷脂0.50%、膽固醇0.50%、膨潤土1.00%、乳酸鈣2.00%、粘合劑0.50%、氯化膽堿0.50%、1.00%蝦用預(yù)混料1.00%、4.00%蝦用預(yù)混料4.00%為不變量,通過改變魚粉、面粉、苜蓿草粉、細(xì)麩皮、米糠的含量來配置蛋白含量(CP%)分別為29.48%、30.50%、32.61%、34.64%、36.70%、38.75%、40.80%的飼料配方(表1),用制粒機制成配合飼料,在陰涼干燥處風(fēng)干后,測定其營養(yǎng)成分。

    表1 不同蛋白含量的飼料配方及飼料營養(yǎng)成分

    1.3 試驗材料與養(yǎng)殖管理

    試驗所用蝦購自蘇州傲龍生態(tài)水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司,每個處理3個平行,每個平行放置70尾蝦,試驗蝦養(yǎng)殖于水泥池中(水泥池面積2 m×2 m)。試驗初期,稱其總重,選擇20尾蝦測定其腹長、全長、體長、體寬、體重、螯足長等指標(biāo)。每天記錄投喂量用于生長指標(biāo)計算。每隔3 d測定1次水質(zhì),養(yǎng)殖過程中水體氨氮含量≤0.1 mg/L,亞硝酸鹽含量≤0.2 mg/L,溶解氧含量為10 mg/L,pH為8.4,總硬度為120 mg/L。

    1.4 指標(biāo)測定

    1.4.1 樣品采集

    養(yǎng)殖試驗結(jié)束后,每個池子分別取15尾蝦,取其血漿,保存于2 mL離心管中,之后取其肝胰臟、肌肉組織,將組織(g)、0.85%生理鹽水(mL)按1∶4的比例用勻漿機(FSH-2A)勻漿,之后在4 ℃、4 000 r/min條件下離心15 min,然后取上清制成20%勻漿液,保存于-20 ℃冰箱中待測。

    1.4.2 指標(biāo)測定

    1.4.2.1 生長指標(biāo)測定

    分別于養(yǎng)殖初始和養(yǎng)殖56 d用數(shù)顯游標(biāo)卡尺和直尺測定龍蝦的腹長、全長、體長、體寬及螯足長,并根據(jù)公式(1)~(4)計算增重率(WGR)、特定生長率(SGR)、餌料系數(shù)(FCR)以及蛋白質(zhì)效率(PER)。

    式(1)~(4)中,Wt為最終體重,g;W0為初始體重,g;t為試驗天數(shù),d;F為飼料攝入量干重,g;CP為飼料粗蛋白質(zhì)含量,%。

    1.4.2.2 肉質(zhì)測定

    (1)肌肉滴水損失率測定

    取澳洲淡水龍蝦肌肉,干紗布擦干表面水分,稱重記錄,放于10 mL離心管中,離心管底部放有適當(dāng)?shù)奈?,? ℃、4 000 r/min條件下離心20 min后取出,擦干背肌表面水分,稱重記錄,并根據(jù)公式(5)計算滴水損失率(DL)。

    (2)肌肉蒸煮損失率測定

    取澳洲淡水龍蝦肌肉,干紗布擦干表面水分,稱重記錄,裝入密封袋中,放入70 ℃的恒溫水浴鍋中蒸煮15 min,取出冷卻至室溫,擦干背部肌肉表面水分,稱重記錄,根據(jù)公式(6)計算蒸煮損失率(CL)。

    (3)水分

    剪取澳洲淡水龍蝦肌肉1 g左右,用吸水紙吸干表面水分,將肌肉放入水分皿中,于60 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重,根據(jù)公式(7)計算水分含量。

    式(7)中,M1為烘干前水分皿及肌肉總質(zhì)量,g;M2為烘干后水分皿及肌肉總質(zhì)量,g;M0:水分皿質(zhì)量,g。

    (4)總氨基酸含量測定

    肌肉總氨基酸含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

    1.4.2.3 免疫指標(biāo)測定

    養(yǎng)殖試驗結(jié)束后,測定澳洲淡水龍蝦血漿及組織中酸性磷酸酶(Acid Phosphatase,ACP)、過氧化氫酶(Catalase,CAT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic Oxalacetic Transaminase,GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic-Pyruvic Transaminase,GPT)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathion Peroxidase,GSH-PX)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(Glutathione S-Transferase,GSHST)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的酶活以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)。血漿室溫融化后直接測定,組織根據(jù)試劑盒需要在20%勻漿液基礎(chǔ)上進行稀釋。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 飼料蛋白水平對生長性能的影響

    由表2可知,澳洲淡水龍蝦的增重率及特定生長率在飼料蛋白質(zhì)含量為34.64%時最高且顯著高于其他各組(P<0.05);蛋白質(zhì)效率隨飼料蛋白質(zhì)水平的提高呈先上升后下降的趨勢,最大值仍出現(xiàn)在34.64%水平組,與29.48%、32.61%兩組差異不顯著(P>0.05);餌料系數(shù)變化趨勢與其他生長指標(biāo)相反,呈先下降后上升趨勢,最低值出現(xiàn)在34.64%水平組,與29.48%、32.61%、40.80%三組無顯著差異(P>0.05)。

    表2 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦生長性能的影響

    由表3可知,不同飼料蛋白質(zhì)水平下,澳洲淡水龍蝦的體長及腰寬無顯著變化(P>0.05);全長、螯長最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組,分別顯著高于30.50%、38.75%蛋白組(P<0.05),但與其他各組無顯著差異(P>0.05);腹長最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組,顯著高于30.50%、38.75%蛋白組(P<0.05);澳洲淡水龍蝦體重在飼料蛋白含量為34.64%時最高,且顯著高于其他蛋白組(P<0.05)。

    表3 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦形體指標(biāo)的影響

    2.2 飼料蛋白水平對肌肉成分及出肉率的影響

    由下表知:飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦肌肉蒸煮損失率無顯著影響(P>0.05),最低值出現(xiàn)在34.64%蛋白組,且在同組,肌肉滴水損失率也達到最低,顯著低于29.48%蛋白組(P<0.05)。肌肉水分在34.64%蛋白組最低,與30.50%、36.70%、38.75%蛋白組差異不顯著(P>0.05),但顯著低于其他組(P<0.05);出肉率及肌肉中總氨基酸含量最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組,與32.61%蛋白組沒有顯著差異(P>0.05)。

    表4 飼料蛋白水平對淡水澳洲龍蝦肉質(zhì)及出肉率的影響

    2.3 飼料蛋白水平對組織和血漿中免疫力的影響

    2.3.1 ACP活性

    由表5可知,澳洲淡水龍蝦組織及血漿中ACP活性最小值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組與29.48%、30.50%、32.61%蛋白組無顯著差異(P>0.05),但顯著低于其他組(P<0.05);肝臟中34.64%蛋白組顯著低于其他各組(P<0.05);血漿中34.64%蛋白組與29.48%、32.61%蛋白組差異不顯著(P>0.05)。

    表5 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中ACP活性的影響

    2.3.2 CAT活性

    由表6可知,澳洲淡水龍蝦組織及血漿中CAT活性隨飼料蛋白質(zhì)含量的上升呈先升高再降低趨勢,最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組與32.61%蛋白組差異不顯著(P>0.05),但顯著高于其他組(P<0.05);肝臟、血漿中34.64%蛋白組顯著高于其他組(P<0.05)。

    表6 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中CAT活性的影響

    2.3.3 GOT、GPT活性

    由表7可知,澳洲淡水龍蝦組織及血漿中GOT、GPT活性最小值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肝臟中34.64%蛋白組GOT、GPT活性均顯著低于36.70%、38.75%蛋白組(P<0.05),但與其他組無顯著差異(P>0.05)。血漿中34.64%蛋白組GOT活性與29.48%、30.50%、32.61%蛋白組差異不顯著(P>0.05),GPT活性與29.48%、36.70%、38.75%蛋白質(zhì)組無顯著差異(P>0.05),但顯著低于其他各組(P<0.05)。

    表7 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GOT、GPT活性的影響

    2.3.4 GSH-PX活性

    由表8可知,34.64%蛋白組澳洲淡水龍蝦肌肉及肝臟中GSH-PX與32.61%蛋白組差異不顯著(P>0.05);血漿中34.64%蛋白組與32.61%、29.48%蛋白組差異不顯著(P>0.05),但顯著高于其他組(P<0.05)。

    表8 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-PX活性的影響

    2.3.5 GSH-ST活性

    由表9可知,澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-ST最大值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉及肝臟中34.64%蛋白組與36.70%蛋白組差異不顯著(P>0.05),但顯著高于其他組(P<0.05)。飼料蛋白水平的變化對血漿中GSH-ST活性無顯著影響(P>0.05)。

    表9 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中GSH-ST活性的影響

    2.3.6 MDA含量

    由表10可知,澳洲淡水龍蝦組織和血漿中MDA最小值出現(xiàn)在34.64%蛋白組。肌肉中34.64%蛋白組顯著低于其他組(P<0.05)。肝臟中34.64%蛋白組與32.61%蛋白組差異不顯著(P>0.05),但顯著低于其他組(P<0.05)。血漿中34.64%蛋白組顯著低于其他組(P<0.05)。

    表10 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中MDA含量的影響

    2.3.7 SOD活性

    由表11可知,澳洲淡水龍蝦肌肉中34.64%蛋白組SOD活性顯著高于其他各組(P<0.05);肝臟中34.64%蛋白組與29.48%、32.61%蛋白組無顯著差異(P>0.05);血漿中34.64%蛋白組顯著高于36.70%、38.75%組(P<0.05),與其他飼料組差異不顯著(P>0.05)。

    表11 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中SOD活性的影響

    2.3.8 T-AOC含量

    由表12可知,澳洲淡水龍蝦肌肉、肝臟及血漿中T-AOC最大值均出現(xiàn)在34.64%蛋白組,32.61%蛋白組無顯著差異(P>0.05),但顯著高于其他飼料組組(P<0.05)。

    表12 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦組織和血漿中T-AOC的影響

    2.4 討論

    2.4.1 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦生長性能的影響

    生長性能是衡量經(jīng)濟水產(chǎn)動物可獲得價值的重要指標(biāo),本試驗測定了澳洲淡水龍蝦生長指標(biāo)及體長、體寬等形體指標(biāo),發(fā)現(xiàn)飼料蛋白水平會顯著影響其生長,當(dāng)?shù)鞍缀繛?4.64%時生長指標(biāo)達到最佳,這與張佳潤等人[4]和姜松等人[5]對斑節(jié)對蝦及茍妮娜等人[6]對淡水養(yǎng)殖凡納濱對蝦的研究結(jié)果一致。劉永濤等[7]研究發(fā)現(xiàn)在稻田養(yǎng)蝦模式下用添加復(fù)方黃芪多糖蛋白質(zhì)含量≥26%的飼料投喂克氏原螯蝦可得到較好的促生長效果。盧耀鵬等[8]研究發(fā)現(xiàn)紅螯螯蝦幼蝦飼料最適宜的蛋白質(zhì)水平為36.98%。索帥等[9]研究發(fā)現(xiàn)脊尾白蝦飼料蛋白水平為39%、脂肪水平為5%時相對增重率較高,且餌料系數(shù)最低,這與本試驗結(jié)果略有不同,可能是因為蝦的規(guī)格不同導(dǎo)致,幼蝦時期需要較高的蛋白含量來供給自身營養(yǎng)需求,但飼料蛋白水平的升高會提升蝦的生長性能這點結(jié)論是一致的。

    2.4.2 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦肉質(zhì)的影響

    滴水損失率、蒸煮損失率及總氨基酸含量是衡量可食動物肉質(zhì)是否鮮嫩、風(fēng)味好壞的重要指標(biāo),出肉率可用來衡量其經(jīng)濟價值。凌俊等[10]認(rèn)為飼料的蛋白水平對克氏原螯蝦的出肉率沒有顯著性影響,倪靜靜等[11]比較了不同的飼料對克氏原螯蝦肉質(zhì)的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同的飼料對其出肉率和滴水損失率有顯著影響,但對蒸煮損失率沒有顯著影響。本試驗結(jié)果表明,飼料蛋白含量為34.64%時澳洲淡水龍蝦的蒸煮損失率、滴水損失率和肌肉水分顯著降低,出肉率最高,這與吳東等[12]研究結(jié)果相似。

    2.4.3 飼料蛋白水平對澳洲淡水龍蝦免疫力的影響

    本試驗測定了澳洲淡水龍蝦SOD、CAT、MDA、T-AOC、GOT、GPT、ACP、GSH-PX、GSH-ST 九個免疫相關(guān)指標(biāo),結(jié)果表明飼料蛋白水平在34.64%時各組織及血漿中SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX、GSH-ST活性顯著升高,而MDA含量及GOT、GPT、ACP活性有所降低。范陳偉等[13]對脊尾白蝦的研究結(jié)果表明,在水泥池養(yǎng)殖條件下飼喂34%蛋白水平飼料的白蝦GOT活力最低而SOD的活力顯著升高,范斌[14]研究發(fā)現(xiàn)日本沼蝦的SOD、CAT活性隨所投喂的飼料蛋白含量的升高而上升,最適蛋白水平為48%。這與本研究結(jié)果基本相同,但目前針對飼料蛋白水平對蝦類免疫力影響的研究較少,其更多作用機理仍需進一步研究。

    3 結(jié)論

    綜合澳洲淡水龍蝦生長、肉質(zhì)及免疫相關(guān)指標(biāo),水泥池養(yǎng)殖澳洲淡水龍蝦(養(yǎng)殖密度為17.5尾/m2)時,飼料中最適宜的蛋白水平為34.64%。

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