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    褐家鼠RnBMP4蛋白的生物信息學(xué)分析

    2021-05-12 09:14:54董世鵬樸忠萬(wàn)金志民張雋晟
    生物化工 2021年2期
    關(guān)鍵詞:信號(hào)肽結(jié)構(gòu)域位點(diǎn)

    董世鵬,樸忠萬(wàn),金志民,張雋晟

    (牡丹江師范學(xué)院,黑龍江牡丹江 157012)

    褐家鼠分布范圍廣、繁殖能力強(qiáng)、破壞力大、疫病傳染率高,已成為危害性最大的鼠種之一[1]。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins,BMPs)是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β超家族中最大的亞族,由Urist等研究人員首次于1965年從脫鈣骨基質(zhì)中分離得到[2]。研究表明,BMPs在大部分脊椎動(dòng)物組織中均有不同程度的表達(dá),其主要誘導(dǎo)胚胎發(fā)育過(guò)程中成骨及軟骨的形成和修復(fù),在神經(jīng)組織、眼組織、泌尿、臟器等器官中起到定性、重塑的作用[3-5]。BMP4是BMPs家族中的一員,具有BMPs保守結(jié)構(gòu),研究人員發(fā)現(xiàn)BMP4參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分化及凋亡,并在形成配子方面起著重要作用[6-7],在小鼠中發(fā)現(xiàn)的BMP4可以促進(jìn)其卵泡的形成及轉(zhuǎn)化[8]。本試驗(yàn)以褐家鼠尾上表皮轉(zhuǎn)錄組為參考,篩選到RnBMP4基因的cDNA序列,利用生物信息學(xué)方法對(duì)RnBMP4蛋白的理化性質(zhì)、跨膜結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)及同源性等方面進(jìn)行分析,為研究鼠類RnBMP4功能提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 基因序列的獲取

    褐家鼠RnBMP4的cDNA序列從褐家鼠尾部皮膚轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中獲得。以下16種動(dòng)物RnBMP4氨基酸序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得:屋頂鼠(Rattus rattus,XP_032773996.1)、小家鼠(Mus musculus,AAC37698.1)、錫金小鼠(Mus pahari,XP_021059014.1)、卡氏小鼠(Mus caroli,XP_021037499.1)、非洲樹(shù)線鼠(Grammomys surdaster,XP_028614463.1)、白鼻乳鼠(Mastomys coucha,XP_031218030.1)、尼羅壟鼠(Arvicanthis niloticus,XP_034355193.1)、草原田鼠(Microtus ochrogaster,XP_026639058.1)、南蝗鼠(Onychomys torridus,XP_036055299.1)、亞洲水牛(Bubalus bubalis,NP_001277806.1)、白尾鹿(Odocoileus virginianus texanus,XP_020743815.1)、野牦牛(Bos mutus,XP_014335672.1)、以色列鼴鼠(Nannospalax galili,XP_008837774.1)、綿羊(Ovis aries,NP_001103747.1)、中國(guó)地鼠(Cricetulus griseus,XP_035309221.1)、蒼白矛吻蝠(Phyllostomus discolor,XP_028361956.1)。

    1.2 分析方法

    褐家鼠RnBMP4蛋白的生物信息學(xué)分析內(nèi)容和使用的軟件及網(wǎng)站如表1所示。

    表1 RnBMP4蛋白的生物信息學(xué)分析方法

    2 結(jié)果與分析

    2.1 RnBMP4理化性質(zhì)分析

    利用ProtParam軟件對(duì)褐家鼠RnBMP4氨基酸序列進(jìn)行理化分析,結(jié)果如圖1所示。RnBMP4基因cDNA共編碼408個(gè)氨基酸,分子量46 529.72 D,理論等電點(diǎn)為8.57,該蛋白中含量最多的為亮氨酸,占比9.3%;含量最少的為色氨酸,占比為1.5%(圖1a)。分子式為C2046H3203N615O598S17,負(fù)電荷殘基總數(shù)為45,正電荷殘基總數(shù)為49,總原子數(shù)6 479,不穩(wěn)定指數(shù)為61.40,屬于不穩(wěn)定蛋白質(zhì),脂肪系數(shù)為76.67。ProtScale軟件分析,最大值為2.978,最小值為-3.556(圖1b),故該蛋白為親水蛋白。

    圖1 RnBMP4氨基酸組成和親水性/疏水性分析

    2.2 RnBMP4信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)

    RnBMP4蛋白信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果如圖2所示。使用SignalP-4.1預(yù)測(cè)RnBMP4蛋白含有信號(hào)肽,位點(diǎn)在第23個(gè)氨基酸處(圖2a),但是該蛋白不存在跨膜結(jié)構(gòu)(圖2b)。

    圖2 RnBMP4蛋白信號(hào)肽和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

    2.3 RnBMP4結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)

    蛋白保守序列分析如圖3所示,RnBMP4含有TGFb前肽超家族(ID:cd19391),其第41~276氨基酸之間為TGFb-propeptide的保守結(jié)構(gòu)域;同時(shí),還是BMP4超家族(ID:pfam00688),在302~408氨基酸之間,含有BMP4保守結(jié)構(gòu)域。

    圖3 蛋白保守序列分析

    2.4 RnBMP4二級(jí)、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

    利用SOPMA對(duì)RnBMP4的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,結(jié)果如圖4a所示。該蛋白22.30%可能會(huì)形成螺旋(Helix),18.63%可能形成延伸鏈(Strand),1.96%可能形成轉(zhuǎn)角(Turn),57.11%為無(wú)規(guī)卷曲(Random coil),無(wú)二硫鍵的形成,沒(méi)有特殊的二級(jí)結(jié)構(gòu)。用SWISS-MODEL對(duì)RnBMP4蛋白進(jìn)行三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè),結(jié)果如圖4b所示:在第41~408氨基酸之間含有功能保守結(jié)構(gòu)域。

    圖4 RnBMP4蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

    2.5 蛋白質(zhì)修飾位點(diǎn)的預(yù)測(cè)

    通過(guò)Predict Protein預(yù)測(cè)分析:RnBMP4含有4個(gè)糖基化位點(diǎn)、5個(gè)酪蛋白磷酸激酶Ⅱ磷酸化位點(diǎn)、1個(gè)cAMP和cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)、5個(gè)蛋白激酶C磷酸化位點(diǎn)。

    2.6 氨基酸序列同源性對(duì)比

    在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中分別下載16種動(dòng)物的BMP4序列,與褐家鼠RnBMP4氨基酸序列進(jìn)行同源性分析,結(jié)果如圖5所示:褐家鼠RnBMP4與屋頂鼠(Rattus rattus)及錫金小鼠(Mus pahari)親緣關(guān)系較近,而與其他動(dòng)物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

    圖5 RnBMP4系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果

    3 結(jié)論

    骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins,BMPs)作為動(dòng)物組織中重要的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子,其廣泛存在于動(dòng)物體中,在早期胚胎發(fā)育至成年期均有不同程度的表達(dá)[9]。本研究從褐家鼠尾部皮膚轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中獲得并篩選出其序列信息,結(jié)果表明:RnBMP4蛋白共編碼408個(gè)氨基酸,該蛋白中含量最多的為亮氨酸,屬于不穩(wěn)定親水蛋白;含有信號(hào)肽但無(wú)跨膜結(jié)構(gòu),分別含有TGFb前肽超家族(ID:cd19391)及BMP4超家族(ID:pfam00688)的保守結(jié)構(gòu)域;二級(jí)結(jié)構(gòu)以無(wú)規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)為主;經(jīng)MAGA5.1分析,褐家鼠RnBMP4與屋頂鼠及錫金小鼠親緣關(guān)系較近,以上結(jié)果為進(jìn)一步研究褐家鼠RnBMP4基因功能提供了一定的理論基礎(chǔ)。

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