ACE基因多態(tài)性和高血壓合并腦出血的關(guān)系探討

胡東偉 林 芬

1.廣東省潮州市人民醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東潮州 521000；2.廣東省潮州市中心醫(yī)院，廣東潮州 521000

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）是一種廣泛分布于循環(huán)系統(tǒng)的限速酶，屬于腎素-血管緊張素系統(tǒng)[1]。ACE 可通過(guò)對(duì)血管緊張素Ⅰ的促進(jìn)作用使其轉(zhuǎn)化為血管緊張素Ⅱ，從而由無(wú)活性向高度血管吸收活性轉(zhuǎn)變，最終實(shí)現(xiàn)促進(jìn)醛固酮分泌的目的[2-3]。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)[4-7]報(bào)道多圍繞ACE 基因（I/D）多態(tài)性與高血壓、左心室肥厚、心肌梗死、擴(kuò)張型心肌病等心血管疾病的發(fā)生密切相關(guān)，在腦血管方面可參考研究并不多見(jiàn)。腦出血是一種由遺傳因素、環(huán)境因素等多因素相互作用與影響而引發(fā)的復(fù)雜疾病，黃燕等[8]研究指出，ACE 基因的DD 基因型和D 等位基因可提高腦血管病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，且為自發(fā)性腦出血的危險(xiǎn)因素。但目前對(duì)于非自發(fā)性腦出血患者ACE 基因多態(tài)性的研究極少報(bào)道?；诖?，本研究旨在ACE 基因多態(tài)性和高血壓合并腦出血的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年7 月至2020 年7 月廣東省潮州市人民醫(yī)院（我院）收治的35 例高血壓合并腦出血患者及35 例健康體檢者作為研究對(duì)象，全部為漢族。高血壓合并腦出血組的納入標(biāo)準(zhǔn)：既往均有高血壓病史且本次體檢血壓≥140/90 mmHg，經(jīng)顱腦CT 和神經(jīng)系統(tǒng)檢查均確診為腦實(shí)質(zhì)出血。兩組排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重心、腎、肝功能不全患者及存在認(rèn)知障礙或精神病史患者。全部受檢者均自愿參與并本人或家屬簽署知情同意。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 DNA 提取 于清晨?jī)山M受檢者空腹?fàn)顟B(tài)下，采集患者EDTA-K2 抗凝血5 ml，選用深圳亞能生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒，按試劑盒的操作步驟提取基因組DNA，所提DNA 于-20℃保存。

1.2.2 PCR 擴(kuò)增體系 包括[上游（5’-CTGGAG ACCACTCC CATCCTTTCT-3’）、下游（5’-GATGTGG CCATCACATTCGTCAGAT-3’）各1 μl，均由杭州博日公司提供的Life Express 96 孔PCR 儀基因擴(kuò)增儀合成引物]、北京艾德萊生物科技有限公司提供的TaqDNA 聚合酶、dNTP 混合物2 μl、Buffer 2.5 μl×模板DNA1 μl。首先5 min 95 ℃預(yù)變性后1 min 95 ℃按照變性、隨后退火至65 ℃保持1 min、最后升至72 ℃保延長(zhǎng)90 s，根據(jù)上述順序進(jìn)行35 個(gè)周期的循環(huán)后，終末延伸72 ℃5 min。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 一般資料 采用問(wèn)卷調(diào)查方式結(jié)合病歷資料記錄，統(tǒng)計(jì)兩組患者年齡、性別、吸煙史、飲酒史、體重指數(shù)（body mass index，BMI）并比較。

1.3.2 判讀基因型 取上述PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物在125 v電壓下行2%瓊脂糖電泳40 min（DYY-6C 型雙穩(wěn)定時(shí)電泳儀，北京六一生物科技有限公司），研究者于紫外燈下攝片并觀察，若存在且僅存在1 條490bp 的電泳帶標(biāo)記為Ⅱ基因型，若存在且僅存在1 條190bp 的電泳帶則標(biāo)記為DD 基因型，若上述電泳帶均存在且同時(shí)出現(xiàn)標(biāo)記為ID基因型，如圖1。統(tǒng)計(jì)各基因型出現(xiàn)頻率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 23.0 軟件處理全部數(shù)據(jù)，用（）表示符合正態(tài)分布的計(jì)量平均數(shù)資料并行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用頻率表示并行χ2檢驗(yàn)，采用平衡定律檢驗(yàn)基因型分布，單因素P＜0.05 的項(xiàng)目行多因素Logistics回歸分析，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 ACE 基因I/D 多態(tài)性結(jié)果

2 結(jié)果

2.1 兩組各項(xiàng)資料單因素分析

高血壓合并腦出血組患者與健康體檢患者性別構(gòu)成、飲酒史差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；年齡＞65 歲、吸煙史、BMI 組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

2.2 兩組ACE基因頻率比較

兩組ID、Ⅱ基因型頻率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但高血壓合并腦出血患組DD 基因型頻率和D 等位基因頻率明顯高于健康體檢者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 多因素Logistics回歸分析

將單因素分析中差異顯著的項(xiàng)目和等位基因頻率分別賦值進(jìn)行二分類多因素Logistics回歸分析，結(jié)果顯示：攜帶ACE 基因D 等位基因BMI、年齡＞65 歲、吸煙史是高血壓合并腦出血的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05），見(jiàn)表3 ～4。

表2 各組ACE基因多態(tài)頻率比較[n（%）]

表3 相關(guān)變量賦值表

表4 多因素Logistics回歸分析

3 討論

腦血管病是一種多因素、多基因疾病，其遺傳因素研究的重視程度正隨分子生物學(xué)發(fā)展不斷提高。蒙蘭青等[9]發(fā)現(xiàn)，雖然D 等位基因和高血壓的發(fā)生率無(wú)顯著相關(guān)性，但在高血壓合并缺血性腦血管病患者中D 等位基因頻率顯著增高，故其認(rèn)為D等位基因和高血壓患者并發(fā)腦血管病息息相關(guān)，并可能是腦血管病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。歐陽(yáng)嶸等[10]檢測(cè)62 例健康對(duì)照者、78 例原發(fā)性高血壓患者和114 例高血壓性腦出血患者的ACE 基因I/D 多態(tài)性，結(jié)果顯示最后一組D 等位基因和DD 基因型頻率相較于另外更高，提出ACE 基因DD 基因型可能為中國(guó)漢族人群腦血管疾病的遺傳標(biāo)志，且攜帶D 基因型的高血壓患者腦出血易感性更高。但也存在持有否定意見(jiàn)的研究，任慶平等[11]以高原地區(qū)藏族人民為對(duì)象探討ACE 基因多態(tài)性與腦出血間關(guān)系，并得出二者之間并無(wú)相關(guān)性的結(jié)論。

本研究以35 例健康體檢者為對(duì)照，對(duì)35 例高血壓合并腦出血患者進(jìn)行ACE 基因I/D 多態(tài)性檢測(cè)，從以往文獻(xiàn)[12]中可總結(jié)，高血壓與ACE 基因I/D 多態(tài)性間相關(guān)性并不確定，但諸多研究[13-14]提出，有腦卒中家族史的高血壓患者與ACE 基因I/D多態(tài)性呈顯著相關(guān)，提示此方面值得進(jìn)一步研究。值得注意的是，本研究高血壓合并腦出血組患者雖和健康對(duì)照組比較差異不明顯，但結(jié)果可見(jiàn)前者D等位基因和DD 基因型頻率明顯較高（P＜0.05）。但可能受本研究樣本量較少影響，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)具備意義但并不非常顯著，故未來(lái)可增加樣本數(shù)量繼續(xù)深入研究。

Das 等[15]研究發(fā)現(xiàn)ACE 基因I/D 多態(tài)性與腦出血、腦卒中等腦血管疾病易感性相關(guān)。但目前關(guān)于腦出血患者與ACE 基因多態(tài)性相關(guān)研究極為少見(jiàn)且結(jié)論并不一致[16]，且關(guān)于高血壓合并腦出血患者的相關(guān)研究更是鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果顯示，ACE 基因多態(tài)性與高血壓合并腦出血的發(fā)生密切相關(guān)，且攜帶D 等位基因是其危險(xiǎn)因素可顯著高血壓合并腦出血的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，多因素Logistics回歸分析結(jié)果還發(fā)現(xiàn)BMI、年齡＞65 歲、吸煙史與高血壓合并腦出血的發(fā)病存在相關(guān)性，提示臨床應(yīng)積極評(píng)估高齡（＞65 歲）、有吸煙史及BMI ＞25 kg/m2的高血壓患者發(fā)生腦出血的可能性，并及時(shí)給予降壓等處理以選擇合適治療方案。

綜上所述，ACE 基因多態(tài)性攜帶的D 等位基因與高血壓合并腦出血間存在明顯相關(guān)性，可能是高血壓合并腦出血的危險(xiǎn)因素，此外BMI、年齡＞65 歲、吸煙史均與高血壓合并腦出血密切相關(guān)，臨床應(yīng)給予高度重視。