抗核抗體熒光模型與滴度在自身免疫性疾病中的臨床分析

劉惠源 扶忠超 張?jiān)势?尹志華 葉志中

1.深圳市福田區(qū)風(fēng)濕病專(zhuān)科醫(yī)院風(fēng)濕免疫實(shí)驗(yàn)室，廣東深圳 518000；2.深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，廣東深圳 518005

抗核抗體（anti-nuclear antibody，ANA）是自身免疫性疾?。╝utoimmune disease，AID）重要的生物學(xué)標(biāo)志[1]，常見(jiàn)于各種AID 中，可在發(fā)病前數(shù)年出現(xiàn)，還可見(jiàn)于惡性腫瘤、感染及健康人群中。ANA 檢測(cè)的方法有多種，早在1950 年由Coons和kaplan 提出間接免疫熒光法（IIFA）檢測(cè)，時(shí)至今日仍認(rèn)為是“金標(biāo)準(zhǔn)”[2-3]。ENA（extractable nuclear antigen）抗體亦是AID 重要的自身抗體，對(duì)AID 的預(yù)測(cè)、診斷、病情活動(dòng)均具有極其重要的臨床意義[3]。如ANA 熒光模型和特異性抗體一致，更具有臨床價(jià)值[4]。本研究通過(guò)分析AID 及非AID 的ANA 滴度、熒光模型等特征，旨在為臨床診療提供診療依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取深圳市福田區(qū)風(fēng)濕病專(zhuān)科醫(yī)院2019 年6 月至2020 年6 月就診的153 例AID 患者，其中70 例系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）、36 例類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）、9 例強(qiáng)直性脊柱炎（ ankylosing spondylitis，AS）、8 例干燥綜合征（sicca syndrome，SS）、3 例系統(tǒng)性硬化癥（systemic sclerosis，SSc）、混合性結(jié)締組織病（mixed connective tissue disease，MCTD）和自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis，AIH）各2 例，以及23 例未分化結(jié)締組織?。╱ndifferentiated connective tissue disease，UCTD），設(shè)為AID 組；選取同期92 名非AID 患者或健康者設(shè)為非AID 組。AID 組男18 例，女135 例，平均年齡（41.2±12.3）歲；非AID 組男10 例，女82 例，平均年齡（42.9±9.8）歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)均符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)或肝病學(xué)會(huì)診斷/ 分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴基礎(chǔ)性疾?。ㄈ绺哐獕骸⑻悄虿?、肝炎、結(jié)核、腫瘤等）者。

1.2 儀器與與試劑

免疫熒光顯微鏡EUROStar ⅢPlus 及間接免疫熒光法檢測(cè)試劑盒（美國(guó)沃芬公司，生產(chǎn)批號(hào)053387）。QUANTA-Lyser 儀器及抗ds-DNA 抗體試劑盒（美國(guó)沃芬公司，生產(chǎn)批號(hào)053121）。

1.3 方法

采用間接免疫熒光法檢測(cè)ANA。①樣本準(zhǔn)備：標(biāo)本、試劑、緩沖液；②檢驗(yàn)操作：制備基質(zhì)載玻片，孵育載玻片，清洗載玻片，加入熒光素標(biāo)記的結(jié)合物，清洗載玻片；③結(jié)果判讀：在顯微鏡下觀察熒光模型，根據(jù)熒光亮度判讀滴度。滴度≥1 ∶100 為陽(yáng)性。采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)抗ds-DNA 抗體，按照操作說(shuō)明依次加入1 ～3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品、陰性、陽(yáng)性對(duì)照，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)值繪制出參數(shù)曲線，計(jì)算結(jié)果，臨界值為200.0 U/ml。所有研究對(duì)象均采取空腹血清，樣本均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)

分析兩組ANA 陽(yáng)性率、ANA 模型、滴度分布情況及差異，以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者ANA滴度與dsDNA 濃度的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布數(shù)據(jù)用（）表示，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，非正態(tài)分布數(shù)據(jù)采用中位數(shù)（四分位數(shù)）表示。采用Spearman相關(guān)性分析比較兩組的相關(guān)性，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AID組主要熒光模型分布情況

ANA 陽(yáng)性率為83.0%（127/153）。熒光模型以均質(zhì)型28.1%（43/153）、核顆粒型31.4%（48/153）、混合型9.2%（14/153）為主，其中混合型主要為核顆粒/ 胞漿顆粒占35.7%（5/14），SLE 以核顆粒型為主42.8%（30/70），RA 均質(zhì)、核顆粒型占63.9%（23/36），SSc 均為著絲點(diǎn)型。見(jiàn)表1。

2.2 AID患者的ANA滴度分布情況

AID 患 者ANA 滴 度（中 位 數(shù)）為1 ∶1000，除了AS、RA、UCTD 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均為1 ∶320，其他AID 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均≥1 ∶1000，其中SS 患者ANA 滴度（中位數(shù)）為1 ∶3200，SLE、SSc、MCTD、AIH 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均為1：1000。見(jiàn)圖1。

表1 AID患者ANA熒光模型分布[n（%）]

圖1 不同AID 患者ANA 的滴度（中位數(shù)）

2.3 SLE患者ANA滴度與抗ds-DNA抗體的相關(guān)性分析

SLE 患者ANA 滴度（中位數(shù)）為1 ∶1000，與抗ds-DNA 抗體濃度呈正相關(guān)（r=0.538，P＜0.05），抗ds-DNA 抗體陽(yáng)性、陰性組ANA 滴度（中位數(shù)）分別為1：3200 和1 ∶320。見(jiàn)圖2。

圖2 SLE、抗ds-DNA 抗體陰性及陽(yáng)性的滴度（中位數(shù)）

2.4 非AID者ANA熒光模型與滴度

非AID 組ANA 陽(yáng) 性 率 為13.0%（12/92），AID 組ANA 陽(yáng)性率為83.0%（127/153），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。非AID 組模型以致密顆粒型8 例為主，均質(zhì)型、核顆粒型各2 例，滴度均為1 ∶100。AID 組和非AID 組ANA 滴度（中位數(shù)）分別為1 ∶1000 和1 ∶100。見(jiàn)圖3。

圖3 AID 組與非AID 組滴度（中位數(shù)）

3 討論

ANA 在AID 的診斷中起著重要作用，ANA 滴度被認(rèn)為與臨床密切相關(guān)[4]，對(duì)疾病的診斷和病情的評(píng)估有重要價(jià)值[5]。熒光模型提示著特異抗原，可能是同源的自身抗體與某些疾病或疾病的表現(xiàn)有關(guān)。ANA 模型可能與疾病相關(guān)性比特異性抗原更大[4]。因此如果高度懷疑存在某種疾病特異性靶抗原的熒光模型，應(yīng)建議臨床醫(yī)生進(jìn)一步檢測(cè)特異性抗體，有助于疾病的早期診斷和治療[5]。

本研究通過(guò)分析不同AID 中ANA 熒光模型、滴度、抗體的差異以及非AID 人群ANA 的檢出情況，為臨床工作提供幫助。研究顯示AID 組ANA陽(yáng)性率為83.0%，與陳水綿等[6]結(jié)果相近，非AID組陽(yáng)性率13.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），AID 組中均質(zhì)型、核顆粒型在SLE、RA、UCTD 中的陽(yáng)性率高于其他模型。SLE 模型以核顆粒型為主（42.8%），與劉衛(wèi)霞等[7]報(bào)道核顆粒型占比46.7%相似。SSc 患者模型均為著絲點(diǎn)型。在SSc 的分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)中抗著絲粒抗體被認(rèn)為是特異性抗體，IIF 可檢測(cè)的ANA 熒光模型多為著絲點(diǎn)型[8]。雖然特定熒光模型與某些ANA 靶抗原的特異性自身抗體、AID 及特定臨床表現(xiàn)存在一定的相關(guān)性，但并非完全一致，不能僅從熒光模型來(lái)推斷AID[1]。

不同AID 患者滴度不一樣，本研究結(jié)果顯示，除AS、RA、UCTD 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均為1 ∶320 外，其他AID 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均≥1 ∶1000，其中SS 患者ANA 滴度（中位數(shù)）為1 ∶3200，SLE、SSc、MCTD、AIH 患者ANA 滴度（中位數(shù)）均為1 ∶1000。因此，RA、AS 中的ANA 滴度對(duì)診斷的參考意義不大。UCTD 的滴度亦較低，因UCTD 可能進(jìn)一步發(fā)展為其他AID，可理解為早期AID，因此可能隨著病情發(fā)展，演變成SLE、SS 等AID 后其滴度亦可能改變。高滴度ANA 意味著特異性抗原被識(shí)別的機(jī)會(huì)增加[4]。Banhuk 等[9]研究顯示高滴度ANA 與AID 密切相關(guān)。

ANA 滴度在預(yù)后中發(fā)揮重要作用[10]，目前關(guān)于病情活動(dòng)與滴度相關(guān)性研究較少報(bào)道，本研究發(fā)現(xiàn)SLE 患者中ANA 滴度與抗ds-DNA 抗體濃度呈正相關(guān)（r=0.538，P＜0.05），可能與病情活動(dòng)有關(guān)，可用于監(jiān)測(cè)病情及預(yù)后。然而本研究的樣本量相對(duì)較少，需進(jìn)行大樣本及多中心研究進(jìn)一步證實(shí)。

健康人群中ANA 呈弱表達(dá)，特別是老年健康人群中[10]。本研究非AID 人群中ANA 陽(yáng)性率為13.0%，與Mariz 等[11]研 究 結(jié) 果ANA 占12.9% 相近。有文獻(xiàn)報(bào)道低滴度ANA 甚至可能出現(xiàn)在高達(dá)40%的健康人群中[12]，Marin 等[13]研究發(fā)現(xiàn)在健康人群、AID 患者家屬及醫(yī)療工作者共304 人中ANA可檢測(cè)出熒光模型的比例為54.3%，其中35.4%為1 ∶40 低滴度，認(rèn)為ANA 一般不應(yīng)在沒(méi)有臨床適應(yīng)證的情況下進(jìn)行檢測(cè)，有趣的是AID 患者的醫(yī)生和親屬ANA 滴度往往增加。本研究顯示，非AID人群中，以致密顆粒為主，均為低滴度。HEp-2 細(xì)胞致密顆粒（DFS）模型可能是ANA 相關(guān)性風(fēng)濕?。ˋARD）的排除性標(biāo)記，甚至可能發(fā)揮保護(hù)或有益的作用[14]。致密顆粒型在健康人群中更常見(jiàn)[11，15]，而均質(zhì)型只在AID 患者中觀察到[11]。因此不同模型在不同個(gè)體的意義不一樣。

熒光模型及滴度始終應(yīng)根據(jù)臨床背景進(jìn)行分析[16]。不同AID 患者ANA 模型、滴度分布情況不一樣，健康人群亦有一定的ANA 陽(yáng)性率，如檢測(cè)中出現(xiàn)致密顆粒型，需謹(jǐn)慎診斷為AID。臨床醫(yī)師需關(guān)注ANA 模型和滴度的價(jià)值，特殊模型可提示特殊疾病，低滴度ANA 的臨床意義較小，高滴度則需積極尋找靶抗原，如無(wú)臨床癥狀，應(yīng)密切隨訪。