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    凋亡刺激蛋白抑制因子、逮捕缺陷蛋白表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病理分期及組織分型關(guān)系

    2021-05-10 07:42:30許金中王海玲王真張有利李穎
    安徽醫(yī)藥 2021年5期

    許金中,王海玲,王真,張有利,李穎

    鼻咽鱗狀細(xì)胞癌是最常見的鼻咽部惡性腫瘤之一,發(fā)病率可達(dá)275~583/10萬人左右,特別是在合并有病毒感染的人群中,鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)更高。凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)作為細(xì)胞凋亡相關(guān)調(diào)控因子,能夠抑制癌細(xì)胞的凋亡,降低癌細(xì)胞程序性壞死的風(fēng)險(xiǎn);逮捕缺陷(ARD1)蛋白是重要的腫瘤相關(guān)蛋白,ARD1表達(dá)濃度的上升能夠顯著影響癌細(xì)胞的生物學(xué)特征,導(dǎo)致癌細(xì)胞的增殖或者浸潤能力的提高。ARD1及iASPP在腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為中具有重要的作用,ARD1或者iASPP的過表達(dá)能夠促惡性腫瘤的臨床進(jìn)展,目前在鼻炎鱗狀細(xì)胞癌中,iASPP或者ARD1的表達(dá)及其對鼻咽臨床細(xì)胞的進(jìn)展的影響目前上缺乏研究。為了深入探討iASPP或者ARD1的表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)系,本次研究探討了iASPP或者ARD1的表達(dá)及與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病人臨床病理特征的關(guān)系。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 選取濟(jì)源市第二人民醫(yī)院2015年1月至2019年1月收集的鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本80例(鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組)、并選取40例正常鼻咽部組織(對照組),正常組織樣本對應(yīng)的性別、年齡和鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本大體相近。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考2014年版NCCN臨床實(shí)踐指南《頭頸部腫瘤》中的標(biāo)準(zhǔn),經(jīng)病理學(xué)檢查結(jié)果證實(shí);(2)鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病人獲取癌組織標(biāo)本前無放化療、免疫治療史;(3)研究對象的基礎(chǔ)資料完整;(4)簽署了知情同意書;排除標(biāo)準(zhǔn):(1)病理學(xué)資料缺失;(2)合并頭頸部或其他器官、系統(tǒng)腫瘤;(3)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、自身免疫系統(tǒng)疾病等;(4)應(yīng)用免疫抑制劑。

    鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組,男62例、女18例,年齡(57.5±11.0)歲,年齡范圍為43~76歲;病理分型:Ⅰ型6例、Ⅱ型8例、Ⅲ型66例;T分期:T1分期11例、T2分期15例、T3分期38例、T4分期16例;N分期:N0分期10例、N1分期14例、N2分期34例、N3分期22例;臨床分期:Ⅰ期5例、Ⅱ期8例、Ⅲ期42例、Ⅳ期25例。對照組,男30例、女10例,年齡(55.2±13.2)歲,年齡范圍為38~75歲。兩組標(biāo)本獲取對象的性別構(gòu)成及年齡構(gòu)成均衡且具有可比性(P>0.05)。本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會(huì)赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

    1.2 免疫組化檢測方法 病理組織石蠟包埋切片,梯度乙醇脫蠟至水化,3%過氧化氫室溫條件下孵育20 min封閉過氧化氫酶,磷酸鹽緩沖液清洗3次,每次5 min,微波修復(fù)抗原,磷酸鹽緩沖液稀釋后的山羊血清封閉抗體5 min,倒去血清后不清洗,加入一抗(購自賽默飛世爾中國,濃度:1∶1 000)5 mL,37℃孵育2 h,或者放置4℃冰箱過夜孵育,磷酸鹽緩沖液清洗3次,每次5 min,加入生物素?zé)晒鈽?biāo)記的二抗(購自賽默飛世爾中國,濃度1∶2 000)3 mL,37℃孵育20~30 min,磷酸鹽緩沖液清洗3次,每次5 min,加入Streptavidin/HRP辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素,37℃孵育20~30 min,磷酸鹽緩沖液清洗3次,每次5 min,增強(qiáng)型HRP-DAB底物顯色試劑盒(PA110)顯色,自來水沖洗,復(fù)染,封片。

    1.3 免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化染色后結(jié)果評分方法:ARD1蛋白陽性著色定位于細(xì)胞質(zhì)、iASPP蛋白陽性著色定位于細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核,陽性著色呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá),(1)根據(jù)著色強(qiáng)度:0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色;(2)根據(jù)陽性細(xì)胞比例:陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%(1分)、占比范圍11%~50%(2分)、占比范圍51%~75%(3分)、占比范圍>75%(4分),強(qiáng)度積分與陽性細(xì)胞占比積分之乘積<3分為陰性、≥3分為陽性。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組ARD1、iASPP蛋白表達(dá)情況 鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織中ARD1蛋白、iASPP蛋白陽性表達(dá)分別為56.25%、78.75%,對照組分別為10.00%、17.50%,前者均高于后者(P<0.05)。見表1。

    表1 兩組標(biāo)本中凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)、逮捕缺陷(ARD1)蛋白表達(dá)比較/例(%)

    2.2 ARD1蛋白、iASPP蛋白表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的病理學(xué)特征的關(guān)系 T3和T4分期、N2和N3分期、Ⅲ期和Ⅳ期的鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織中的ARD1蛋白、iASPP蛋白陽性率均分別的高于T1和T2分期、N1和N2分期、Ⅰ期和Ⅱ期病人,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);本研究中,在不同病理學(xué)分型的鼻咽鱗狀細(xì)胞癌組織中的ARD1蛋白、iASPP蛋白陽性率均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2,表3。

    3 討論

    鼻咽癌的發(fā)生是多因素作用的結(jié)果,上皮細(xì)胞的癌基因錯(cuò)配的發(fā)生、長期吸煙導(dǎo)致的黏膜損傷修復(fù)的異常、亞硝酸鹽的攝入等,均能夠促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生。臨床病理特征的評估,對鼻咽癌的病情的評估及治療方案的設(shè)計(jì)具有極其重要的作用。現(xiàn)階段臨床上多數(shù)臨床工作者采用影像學(xué)檢查評估鼻咽癌的病情進(jìn)展情況,但影像學(xué)檢查的費(fèi)用較高、檢查耗時(shí)較長、檢查的靈敏度較低。腫瘤蛋白或者腫瘤調(diào)控相關(guān)因子的改變,能夠在惡性腫瘤的發(fā)生過程中發(fā)揮作用,因此對腫瘤相關(guān)的調(diào)控因子進(jìn)行檢測,可能對腫瘤的臨床及以后評估發(fā)揮具有重要的意義。

    表2 逮捕缺陷(ARD1)蛋白表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的病理學(xué)特征的關(guān)系/例(%)

    ARD1能夠提高癌細(xì)胞內(nèi)P53信號(hào)通路的激活,增加下游轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的激活,提高了癌細(xì)胞非對稱性分裂的風(fēng)險(xiǎn);iASPP蛋白對于癌細(xì)胞內(nèi)的腫瘤凋亡啟動(dòng)基因的抑制作用,能夠顯著降低病理性或者生理性的上皮細(xì)胞的凋亡過程,提高癌細(xì)胞的G1/S期的比例,促進(jìn)癌細(xì)胞快速跨越G0期。部分研究者揭示了iASPP蛋白的表達(dá)病人病情的關(guān)系,認(rèn)為iASPP的表達(dá)陽性率的上升與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生或者放療結(jié)局密切相關(guān),但對于ARD1蛋白的分析研究較少。

    在本次研究中,免疫組化的分析結(jié)果提示,在鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病灶組織中iASPP或者ARD1的表達(dá)陽性率均明顯的上升,高于正常鼻粘膜組織,差異較為明顯,提示了iASPP或者ARD1均可能影響了鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病情進(jìn)展過程。而其中的原理可能與下列方面的病理生理機(jī)制有關(guān):(1)iASPP的表達(dá)陽性率的上升不僅能夠?qū)е律掀ぜ?xì)胞凋亡過程的障礙,同時(shí)還能夠誘導(dǎo)早期癌細(xì)胞的免疫逃逸過程,促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖;(2)ARD1的表達(dá)陽性率的上升能夠促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)的腫瘤信號(hào)通路的激活,提高AKT或者M(jìn)APK/P53等通路的激活程度,促進(jìn)了鼻粘膜上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄活性的提升。焦紅葉等研究者也認(rèn)為,在鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病灶組織中,iASPP的表達(dá)上調(diào)能夠顯著加劇癌細(xì)胞的異常分化,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的浸潤和遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。在淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移或者Ⅲ期和Ⅳ期的鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病人中,iASPP或者ARD1的表達(dá)陽性率均可顯著的上升,這主要考慮與iASPP的表達(dá)影響到了鼻粘膜上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期的調(diào)控、細(xì)胞凋亡比例等,提高了癌細(xì)胞對于鎖骨下或者頭頸部淋巴結(jié)的粘附能力等有關(guān);而ARD1的上升能夠影響癌細(xì)胞的浸潤過程,導(dǎo)致癌細(xì)胞的形態(tài)異常、癌細(xì)胞的排列極性的紊亂,進(jìn)而導(dǎo)致鼻咽鱗狀細(xì)胞癌臨床分期的惡化。

    本次研究的創(chuàng)新性在于探討了ARD1的表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病人臨床病理特征的關(guān)系。綜上所述,在鼻咽鱗狀細(xì)胞癌病人中iASPP或者ARD1的表達(dá)明顯上升,而iASPP或者ARD1的表達(dá)能夠顯著促進(jìn)鼻咽鱗狀細(xì)胞癌臨床病理特征的進(jìn)展。

    表3 凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)蛋白表達(dá)與鼻咽鱗狀細(xì)胞癌的病理學(xué)特征的關(guān)系/例(%)

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