液相色譜-高分辨質(zhì)譜法在中國東北地區(qū)農(nóng)作物有機(jī)硒形態(tài)分析中的應(yīng)用

朱帥，沈亞婷，賈靜，勞昌玲

（1.自然資源部生態(tài)地球化學(xué)重點實驗室，國家地質(zhì)實驗測試中心，北京100037；2.桂林理工大學(xué)地球科學(xué)學(xué)院，廣西 桂林541004）

硒（Se）是人類必需的營養(yǎng)元素，也是植物的有益元素，它以多種天然形式存在于人類、動植物甚至藍(lán)細(xì)菌中［1］。Rayman［2］于2012年指出硒是有效的免疫刺激劑，對機(jī)體免疫非常重要，硒還具有降低氧化應(yīng)激反應(yīng)、延緩衰老，以及促進(jìn)細(xì)胞分化等作用［3］。當(dāng)人們硒攝入量不足時會導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生［4］，例如當(dāng)糖尿病人每天Se的攝入量不足20μg時會增加患癌癥、阿茲海默氏癥或帕金森氏癥等其他疾病的風(fēng)險［5］。在食物鏈中，植物硒的代謝優(yōu)于動物硒，植物是補(bǔ)充硒的重要來源［6］。中國存在富硒土地［7］，可用于種植富硒作物，食用富硒農(nóng)作物是預(yù)防硒缺乏癥最有效的途徑［8］。因此，對農(nóng)產(chǎn)品中硒研究具有現(xiàn)實意義。硒的代謝途徑、生物利用度、生理功能和毒性不僅取決于攝入量，更取決于元素的化學(xué)形式［9］。通常，硒在農(nóng)作物中主要以有機(jī)硒的形式存在（占比40% ～90%）。例如有機(jī)硒的形態(tài)有硒代蛋氨酸（SeMet）、硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）、硒代乙硫氨酸（SeEt）、硒脲（SeUr）、亞硒基全蛋氨酸等［10］。與無機(jī)硒相比，有機(jī)硒具有更高的生物利用度，SeMet的生物利用度高達(dá)90%以上，而人體攝入過量的無機(jī)硒會引起中毒［11-12］。人們普遍在土壤或者葉面施用含硒肥料用于生產(chǎn)富硒農(nóng)產(chǎn)品，主要通過轉(zhuǎn)運蛋白或磷酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白的轉(zhuǎn)運作用，外源無機(jī)硒被農(nóng)作物根吸收，在芽和樹葉中轉(zhuǎn)化為有機(jī)硒，然后在葉綠體作用下進(jìn)一步代謝合成硒代半胱氨酸（SeCys）、硒 代 蛋 氨 酸（SeMet）、硒 代 胱 氨 酸（SeCys2）等有機(jī)硒［13］。因此，在評估富硒農(nóng)作物時，主要考慮這三種有機(jī)硒的含量與組成。

分離分析農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)主要包括提取和分析。提取過程中需特別注意不能使農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)發(fā)生變化，近些年酶提取法在硒的形態(tài)分析研究廣泛應(yīng)用［14］，超聲微波結(jié)合酶提取法可以有效地縮短提取時間［15］。硒在農(nóng)產(chǎn)品中含量較低，因此對分析方法的靈敏度和準(zhǔn)確度要求比較高。硒化物的分離技術(shù)主要有氣相色譜法（GC）［16］、電泳法［17］和高效液相色譜法（HPLC）等。氣相色譜具有分離速度快、檢出限低等優(yōu)點，但分析時間長，且不適用分離低聚肽的硒化合物。電泳法具有檢出限低、分辨率高、保留樣品的完整性等優(yōu)點，但是接口技術(shù)的滯后阻礙了CE-ICP-MS在分析農(nóng)作物硒形態(tài)上的應(yīng)用。高效液相色譜技術(shù)廣泛應(yīng)用于分離植物體中各種硒形態(tài)［18-19］。硒形態(tài)的檢測器主要有電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）［19-20］、原子吸收光譜（AAS）［21-22］、原子熒光光譜（AFS）［23-25］等。ICPMS具有靈敏度高、檢出限低、選擇范圍寬等優(yōu)點，與陰離子交換色譜聯(lián)合使用在農(nóng)作物硒化物形態(tài)分析方面有廣泛的應(yīng)用，但氬的多原子離子會產(chǎn)生質(zhì)譜干擾（如40Ar和36Ar+對76Se，40Ar和37Ar+對77Se，40Ar和38Ar+對78Se等），基質(zhì)干擾嚴(yán)重，現(xiàn)有的分析方法應(yīng)用范圍窄，不能同時適用于多種復(fù)雜基質(zhì)樣品的測定分析。同時Se屬于難電離物質(zhì)，電離不完全，影響測定的準(zhǔn)確度［26］，此外，ICP-MS僅適用于擁有標(biāo)準(zhǔn)品的目標(biāo)分析物的鑒定。因此，質(zhì)譜干擾問題、電離不完全、不能同時測定多種復(fù)雜基質(zhì)樣品仍是分析工作面臨的挑戰(zhàn)。

靜電場軌道離子阱（Orbitrap）具有較強(qiáng)的抗干擾能力、高精度和高通量等優(yōu)點，可在很大程度上解決質(zhì)譜干擾的問題［27］。四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜（Q-Exactive）是將四極桿與Orbitrap相結(jié)合，降低了復(fù)雜基質(zhì)背景的干擾，測定準(zhǔn)確，適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品的測定分析。該質(zhì)譜擁有高質(zhì)量精度和高分辨率，從而能夠識別未知物的結(jié)構(gòu)信息［28］，在有機(jī)硒分析方面初見成效。Bierla等［29］利用電噴霧Orbitrap MS3對葵花籽油中復(fù)雜的含Se化合物進(jìn)行高質(zhì)量精確度（＜10-6）分子特異性檢測。本文將超聲輔助酶提法與液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜相結(jié)合，初次嘗試同時測定中國糧食主產(chǎn)區(qū)東北黑龍江地區(qū)多種農(nóng)產(chǎn)品中三種有機(jī)硒形態(tài)。對樣品提取和儀器分析各參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，建立一種前處理過程快速簡單、檢出限低、準(zhǔn)確度高和適合多種復(fù)雜基質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品中硒形態(tài)分析方法。

1 實驗部分

1.1 樣品采集和保存

農(nóng)作物樣品（包括水稻13份、玉米13份、大豆9份、馬鈴薯2份、白菜2份、尖椒2份、白蘿卜2份、茄3份）于2019年9月采自黑龍江地區(qū)（圖1）。該地區(qū)主要為黑土，pH值為7.21～8.24，有機(jī)質(zhì)含量18.9～26.2mg/g，氮含量95.8～137.4mg/kg，磷含量233.7～321.0mg/kg，鉀含量183.1～211.7 mg/kg，含水率3.2% ～7.5%。樣品在野外先用自來水沖洗去除表面灰塵和殘留土壤，再用礦泉水潤洗后用紗布包裹晾樣。待樣品運回實驗室后離開取出，在室溫下自然風(fēng)干。風(fēng)干的樣品放在托盤中于55℃烘24h，將烘干的樣品用萬能粉碎機(jī)粉碎后儲存于干燥器中，用于測定總硒和硒形態(tài)。

1.2 儀器和主要試劑

液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜系 統(tǒng) （LC - Q Exactive Orbitrap MS，美 國ThermoFisher公司）；電子天平（德國Sartorius公司）；離心機(jī)（日本Hitachi公司）；B5510-E超聲波清洗儀（美國Branson公司）。

硒代胱氨酸和硒代半胱氨酸（SeCys2和MeSeCys，純度98%，北京百靈威公司）；硒代蛋氨酸（SeMet，純度99%，美國Alfa公司）；脂肪酶和淀粉酶（分析純，北京索萊寶科技有限公司）；蛋白酶K和蛋白酶XIV［天根生化科技（北京）有限公司］；甲醇和乙腈（色譜純，美國J.T.Baker公司）；甲酸（色譜純，德國Fluka公司）；Milli-Q水：由Millipore純水儀制備。

圖1 采樣點位圖Fig.1 Locations of sampling sites

1.3 總硒和有機(jī)硒形態(tài)分析條件

總硒含量測定：用四位天平精確稱取約0.5g樣品置于消解罐中，同時做試劑空白。總硒含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中硒的測定》（GB 5009.93—2017），用ICP-MS進(jìn)行測定，以72Ge作為內(nèi)標(biāo)，同位素78Se和80Se進(jìn)行測定。

有機(jī)硒形態(tài)含量測定：用四位天平精確稱取0.5g樣品置于離心管中（15mL），做試劑空白，加入5mL超純水和20mg蛋白酶XIV，渦旋30s混勻，在37℃水浴中超聲1.5h，超聲后移入離心機(jī)離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速6000r/min，時間10min，靜置后取上清液過0.22μm濾膜，上機(jī)測定。Q-Exactive氣質(zhì)的主要儀器參數(shù)見表1。

高效液相色譜條件：Waters Symmetry RP18液相色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）；進(jìn)樣量3μL；柱溫20℃；流動相：A水，B乙腈，流速0.3mL/min，梯度洗脫程序如表1所示。質(zhì)譜條件：加熱電噴霧離子源（HESI）；噴霧電壓3.0kV；毛細(xì)管溫度350℃；加熱器溫度300℃；掃描模式為Full MS/dd-MS2；質(zhì)譜掃描范圍m/z50～500；一級全掃描（Full MS）分辨率為70000，C-trap最大容量（AGC target）為3×106，C-trap最大注入時間為200ms；數(shù)據(jù)依賴二級子離子掃描（dd-MS2）分辨率為17500，C-trap最大容量（AGC target）為1×105，C-trap最大注入時間為50ms，二級質(zhì)譜的碰撞能量（CE）為30eV；鞘氣壓力35arb；輔助氣壓力10arb。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure

1.4 樣品分析的質(zhì)量控制與質(zhì)量保證

樣品提取、凈化、分析過程中嚴(yán)格按照1.3節(jié)分析條件對樣品進(jìn)行質(zhì)量控制。在樣品分析時，每7個樣品設(shè)置一個流程空白作為實驗室背景干擾。實驗過程中，有機(jī)硒在流程空白樣品未檢出，三種有機(jī)硒的方法檢出限（S/N＝3）為1.0～4.7μg/kg，回收率為76.4% ～116.0%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）≤6.5%，通過標(biāo)準(zhǔn)品測定證實實驗過程不會造成有機(jī)硒的形態(tài)發(fā)生改變。

2 結(jié)果與討論

2.1 液相參數(shù)的選擇與優(yōu)化

液相色譜柱的選擇對分離至關(guān)重要，為獲得更好的靈敏度和分離效果，本研究比較了Hamilton PRP-X100 陰離子交換柱（4.1mm×250mm，10μm）、Waters Symmetry RP18液相色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）、Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（RRHD，2.1mm×150mm，18μm）、Waters BEH C18液相色譜柱（2.1mm×50mm，1.7μm）來分離有機(jī)硒。如圖2和圖3a所示，三種有機(jī)硒在Waters Symmetry RP18液相色譜柱上的峰形最好，響應(yīng)值最高，具有更好的保留特性，該色譜柱特有的極性基團(tuán)嵌入技術(shù)使有機(jī)硒在該色譜柱上的峰形比其余的三個色譜柱的峰形更優(yōu)。此外，該液相色譜柱可用于分離多種親水化合物，對實際樣品的檢測適用性更好、更耐用，因此本實驗選擇Waters Symmetry RP18液相色譜柱。

依據(jù)優(yōu)先選擇簡單和無毒試劑作為流動相的原則，本實驗選擇A水、B乙腈和A水、B甲醇作為流動相進(jìn)行優(yōu)化分析。如圖3b所示，有機(jī)相采用乙腈的信號強(qiáng)度優(yōu)于甲醇相，當(dāng)流動相水中加入0.1%的甲酸或1%的乙酸銨后，有機(jī)硒的信號強(qiáng)度驟減，故采用純水和乙腈作為流動相。如圖3c所示，柱溫在20℃時，三種有機(jī)硒的響應(yīng)值最高，優(yōu)化后的色譜條件見1.3節(jié)所述，各有機(jī)硒組分在10min內(nèi)獲得較好的分離效果，目標(biāo)物峰形對稱性好、尖銳度和靈敏度高。

2.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

本方法對三種目標(biāo)物在負(fù)離子模式下采用Full MS/dd-MS2掃描模式對目標(biāo)物進(jìn)行定性篩查和確證。對于復(fù)雜基質(zhì)中痕量組分的定性，分辨率起到了非常關(guān)鍵的作用，本研究發(fā)現(xiàn)一級全掃描分辨率R＝70000時，所有待測物可以與基質(zhì)中的干擾物實現(xiàn)基線分離，響應(yīng)值也明顯提高，基質(zhì)干擾大大降低。因此，考慮到定性和定量的準(zhǔn)確性，一級質(zhì)譜全掃描的分辨率設(shè)置為70000，二級質(zhì)譜掃描設(shè)置為17500。進(jìn)一步對二級質(zhì)譜的碰撞能量（CE）進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果顯示，CE值為30eV時能夠獲得最佳的二級質(zhì)譜定量離子響應(yīng)。三種有機(jī)硒的保留時間、精確質(zhì)量數(shù)、相對質(zhì)量偏差等信息見表2。由表中數(shù)據(jù)可知，三種有機(jī)硒精確質(zhì)量數(shù)的相對質(zhì)量偏差均低于3×10-6，證明目標(biāo)化合物的質(zhì)量準(zhǔn)確度均很好，滿足定性需求。

圖2 有機(jī)硒在不同液相色譜柱上的色譜圖Fig.2 Chromatograms of organic selenium on different liquid chromatography columns

圖3 有機(jī)硒在不同儀器參數(shù)下的響應(yīng)值Fig.3 Values of organic selenium under different instrument parameters

2.3 提取劑的選擇

選取硒含量較高的水稻籽粒樣品進(jìn)行提取優(yōu)化實驗，采用37℃水浴超聲1.5h后，保持37℃水浴過夜的提取方法分別考察水、10%甲酸、脂肪酶、α-淀粉酶、蛋白酶K、蛋白酶E和蛋白酶XIV對水稻籽粒樣品中硒形態(tài)提取效果的影響。如圖4a所示，水稻籽粒樣品中主要的硒形態(tài)為硒代蛋氨酸，采用蛋白酶E和蛋白酶XIV的提取效果最佳，三種形態(tài)硒的響應(yīng)值總和最高；水、10%甲酸、脂肪酶和α-淀粉酶無法將SeCyS2從水稻籽粒中提取出來；蛋白酶K的提取效率僅為蛋白酶E或蛋白酶XIV的50%。蛋白酶E或蛋白酶XIV的提取效率相當(dāng)，但是蛋白酶XIV對SeCys2的提取效率比蛋白酶E的提取效率高（圖4b）。本實驗選擇蛋白酶XIV作為提取劑考察其對硒形態(tài)提取效果的影響。

表2 三種有機(jī)硒的保留時間、精確質(zhì)量數(shù)和相對質(zhì)量偏差Table 2 Retention times，accurate masses and relative deviations of three kinds of organic selenium

2.4 蛋白酶XIV用量的優(yōu)化

水浴超聲處理的溫度為37℃，提取時間設(shè)為3h，分別考察10、20、30、40、50和60mg蛋白酶XIV對水稻籽粒樣品中硒形態(tài)提取效果的影響。如圖4c所示，當(dāng)?shù)鞍酌竂IV用量為20mg時，提取效率最佳；當(dāng)?shù)鞍酌竂IV用量大于20mg時，提取效率不再增加。隨著蛋白酶XIV 用量的增加，提取出的SeMet含量先升高后降低，當(dāng)?shù)鞍酌竂IV用量為20mg時，提取出的SeMet含量最高。SeCys2含量隨蛋白酶XIV用量的增加而逐漸增加。MeSeCys含量隨蛋白酶XIV用量增加先升高后下降。最終選擇蛋白酶XIV用量為20mg。

2.5 提取時間的優(yōu)化

在水浴超聲處理的溫度為37℃，蛋白酶XIV用量為20mg的條件下，分別考察提取時間為1.0、1.5、2.0、2.5和3.0h對水稻籽粒樣品中硒形態(tài)提取效果的影響。如圖4d所示，提取效率隨提取時間增長而增加，當(dāng)提取時間≥1.5h時，提取效率基本保持一致；提取出的SeMet和SeCys2含量隨提取時間的增加而逐漸減少，這是由于這兩種有機(jī)硒隨時間的增長逐漸酶解導(dǎo)致其含量降低，MeSeCys含量隨時間增長變化不大，選擇提取時間為1.5h最優(yōu)。

2.6 方法技術(shù)評價

2.6.1 方法線性范圍和檢出限

圖4 有機(jī)硒在不同前處理條件下的響應(yīng)值Fig.4 Values of organic selenium under different instrument parameters

分別配制5.0、10.0、50.0、100.0、200.0、500.0 μg/L的SeCys2、MeSeCys和SeMet混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，以各濃度色譜峰面積（y）對應(yīng)質(zhì)量濃度（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在最佳實驗條件下，在5.0～500.0μg/L濃度范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)（r）均小于0.997，線性關(guān)系良好。采用逐級稀釋法，三倍的信噪比（S/N＝3）確定該化合物的檢出限，SeCys2、MeSeCys和SeMet方法檢出限為1.0～4.7μg/kg（表3）。

表3 三種硒的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限Table 3 Regression equations，correlation coefficients and detection limit of three selenium species

2.6.2 方法準(zhǔn)確度和重復(fù)性

分別選取一空白水稻籽粒樣品，添加適量的有機(jī)硒標(biāo)準(zhǔn)溶液至濃度為50、1000和5000μg/kg三個水平的三種硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度水平做7個平行樣，進(jìn)行回收率實驗。表4中的結(jié)果表明，SeMet的加標(biāo)回收率在89.2% ～106.0%，SeCys2的加標(biāo)回收率在81.2% ～107.1%，MeSeCys的加標(biāo)回收率在87.2% ～116.0%。在所選取的農(nóng)作物樣品中三種硒形態(tài)的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均≤6.5%（表4），方法的重復(fù)性良好。

選取有機(jī)硒未檢出的黃豆、玉米、白菜、馬鈴薯和白蘿卜參考水稻籽粒樣品進(jìn)行回收率實驗，黃豆、玉米、白菜、馬鈴薯和白蘿卜中三種有機(jī)硒的加標(biāo)回收率分別為76.4%～93.8%、86.9%～108.2%、81.0%～93.8%、79.9% ～88.7%和80.9% ～92.3%，表明該方法適用于不同類型的樣品。

2.6.3 方法比較

表5將本研究建立的測定有機(jī)硒形態(tài)的方法與文獻(xiàn)中報道的HPLC-ICP-MS、HPLC-HG-AFS等方法進(jìn)行比較?？梢钥闯?，本方法測定的化合物檢出限和回收率可與文獻(xiàn)報道的方法相媲美。傳統(tǒng)的測定硒形態(tài)的方法只適用于某種或某類樣品的分析，本方法可降低基質(zhì)干擾，線性范圍更寬，應(yīng)用范圍更廣，可用于多種蔬菜谷物等農(nóng)作物的分析。因此，LC-Q Exactive Orbitrap MS可作為HPLC-ICP-MS的替代儀器來分析農(nóng)作物的有機(jī)硒形態(tài)。

表4 水稻籽粒中三種有機(jī)硒的加標(biāo)回收率和精密度Table 4 Standard recovery rate and precision tests of three kinds of organic selenium in rice grain

3 方法應(yīng)用——蔬菜和谷類中硒形態(tài)測定

3.1 蔬菜和谷類中有機(jī)硒含量特征

采用優(yōu)化好的前處理及檢測方法對采集的農(nóng)作物樣品中硒形態(tài)進(jìn)行分析。檢出率為30.43%，表6列出了部分檢出農(nóng)作物可食用部分有機(jī)硒含量。SeCys2、MeSeCys和SeMet在黃豆、玉米樣品中均有不同程度的檢出。水稻籽粒樣品中除MeSeCys外，其余兩種有機(jī)硒化合物均有檢出。SeCys2在白菜、馬鈴薯和白蘿卜這三種蔬菜中均未檢出。在黃豆、玉米和水稻籽粒谷物類樣品中SeMet占總有機(jī)硒含量的53.1% ～100.0%，占總硒含量的64.1% ～80.0%，說明谷類食品中的硒以硒代蛋氨酸為主，此結(jié)果與文獻(xiàn)中報道的大米和小麥中硒以硒代蛋氨酸為主一致［14，34］。與谷物類樣品不同的是，蔬菜類樣品中的硒以甲基硒代半胱氨酸為主，占總有機(jī)硒含量的58.8% ～100.0%，占總硒含量的35.7% ～37.4%。蔬菜中有機(jī)硒的含量與谷物產(chǎn)品相比較低，這可能是因為蔬菜中的硒主要通過土壤、根施硒肥或噴施葉面硒肥的方式獲得的，在生長周期不足的情況下，沒有得到很好的生物轉(zhuǎn)化，大部分硒還是以無機(jī)硒的形式存在。部分檢出有機(jī)硒的谷物和蔬菜樣品對硒的轉(zhuǎn)化率從強(qiáng)到弱依次為：玉米＞黃豆＞水稻籽粒＞白菜＞馬鈴薯＞白蘿卜。所檢出谷物和蔬菜樣品玉米對有機(jī)硒轉(zhuǎn)化能力最強(qiáng)，硒轉(zhuǎn)化率達(dá)72.73%。由此可見，谷物尤其是玉米可作為人體補(bǔ)充硒的重要來源。

表5 本方法與文獻(xiàn)中相關(guān)分析方法的比較Table 5 Comparison of performance with othermethods in the references

表6 部分檢出農(nóng)作物可食用部分有機(jī)硒含量Table 6 Organic selenium content in edible parts of some plants

3.2 不同地區(qū)農(nóng)作物硒含量比較

由于采集樣品時蔬菜未完全成熟，本研究僅將谷物作物的硒含量與國內(nèi)外研究作對比。本研究測定黑龍江水稻樣品有機(jī)硒含量為0.0～154.4μg/kg，整體上低于文獻(xiàn)報道湖北恩施富硒地區(qū)富硒水稻的有機(jī)硒含量80.0～1540.0μg/kg［35］，與陜西省安康市大米有機(jī)硒含量24.0～373.0μg/kg處于同一水平［30］。黑龍江玉米樣品有機(jī)硒含量為0.0～143.2 μg/kg，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于陜西省安康市玉米有機(jī)硒含量3668.0～10738.0μg/kg［30］。黑龍江大豆樣品硒含量為0.0～200.4μg/kg，與西班牙東南部豆類硒含量17.9～268.7μg/kg相當(dāng)［36］，低于江蘇省蘇州大豆硒含量1.5～123.6mg/kg［37］。通過對比發(fā)現(xiàn)調(diào)查區(qū)的谷物硒含量處于缺硒水平，植物體內(nèi)的硒含量與形態(tài)種類除了受植物本身對硒的遷移轉(zhuǎn)化機(jī)制和土壤硒含量的影響外，還受成土母質(zhì)、土壤類型、土壤pH值和有機(jī)質(zhì)含量等因素的影響。采集農(nóng)作物樣品的研究區(qū)域以黑土為主，還有少量的黑鈣土，該區(qū)域土壤呈堿性，pH值為7.21～8.24，土壤有機(jī)質(zhì)含量（18.9～26.2mg/g）比較高，研究區(qū)域農(nóng)作物硒含量較低，但該地區(qū)所采集的土壤硒總量（0.29～1.16mg/kg）整體處于足硒甚至富硒水平。因此，有必要開展東北地區(qū)農(nóng)作物的富硒機(jī)制研究，為農(nóng)作物科學(xué)種植、合理補(bǔ)硒、改善及預(yù)防缺硒性地方病提供科學(xué)的理論依據(jù)。

4 結(jié)論

本研究建立了高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜法測定多種農(nóng)作物中有機(jī)硒形態(tài)的方法。該方法的線性范圍廣，可廣泛應(yīng)用于富硒和非富硒多種農(nóng)作物有機(jī)硒的測定。此外，該方法的適用范圍廣，可用于多種蔬菜谷物等農(nóng)作物的分析，解決了現(xiàn)有方法只可測定某種或某類樣品的難題。

本研究對采集于東北黑龍江地區(qū)的水稻籽粒、玉米、大豆、馬鈴薯、白菜、尖椒和白蘿卜等46份樣品中的硒形態(tài)進(jìn)行分析研究，發(fā)現(xiàn)谷類以硒代蛋氨酸為主，蔬菜類以甲基硒代半胱氨酸為主。研究區(qū)域的農(nóng)作物中硒含量處于較低水平，有必要開展農(nóng)作物的富硒機(jī)制研究，為提升該地區(qū)人民健康水平提供科學(xué)支撐。