電針神庭、百會穴對大腦中動脈閉塞型大鼠認知功能的影響

徐芳媛，許金森，潘曉華*，黃倩茹，萬 隆，羅 來，朱佳敏

（1.福建中醫(yī)藥大學針灸學院，福建 福州350122；2.福建省中醫(yī)藥科學院，福建 福州350003；3.福建省經絡感傳重點實驗室，福建 福州350003）

腦卒中為我國目前最常見的疾病之一，其臨床表現(xiàn)多以神經感覺障礙、平衡能力減弱和記憶力減退為主［1-3］。目前對于腦卒中的治療無特效藥物，電針被廣泛應用于腦卒中的治療，神庭、百會穴為臨床的經驗效穴，既往已有大量文獻證實其有效性［4-6］。但是電針治療改善腦卒中認知功能的作用機制尚未明了，因此，本研究將通過電針神庭、百會穴對大腦中動脈閉塞模型（MCAO）大鼠3個行為學指標的影響，探討電針改善腦卒中患者認知功能的療效，為其臨床進一步推廣提供一定的參考依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗動物與分組 選用成年的SD清潔級雄性大鼠共18只，體質量為（300±20）g，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，飼養(yǎng)于福建醫(yī)科大學實驗動物中心［許可證號：SCXK（滬）2017-0005；合格證編號：201500558815］。飼養(yǎng)條件：溫度（22±2）℃，濕度（55±15）%，12 h明暗交替，自由進食飲水。18只大鼠按照隨機數(shù)字表法分為電針組、模型組和假手術組，每組6只，造模前先適應性飼養(yǎng)1周。實驗過程中均嚴格按照國際動物保護及使用指南的規(guī)定進行。

1.2 主要實驗器械與試劑 華佗牌30號0.5寸不銹鋼毫針、SDZ-Ⅱ型華佗牌電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；小動物呼吸麻醉系統(tǒng)（深圳瑞沃德生命科技公司，型號：R407）；L3800號大鼠用MCAO線栓（廣州佳靈生物技術有限公司）；潔凈工作臺（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）。

1.3 造模 參考Longa改良線栓法［7］制備大鼠MCAO模型，在電針組和模型組的大鼠頸部左側進行手術，操作方法：大鼠術前禁食不禁水12 h，5%異氟烷將大鼠麻醉，在造模過程中需觀察大鼠對手術刺激的反應以調節(jié)異氟烷濃度、流量來維持麻醉的深度，使大鼠不至于在手術過程中清醒或者死亡；將大鼠固定、消毒后于頸部前正中線切開皮膚，鈍性分離左側頸總動脈（CCA）、頸內動脈（ICA）、頸外動脈（ECA）；結扎ECA，使用動脈夾夾閉ICA、ECA的遠心端；在ECA距CCA的分叉1 cm處剪開一個小口，將大鼠用MCAO線栓緩慢沿ECA插入ICA，控制進線的深度為18～22 mm，然后縫合大鼠頸部傷口并消毒；2 h后用剪刀把露出體外的線栓減去，實現(xiàn)再灌注損傷。等待大鼠完全蘇醒后，對所有的大鼠進行提尾實驗觀察［8］：將大鼠的尾巴提起，如果發(fā)現(xiàn)其右前肢呈現(xiàn)屈曲的狀態(tài)，那么就表明造模成功。假手術組只將大鼠頸部皮膚剪開，鈍性分離CCA、ICA、ECA后即縫合，不予結扎和插線。

1.4 干預措施 電針組于造模后24 h進行電針干預，參照《實驗針灸學》［9］選取大鼠神庭、百會穴，使用華佗牌30號0.5寸不銹鋼毫針沿頭部向上斜刺0.2～0.3 cm，連接SDZ-Ⅱ華佗牌電子針療儀，打開電源，選取疏密波，頻率為2～10 Hz，調整至大鼠耳朵輕微抖動，且大鼠不撕叫、不掙扎為度。每次干預時間為20 min，每天1次，連續(xù)7 d。模型組和假手術組不予干預。

1.5 檢測指標

1.5.1 神經行為學評分 在干預第1天、第7天根據(jù)Longa法［10］對3組大鼠進行神經行為學評分，判斷其神經功能缺損的情況。0分：無神經功能缺失癥狀；1分：不能完全伸展患側前爪；2分：行走時向患側轉圈；3分：行走時向患側傾倒；4分：不能自主行走，意識喪失。

1.5.2 平衡木實驗評分 在干預第1天、第3天、第7天對3組大鼠進行平衡木實驗評分，判斷其平衡能力的表現(xiàn)。將大鼠放置在1根寬1.5cm、長30 cm、高于地面30 cm的木條上，對其進行觀察。實驗前1周對各組大鼠進行訓練，每天8點和17點各訓練1次，每次10 min，以大鼠能順利在平橫木上保持穩(wěn)定為標準。評分為0～6分，0分：大鼠在平衡木上能夠爬行并且保持平衡穩(wěn)定且時間≥60 s；1分：大鼠在平衡木上需要抓緊平衡木邊緣才能保持平衡穩(wěn)定且時間≥60 s；2分：大鼠需抓緊平衡木但是同時有一只腳落下才能保持平衡穩(wěn)定且時間≥60 s；3分：大鼠需要抓緊平衡木但是同時有兩只腳落下，能夠堅持在平衡木上的時間≥60 s；4分：大鼠試圖在平衡木上保持平衡，但落下，同時能夠堅持在平衡木上的時間≥40 s；5分：大鼠試圖在平衡木上保持平衡，但落下，同時能夠堅持在平衡木上的時間≥20 s；6分：落下，沒有試圖保持平衡或抓住平衡木，能夠堅持在平衡木上的時間≤20 s［11］。

1.5.3 Morris水迷宮實驗 分為定位航行實驗和空間探索實驗。在干預第3～6天每天對3組大鼠進行定位航行實驗，記錄其逃避潛伏期；第7天對3組大鼠進行空間探索實驗，記錄其穿越平臺的次數(shù)。把圓形水迷宮裝置等分為4份，按順時針方向標記為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4個象限，同時將平臺放置于第Ⅲ象限，實驗前2 d將3組大鼠放置在水迷宮中進行適應性訓練，使其能夠在水中正常找到平臺。定位航行實驗操作步驟［12］：將3組大鼠根據(jù)順時針的方向從水池中設置好的4個象限面向池壁放入水中，如果大鼠在90 s內能夠找到平臺并且爬上平臺同時停留了3 s以上，即認為大鼠找到了平臺，大鼠進入水中到爬上平臺時間稱為逃避潛伏期；如果大鼠在90 s內不能夠找到平臺，一直在水中游動，需引導大鼠爬上平臺，并且停留10 s，逃避潛伏期就計為90 s?？臻g探索實驗操作步驟［12］：撤除水中的平臺，在上述設置好的4個象限將3組大鼠放入水中，使其自由游泳90 s，分別記錄各組大鼠90 s內穿越原平臺象限的次數(shù)。

1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 27.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料符合正態(tài)分布的以（±s）表示，2組間比較采用獨立樣本T檢驗，多組間比較采用One-WayAnova方法進行檢驗；方差齊時，采用Least Significant Difference方法；方差不齊時，采用Dunnett T3方法；不符合正態(tài)性分布的采用非參數(shù)檢驗。

2 結 果

2.1 3組大鼠神經功能缺損評分比較 見表1。

表1 3組大鼠神經功能缺損評分比較（±s） 分

表1 3組大鼠神經功能缺損評分比較（±s） 分

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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2.2 3組大鼠平衡木實驗評分比較 見表2。

表2 3組大鼠平衡木實驗評分比較（±s） 分

表2 3組大鼠平衡木實驗評分比較（±s） 分

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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2.3 3組大鼠逃避潛伏期和穿越平臺次數(shù)比較 見表3、表4。

表3 3組大鼠逃避潛伏期比較（±s）s

表3 3組大鼠逃避潛伏期比較（±s）s

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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表4 3組大鼠穿越平臺次數(shù)比較（±s） 次

表4 3組大鼠穿越平臺次數(shù)比較（±s） 次

注：與假手術組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05。

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3 討 論

本研究結果顯示：電針第7天電針組神經功能缺損評分高于模型組，但低于假手術組，說明電針干預可以改善MACO大鼠神經功能缺損程度；電針第3天電針組平衡木實驗評分高于模型組，但低于假手術組，電針第7天電針組平衡木實驗評分高于模型組，但低于假手術組，同時低于第3天電針組的評分，說明電針干預可以改善MACO大鼠平衡能力的程度，并且隨著治療時間的增加，改善程度越明顯；電針第3天電針組與模型組逃避潛伏期無差異，且均短于假手術組，電針第4～5天電針組短于模型組，長于假手術組，電針第6天電針組明顯短于模型組，且與假手術組無差異，說明電針干預可以促進MACO大鼠方向定位能力的恢復，同時隨著干預時間的增加，改善效果越明顯；電針第7天電針組穿越平臺次數(shù)多于模型組，少于假手術組，說明電針干預可以改善MACO大鼠學習記憶能力。

神庭穴為督脈之要穴，與百會穴相配可醒腦開竅，調和一身之陰陽。督脈入絡腦，與腦相關，刺激督脈可參與腦的一系列調節(jié)。同時兩個穴位都位于頭部，也屬于近端取穴，可以明顯地改善和調節(jié)認知功能［13］。電針通過連續(xù)的微電流對兩個局部穴位進行刺激［14］，能夠改善手針治療無法做到的連續(xù)而持久的行針，顯著提高療效。同時微電流的刺激也能夠影響大腦的皮部，激發(fā)人體自身調節(jié)的功能，從而進一步增加大腦血液循環(huán)和供應，有助于疾病的好轉，同時促進患者認知功能的改善，提高其生活質量。本實驗為電針改善神經功能缺損、平衡能力和記憶認知能力提供了一定的理論依據(jù)，但是電針組認知功能雖均有明顯好轉，仍然無法恢復至正常狀態(tài)，可能與電針療程，刺激強度、次數(shù)、頻率等因素有關。后續(xù)實驗可以根據(jù)這些相關因素進行設計探索，以明確影響電針治療腦卒中療效的具體因素。