BNP、Hcy、bFGF在非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清中的表達(dá)及意義*

張倩, 王倩薇

河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科(河南開(kāi)封 475000)

肺癌屬于一種在臨床上較為常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中以非小細(xì)胞肺癌較為常見(jiàn)，早期癥狀表現(xiàn)為咳嗽、痰血、胸部疼痛、低熱等，晚期癥狀表現(xiàn)為體重減輕、疲乏、食欲下降以及呼吸困難、咳血等，嚴(yán)重威脅著患者的生命安全[1]。而肺栓塞屬于非小細(xì)胞肺癌的主要并發(fā)癥之一，肺栓塞的發(fā)生不僅會(huì)增加患者臨床治療的難度，還增加患者病死率，威脅患者生命健康[2]。研究表明[3]，肺栓塞主要病理特征為呼吸功能障礙、肺循環(huán)障礙，是由多種栓子栓塞肺動(dòng)脈所引發(fā)的一組臨床綜合征，此病早期癥狀表現(xiàn)為胸痛、呼吸困難、暈厥等，隨著疾病的進(jìn)展患者會(huì)出現(xiàn)咳嗽、咳血、心悸等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致患者死亡。而非小細(xì)胞肺癌自身較為嚴(yán)重，加之肺栓塞的出現(xiàn)，在一定程度上增加了患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)，因此對(duì)于非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞行早期診斷，對(duì)降低患者死亡具有重要的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年12月至2019年12月我院收治的非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者80例作為合并肺栓塞組，男46例，女34例，年齡35～65歲，平均(45.6±2.3)歲，根據(jù)肺部CT計(jì)算栓塞面積百分比對(duì)患者疾病嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)(1級(jí)：<25%，2級(jí)：25%～49%，3級(jí)：50%～74%，4級(jí)：75%～99%，5級(jí)：100%)：1級(jí)13例，2級(jí)：20例，3級(jí)：23例，4級(jí)：19例，5級(jí)：5例；根據(jù)患者預(yù)后情況分為存活、死亡，其中存活54例，死亡26例。選取同期收治的非小細(xì)胞肺癌未合并肺栓塞患者80例作為未合并肺栓塞組，男43例，女37例，年齡35～68歲，平均(46.5±2.5)歲；另外選取同期于我院行健康體檢的健康志愿者80例作為健康對(duì)照組，男40例，女40例，年齡32～65歲，平均(44.9±2.7)歲。3組研究對(duì)象在性別、年齡等資料中對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本次研究所有患者及其家屬均知情，且簽署了知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：非小細(xì)胞肺癌患者經(jīng)病理組織學(xué)檢測(cè)確診；肺栓塞患者經(jīng)多層螺旋CT肺動(dòng)脈造影確診，健康對(duì)照組無(wú)肺部疾病史，身體健康。

排除標(biāo)準(zhǔn)：彌漫性血管內(nèi)凝血者；合并肺結(jié)核、慢性阻塞性肺疾病、肺動(dòng)脈高壓者；合并心腦血管疾病者；其他部位栓塞者；合并糖尿病、高血壓者；合并其他腫瘤者；溝通障礙者；精神障礙者；近2周內(nèi)使用抗凝、抗血小板聚集、卡馬西平、甲氨蝶呤等藥物者。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 抽取清晨空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80℃保存待檢。

1.2.2 腦鈉肽(BNP)檢測(cè)方法 使用ADVIA Centaur XP免疫發(fā)光分析儀及配套試劑(德國(guó)西門子公司)采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清BNP水平。

1.2.3 同型半胱氨酸(Hcy)檢測(cè)方法 使用Roche MODULAR全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑(上海高蹤醫(yī)療器械科技有限公司)采用循環(huán)酶法檢測(cè)所有研究對(duì)象血清Hcy水平，正常值參考范圍為<20 μmol/L。

1.2.4 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)檢測(cè)方法 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)，將血清樣本置于室溫后，取出試劑盒，標(biāo)記酶標(biāo)板，制作標(biāo)準(zhǔn)品，以1∶2的稀釋液稀釋樣品；在反應(yīng)孔上依次加入稀釋好的待測(cè)血清及標(biāo)準(zhǔn)品100 μL/孔，放置37℃恒溫孵育箱中濕育2 h；用專用洗滌液將反應(yīng)板清洗3次后，加入抗體工作液(1∶100倍稀釋后)100 μL/孔，置于37℃恒溫孵育箱中濕育45 min；繼續(xù)清洗反應(yīng)板4次后，在反應(yīng)孔內(nèi)加入TMB溶液100 μL/孔，置于37℃恒溫孵育箱中濕育45 min后在反應(yīng)孔內(nèi)加入終止液100 μL/孔以終止反應(yīng)，在450 nm波長(zhǎng)(參考波長(zhǎng)570～630 nm)測(cè)定吸光度，顏色反應(yīng)深淺與bFGF水平成正比，經(jīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算bFGF水平。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對(duì)象血清BNP、Hcy、bFGF水平比較 未合并肺栓塞組、合并肺栓塞組血清BNP、Hcy、bFGF水平高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；合并肺栓塞組血清BNP、Hcy、bFGF水平高于未合并肺栓塞組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組研究對(duì)象血清BNP、Hcy、bFGF水平比較

2.2 BNP、Hcy、bFGF與非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系 BNP、Hcy、bFGF隨著非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者疾病嚴(yán)重程度的增加逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 BNP、Hcy、bFGF與非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系

2.3 BNP、Hcy、bFGF與非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者死亡、存活的關(guān)系 非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞死亡患者血清BNP、Hcy、bFGF水平高于存活患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 BNP、Hcy、bFGF與非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者死亡、存活的關(guān)系

2.4 BNP、Hcy、bFGF之間相關(guān)性分析 BNP、Hcy、bFGF之間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析，BNP、Hcy之間呈正相關(guān)(r=0.265,P=0.018)；BNP、bFGF之間呈正相關(guān)(r=0.295,P=0.008)；Hcy、bFGF之間呈正相關(guān)(r=0.284,P=0.011)。見(jiàn)圖1。

圖1 BNP、Hcy、bFGF之間相關(guān)性分析

3 討論

肺栓塞是臨床上較為常見(jiàn)的一種肺血管疾病，此病發(fā)病較為突然、隱匿，且在發(fā)病早期無(wú)特異性癥狀，因此此類患者預(yù)后大多較差，病死率較高[4]。研究發(fā)現(xiàn)[5]，肺栓塞是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌患者死亡的主要危險(xiǎn)因素之一，但因肺栓塞與非小細(xì)胞肺癌患者部分癥狀較為相似，臨床上對(duì)非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者的漏診率和誤診率較高。因此尋找有效診斷非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞的特異性指標(biāo)，對(duì)改善患者預(yù)后降低病死率具有重要的意義。

BNP屬于一種可反映心室功能障礙的特異性指標(biāo)，在心室符合增加或者室壁張力增加的刺激下由心室肌細(xì)胞合成并分泌[6]。目前臨床上已有研究發(fā)現(xiàn)[7]，非小細(xì)胞肺癌血清BNP顯著升高，其原因可能與機(jī)體自我保護(hù)機(jī)制相關(guān)，心臟激素可經(jīng)多種信號(hào)通路，發(fā)揮其抗腫瘤的作用。而在肺栓塞發(fā)生時(shí)，栓子所引發(fā)的機(jī)械堵塞會(huì)減少有效肺血管床，增加肺循環(huán)阻力，進(jìn)而增加右室室壁張力，最終促進(jìn)BNP合成、分泌，使其呈現(xiàn)為高表達(dá)[8]。李雙拾等[9]在其研究證實(shí)BNP與急性肺栓塞的發(fā)生相關(guān)。柏新樂(lè)等[10]在其研究中發(fā)現(xiàn)，BNP在急性肺栓塞患者中呈現(xiàn)為高表達(dá)，且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。在本研究中，與單純非小細(xì)胞肺癌患者、健康對(duì)照相比，非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清BNP水平升高，隨著患者疾病進(jìn)展逐漸升高，且在死亡患者中高表達(dá)更為顯著，說(shuō)明BNP在非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞中高表達(dá)，且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

Hcy屬于一種含硫氨基酸，為蛋氨酸代謝過(guò)程中較為重要的中間產(chǎn)物，Hcy水平升高時(shí)急性肺栓塞發(fā)病和靜脈血栓形成的危險(xiǎn)因素[11]。有研究發(fā)現(xiàn)[12-13]，當(dāng)Hcy含量改變是，可改善患者凝血、抗凝血、纖溶系統(tǒng)功能，促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)。當(dāng)Hcy水平進(jìn)一步升高后可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血栓素A2分泌，經(jīng)外源性凝血途徑將血小板激活，抑制凝血物質(zhì)，使得血液處于高凝狀態(tài)，最終促進(jìn)肺栓塞的發(fā)生[14]。馬碧蔓等[15]在其研究中分析Hcy在急性肺栓塞患者血清中的表達(dá)，其結(jié)果證實(shí)，Hcy在肺栓塞患者血清中高表達(dá)。基于上述研究，在本文研究中檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清Hcy水平，結(jié)果顯示，與單純非小細(xì)胞肺癌患者、健康對(duì)照相比，非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清Hcy水平升高，隨著患者疾病進(jìn)展逐漸升高，且在死亡患者中高表達(dá)更為顯著，說(shuō)明Hcy在非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞中高表達(dá)，且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

bFGF為一種血管新生調(diào)控因子，在誘導(dǎo)新血管生成、促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂中具有重要的作用，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和腫瘤新血管生成相關(guān)[16]。臨床研究發(fā)現(xiàn)[17-18]，在機(jī)體正常狀態(tài)下，bFGF含量較低，在細(xì)胞DNA合成、刺激血管生成、促細(xì)胞有絲分裂中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，但當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變后，其扮演著致癌的作用，在腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)為高表達(dá)，其異常升高可促進(jìn)腫瘤血管新生，增加腫瘤組織血供，為腫瘤生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。bFGF在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)，參與此病的發(fā)展[19]。而目前臨床上并未有研究認(rèn)為，bFGF與肺栓塞相關(guān)，僅有一項(xiàng)基礎(chǔ)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)[20]，經(jīng)藥物干預(yù)可降低肺栓塞大鼠bFGF表達(dá)。在本文研究中檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清bFGF水平，結(jié)果顯示，與單純非小細(xì)胞肺癌患者、健康對(duì)照相比，非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清bFGF水平升高，隨著患者疾病進(jìn)展逐漸升高，且在死亡患者中高表達(dá)更為顯著，此結(jié)果說(shuō)明，bFGF在非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞中高表達(dá)，且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)。

另外，本研究還對(duì)BNP、Hcy、bFGF之間相關(guān)性進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三者之間呈現(xiàn)為正相關(guān)，此結(jié)果提示著，三者可能共同參與非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞的發(fā)生，臨床上可依據(jù)三者在此病中高表達(dá)，對(duì)患者行早期診斷，改善患者預(yù)后，降低病死率。

綜上所述，BNP、Hcy、bFGF在非小細(xì)胞肺癌合并肺栓塞患者血清中高表達(dá)，且與患者疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，共同參與此病的發(fā)展。