慢性乙型肝炎患者外周血Treg/Th17比值平衡及其對替比夫定治療效果的影響*

王 雪，瞿發(fā)林，戚偉利，錢 薇

外周血調節(jié)性T淋巴細胞(Treg)和輔助性T細胞17(Th17)是近年來新發(fā)現(xiàn)的CD4+T淋巴細胞的兩個亞群，且兩者存在復雜的功能相關關系[1-5]。本研究分析了外周血Treg/Th17比值平衡對替比夫定治療的CHB患者效果的影響，為臨床進一步優(yōu)化CHB患者的抗病毒治療提供一定的臨床數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2019年2月～2020年3月我院收治的CHB患者123例，男101例，女22例；年齡為22～57歲，平均年齡為(37.5±7.2)歲；體質指數(shù)(BMI)為19.5～27.5 kg/m2，平均為(23.1±3.3)kg/m2；血清HBeAg陽性98例，HBV DNA載量為4.1～8.1 lg cps/mL，平均為(6.5±1.7)lg cps/mL；門診就診的乙型肝炎病毒攜帶者112例，男93例，女19例；年齡為22～59歲，平均年齡為(37.8±7.9)歲；BMI 為19.8～26.5 kg/m2，平均為(22.5±3.2)kg/m2。CHB和病毒攜帶者符合慢性乙型肝炎防治指南的診斷標準[6]。另選擇在我院進行健康體檢的志愿者95例，男82例，女13例；年齡為21～58歲，平均年齡為(36.9±7.5)歲；BMI 為19.0～26.5 kg/m2，平均為(22.6±3.2)kg/m2。三組人群性別和年齡比較，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。排除肝硬化、惡性腫瘤、妊娠或哺乳期婦女、存在心、腦血管疾病者。本研究經(jīng)本院醫(yī)學倫理委員會批準同意，所有研究對象簽署知情同意書。

1.2 治療方法 給予CHB患者替比夫定(北京諾華制藥有限公司，國藥準字H20070028)600 mg口服，1次/d，連續(xù)治療48 w。經(jīng)抗病毒治療48 w，血清HBV DNA載量與基線比，下降幅度<2 lg copies/ml者被判定為不應答。

1.3 指標檢測 采用實時熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA載量(試劑盒購于東北制藥集團股份有限公司)；使用美國貝克曼庫爾特公司生產(chǎn)的X7型全自動生化分析儀檢測天冬氨酸氨基轉移酶(AST)和丙氨酸氨基轉移酶(ALT)；采用ELISA法檢測血清HBeAg(試劑盒購于上海信帆生物科技有限公司)；使用貝克曼庫爾特商貿(mào)有限公司生產(chǎn)的Gallios型流式細胞儀檢測外周血Treg和Th17細胞百分比，并計算Treg/Th17比值。

2 結果

2.1 三組人群外周血Treg和Th17細胞百分比及Treg/Th17比值比較 CHB患者外周血Treg和Th17百分比及Treg/Th17比值均顯著高于病毒攜帶者或健康人(P<0.05，表1)。

表1 三組人群外周血Treg和Th17細胞及Treg/Th17比值比較

2.2 CHB患者對治療的應答情況 在治療12 w、24 w和48 w，CHB患者血清ALT復常率、HBeAg陰轉率和HBV DNA陰轉率見表2。

表2 123例CHB患者對治療的應答率(%)

2.3 應答與不應答組有關因素比較 本組123例CHB患者經(jīng)替比夫定治療48 w后，有21例(17.1%)患者出現(xiàn)治療不應答；不應答組復治、服藥依從性差、基線血清ALT、AST、HBV DNA載量、Treg細胞百分比和Treg/Th17比值與應答組比，差異顯著(P<0.05，表3)。

表3 應答與不應答組有關因素比較

2.4 影響替比夫定治療的CHB患者不應答的多因素分析 以復治、服藥依從性、基線HBV DNA載量、血清ALT水平、Treg細胞百分比和Treg/Th17比值為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，復治、基線HBV DNA載量、血清ALT水平和Treg/Th17比值均為影響替比夫定治療應答的因素(OR=3.695、OR=3.232、OR=3.866、OR=4.039，P均<0.05，表4)。

2.5 外周血Treg細胞/Th17細胞比值對替比夫定治療CHB患者治療不應答的預測價值 經(jīng)ROC分析顯示，血Treg/Th17比值預測替比夫定治療CHB患者不應答的最佳截斷點為0.83，AUC值為0.923(95%CI：0.860～0.963)，其判斷的靈敏度為81.0%，特異度為87.3%，準確度為91.1%(圖1)。

圖1 血Treg/Th17比值預測替比夫定治療CHB患者應答的ROC分析

表4 影響替比夫定治療應答的多因素Logistic回歸分析

3 討論

致使HBV持續(xù)感染的主要原因可能是由于病毒感染機體后促使人體抗病毒免疫功能出現(xiàn)異常，但其確切的免疫學機制尚不明確[7，8]。Treg細胞和Th17細胞均為CD4+T淋巴細胞亞型，相關研究報道[9，10]發(fā)現(xiàn)Treg細胞和Th17細胞與CHB患者接受核苷(酸)抗病毒治療的效果有關。故而，探討CHB患者外周血Treg/Th17比值平衡及其對替比夫定治療效果的影響具有重要的臨床意義。

本研究結果表明，CHB患者外周血Treg細胞和Th17細胞及Treg/Th17比值均顯著高于病毒攜帶者或健康人，提示CHB患者存在細胞免疫功能異常。相關研究表明[11，12]，CHB的發(fā)生和發(fā)展過程實質上是機體免疫系統(tǒng)與病毒之間相互作用的過程。Treg細胞可抑制免疫反應，在免疫平衡、維持自身免疫耐受等方面具有重要的作用[13，14]。Th17細胞具有促炎作用，其主要分泌白細胞介素-6、白細胞介素-17等細胞因子，與機體的免疫功能密切相關，參與機體的損傷過程[15，16]。當機體處于穩(wěn)定或無炎癥損傷時，Treg細胞與Th17細胞處于動態(tài)平衡狀態(tài)，但若機體出現(xiàn)炎癥或損傷等情況時，Treg細胞和Th17細胞分化發(fā)生改變，致使Treg/Th17比值失衡，進而導致自身免疫性疾病或腫瘤的發(fā)生[17，18]。

本研究123例CHB患者經(jīng)替比夫定治療后治療不應答發(fā)生率為17.1%，與既往報道相近[19]，進一步說明經(jīng)替比夫定抗病毒治療的CHB患者不應答發(fā)生率較高，需引起臨床醫(yī)生的重視。本研究結果顯示，不應答組復治、服藥依從性、血清ALT水平低、基線HBV DNA載量高、Treg細胞和Treg/Th17比值顯著不同于應答組，經(jīng)Logistic回歸分析，結果顯示，復治、基線HBV DNA載量、血清ALT水平和Treg/Th17比值均為影響CHC患者在替比夫定治療后不應答的獨立預測因素，需加強入組篩選，逐一控制各項危險因素的不良影響，以減少治療不應答發(fā)生率。相關研究也發(fā)現(xiàn)[20]，復治和血清ALT水平等為CHB患者經(jīng)替比夫定治療后出現(xiàn)不應答的危險因素，在臨床上需引起重視。本研究經(jīng)ROC分析顯示，外周血Treg/Th17比值預測替比夫定治療CHB患者不應答的最佳截斷點為0.83，其AUC為0.923，預測的靈敏度為81.0%，特異度為87.3%，準確度為91.1%，提示應用Treg/Th17比值評估替比夫定治療CHB患者效果具有較高的臨床價值，可作為早期檢測指標，對替比夫定治療的CHB患者進行早期的監(jiān)測并積極采取有效的治療措施，以提高臨床治療效果。