野生與種植博落回各部位生物堿含量分析

蘇海蘭，鄭梅霞，陳宏, 李永，周貴斌，朱育菁

摘要：探究野生與種植博落回不同部位的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿的含量差異。采集明溪野生、明溪種植、光澤野生的博落回樣品，利用HPLC方法對各部位原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量進行測定，并利用SPSS 180進行數據的統(tǒng)計與分析。研究結果表明，野生與種植博落回除莖部中的原阿片堿含量和葉部中的別隱品堿外，其他生物堿含量差異不顯著。不同的生長條件下博落回同一部位的生物堿含量差異較小，而同一生長條件下博落回不同部位的生物堿含量差異較大，其中根部各生物堿含量更為豐富。

關鍵詞：博落回;生物堿;野生;種植;不同部位

中圖分類號：R 2841 文獻標志碼：A文章編號：0253-2301（2021）02-0032-05

DOI： 1013651/jcnkifjnykj202102006

Analysis on Alkaloid Content in Different Parts of the Wild and the Planted Macleaya Cordata

SU Hailan1， ZHENG Meixia1， CHEN Hong1， LI Yong2， ZHOU Guibin2， ZHU Yujing1*

（1. Institute of Agricultural Biological Resources， Fujian Academy of Agricultural Sciences， Fuzhou，

Fujian 350003， China; 2. Fujian South Pharmaceuticals Co.， Ltd.， Sanming， Fujian 365200， China）

Abstract： In order to investigate the differences in the content of fumarine， allocryptopine， sanguinarine， chelerythrine and total alkaloids in different parts of the wild and the planted Macleaya cordata， the samples were collected from the wild and the planted Macleaya cordata in Mingxi County and the wild Macleaya cordata in Guangze County. Then， the contents of fumarine， allocryptopine， sanguinarine， chelerythrine and total alkaloids in each part were determined by HPLC method， and SPSS 180 was used for the data statistics and analysis. The results showed that there was no significant difference in the contents of other alkaloids between the wild and the planted Macleaya cordata except for the contents of fumarine in the stem and allocryptopine in the leaves. Under different growth conditions， the content of alkaloids in the same part of Macleaya cordata had little difference， while under the same growth condition， the content of alkaloids in different parts of Macleaya cordata had great difference， among which the content of alkaloids in the root was more abundant.

Key words： Macleaya cordata; Alkaloids; Wild; Planting; Different parts

博落回Macleaya cordata Wild.R.Br.系罌粟科博落回屬多年生植物，在我國分布廣泛＼[1＼]。博落回屬植物具有殺蟲、止癢、清熱、解毒等功效，在臨床上用于治療肺炎、肝炎和皮膚病等，還有抗腫瘤活性作用＼[2-4＼]。明確野生與種植條件下不同部位的生物堿含量差異，對于增加博落回的利用效率，滿足市場供給需求具有重要意義。博落回屬植物含有多種化學成分＼[5＼]，現(xiàn)代藥理研究表明其生物堿為主要的活性成分＼[6＼]。生物堿是由氨基酸衍生而來的低分子量、含氮且不包括氨基酸、蛋白質、核苷、葉啉和膽堿甲胺等開鏈的簡單脂肪胺的有機化合物。作為一類重要的次生代謝產物，生物堿具有抵抗食草動物和抗病原體的作用。研究表明博落回根和地上部分可以分離出血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿、去甲血根堿、6丙酮基二氫白屈菜紅堿、博落回根堿、二氫血根堿等多種生物堿成分＼[7-8＼]。其中博落回的主要生物堿成分為血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿。杜先華等＼[9＼]研究表明適宜濃度的血根堿對腸癌細胞和肺癌細胞有一定的抑制效果。李杰等＼[10＼]研究表明，不同濃度的血根堿、白屈菜紅堿、原阿片堿、別隱品堿可以促進豬腸上皮細胞的增殖。

隨著藥材需求量的不斷增加與藥用資源的匱乏，人工種植成為藥用植物生產的重要手段。不同的生長條件會對植物的生物堿含量產生一定影響，并且植株不同部位的生物堿含量也會有所不同。張之鵬＼[11＼]研究表明鐵皮石斛在野生條件下生物堿含量高于苗床栽培下的含量，并且隨著栽培年限的增加生物堿含量逐漸遞增。趙鳳春＼[12＼]研究表明，苦參不同部位的生物堿含量存在較大差異，其中種子與藥用部位的含量相近且為最高，其次為花，而其他部位的生物堿含量很低。目前對博落回的藥用活性成分的鑒定研究較多，而缺乏對野生與種植條件下不同部位的生物堿含量差異的研究。本研究通過測定野生與種植條件下博落回不同部位原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量，分析比較不同樣品間各部位生物堿含量的差異，進一步明確博落回各部位生物堿含量的影響因子，為后續(xù)進一步提高博落回的藥用價值提供理論依據。

1材料與方法

蘇海蘭等：野生與種植博落回各部位生物堿含量分析2021年第2期2021年第2期蘇海蘭等：野生與種植博落回各部位生物堿含量分析11主要儀器

1200系列G1311A型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;JP030型超聲波清洗機（深圳市結盟清洗設備有限公司）;sartoriusBSA124S分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）;恒溫水浴鍋B260（上海亞榮生化儀器廠）;eppendorf5418R型離心機（上海實維實驗儀器技術有限公司）。

12主要材料與試劑

野生和種植博落回樣品于2019年5月采自福建省三明市明溪縣和南平市光澤縣，未結果，植株分為根、莖、葉三部分。標準品血根堿（SAN）、白屈菜紅堿（CHE）、原阿片堿（PRO）（純度≥98%，上海源葉生物有限公司）;標準品別隱品堿（ALL）（純度≥98%，成都瑞芬思生物科技有限公司）;無水甲醇、無水乙醇（分析純，西隴科學股份有限公司）;乙腈（分析純，德國simark公司）;礦泉水（娃哈哈集團）;磷酸（分析純，上海阿拉丁試劑有限公司）。

13標準溶液的制備

分別精密稱取原阿片堿、別隱品堿適量溶于50%甲醇（含1%鹽酸）溶液，配成質量濃度為017 mg·mL-1的原阿片堿和別隱品堿的儲備液，冰箱冷藏保存。分別精密稱取血根堿、白屈菜紅堿適量溶于50%甲醇（含1%鹽酸），配成質量濃度為025 mg·mL-1的血根堿和白屈菜紅堿的儲備液，冰箱冷藏保存。

14博落回樣品預處理

博落回根、莖、葉分別洗凈，于60℃電熱鼓風機中烘干至樣品恒重，通過粉碎機和石臼將樣品研磨成粉末并過50目篩備用。

15試驗方法

151博落回生物堿的提取生物堿的提取采用超聲甲醇補足提取法＼[13＼]（ultrasonic assisted methanol complement extraction，UAMCE）。精確稱取博落回樣品1 g粉末至平底燒瓶，加入100 mL 50%甲醇（含1%鹽酸），稱定重量;密封后于35℃超聲60 min， 超聲功率為180 W;待冷卻后補足失重，取出放冷至室溫，離心，取上清液用022 μm濾膜過濾，備用。

152博落回生物堿的HPLC分析采用Kromasil1005C18色譜柱（Dim：46 mm×250 mm，Part/Serial：M05CLA25/e124315）;流動相為01%磷酸乙腈（A）和01%磷酸水（B）;體積流量為10 mL·min-1;進樣量為5 μL。檢測波長為284 nm。以原阿片堿、別隱品堿、血根堿和白屈菜紅堿標準樣品為對照，根據峰面積和濃度的線性關系，分析4種生物堿含量和總生物堿含量。

153數據分析采用SPSS 180對試驗數據進行顯著性分析。

2結果與分析

21野生與種植博落回生物堿含量比較

211野生與種植博落回根部生物堿含量比較野生與種植博落回根部各生物堿含量見表1。光澤野生樣品的原阿片堿含量最高，且與明溪野生樣品有顯著差異。別隱品堿含量最高的是明溪種植樣品，血根堿含量最高的是明溪野生樣品和光澤野生樣品，白屈菜紅堿含量最高的是光澤野生樣品，總生物堿含量最高的是明溪種植樣品。

212野生與種植博落回莖部生物堿含量比較野生與種植博落回莖部各生物堿含量見表2。明溪種植樣品的原阿片堿含量最高，且各處理間均有顯著差異。別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量最高的是明溪種植樣品，其中明溪種植樣品、明溪野生樣品的別隱品堿含量與光澤野生樣品有顯著差異，總生物堿各處理間均有顯著差異，血根堿和白屈菜紅堿各樣品間沒有顯著差異。

213野生與種植博落回葉部生物堿含量比較野生與種植博落回葉部各生物堿含量見表3。明溪種植樣品的原阿片堿含量最高，但各處理間沒有顯著差異。別隱品堿和總生物堿含量最高的是明溪種植樣品，其中明溪種植樣品的別隱品堿含量與明溪野生樣品和光澤野生樣品間均有顯著差異，總生物堿含量與明溪野生樣品及光澤野生樣品均無顯著差異。血根堿含量最高的是光澤野生樣品，與明溪種植樣品的血根堿含量有顯著差異。白屈菜紅堿含量最高的是光澤野生樣品，各樣品間沒有顯著差異。

22博落回不同部位生物堿含量比較

221明溪種植博落回各部位生物堿含量比較明溪種植的博落回各部位生物堿含量見表4。葉部原阿片堿含量最高，且各部位間有顯著差異。根部的別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量最高，根莖葉各部位的原阿片堿、別隱品堿和總生物堿含量存在顯著差異。

222明溪野生博落回各部位生物堿含量比較明溪野生的博落回各部位生物堿含量見表5。根部的原阿片堿別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量最高，根部與莖部的原阿片堿含量有顯著差異，并且根部的別隱品堿、總生物堿含量與葉部和莖部有顯著差異。

223光澤野生博落回各部位生物堿含量比較光澤野生的博落回各部位生物堿含量見表6。根部原阿片堿含量最高，葉部與其余兩部位間有顯著差異。根部的別隱品堿和總生物堿含量最高，根部兩種生物堿含量均與莖部差異顯著。葉部的血根堿含量最高，與莖部和根部差異顯著。葉部和根部的白屈菜紅堿含量相同，均與莖部的白屈菜紅堿含量差異顯著。

3討論與結論

不同的生長條件下，博落回的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿的含量存在差異，明溪種植的博落回根莖葉中總生物堿含量均為3個樣品中最高，并且莖部中的原阿片堿含量和葉部中的別隱品堿含量均為最高。其余樣品同一部位野生與種植差異不明顯。劉秀斌等＼[14＼]研究表明博落回根、莖、葉、果同一器官中4種生物堿含量動態(tài)變化趨勢整體上有一定的相似性。鐘明等＼[15＼]研究表明博落回根、莖、葉和果實在不同時期所含生物堿的種類和含量不同。博落回不同器官生長期內4種生物堿的代謝累積水平存在一定的差異，可能是不同產地的地理、氣候等環(huán)境差異造成的＼[16-18＼]。

本試驗中同一生長條件下的博落回根部的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量均為最高，其次是葉部，莖部最低。博落回的同一部位中4種生物堿含量依次為別隱品堿>原阿片堿>血根堿>白屈菜紅堿。博落回各部位的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿含量范圍分別在008%～154%、016%～486%、003%～025%、003%～016%。郭宇鴿等＼[19＼]的研究表明在博落回葉中原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿的含量分別為048%～200%、036%～172%、018%～081%、007%～033%，與其相比，本試驗中的博落回葉部的生物堿含量均處于較高水平。汪學軍等＼[20＼]研究表明博落回根部提取液的抑菌效果較其他部位更強。黃敬等＼[21＼]研究結果表明，博落回不同部位原阿片堿、別隱品堿含量有差異;其中根中別隱品堿含量最高，兩種生物堿之和在博落回不同部位中含量為：根>果實>葉>莖。博落回的單一部位富集的生物堿在整株植物的生物量中占比很小，如果僅利用單一部位作為有效成分提取原料，必然會造成植物資源的巨大浪費。在實際生產中，從不同藥用部位或全草中提取有效成分的生產工藝和生產成本也存在很大不同，所以大生產過程中需要根據原料的采收期和采收部位選擇不同生產工藝＼[22-23＼]。

本試驗通過比較明溪野生、明溪種植和光澤野生博落回樣品間不同部位的原阿片堿、別隱品堿、血根堿、白屈菜紅堿和總生物堿含量，明確了野生與種植除根部和葉部中的原阿片堿含量以及葉部中的別隱品堿外其他生物堿含量差異不顯著，同一生長條件下生物堿含量最為豐富的是根部，其次是葉部。該研究結果為進一步研究博落回的藥用活性成分提供了數據支持，為博落回資源的合理應用提供了參考。

參考文獻：

[1]吳茂旺，朱建華博落回藥理研究與應用概況[J]基層中藥雜志，2002，16（3）：46-48

[2]趙東亮，郁建平，周曉秋，等博落回生物堿的抑菌作用研究[J]食品科學，2005，26（1）：45-47

[3]郭小清，康莉平，聶建超，等博落回的藥理作用及其在動物保健中的應用[J]中國動物保健，2005（4）：24-25

[4]王瑾瑜，任亞萍博落回屬植物化學成分的研究進展[J]安徽農學報，2009，15（17）：41-42

[5] 康偉松，程辟，曾建國血根堿、白屈菜紅堿離子對化合物的體外抗菌活性研究[J]中南藥學，2014，12（5）：406-410

[6]曾建國不同生長期博落回果實中血根堿與白屈菜紅堿的含量[J]中藥材，1999， 5（22）：229

[7]鄒惠亮，李紅玉，余紹福，等博落回的生物堿成分及細胞毒活性研究[J]中國中藥雜志，2015，40（3）：458-462

[8]葉馮芝，馮鋒，柳文媛博落回的生物堿成分[J]中國中藥雜志，2009，34（13）：1683

[9]杜先華，黃松，馮泓瑞，等博落回提取物血根堿對腫瘤細胞增殖及凋亡的影響[J]時珍國醫(yī)國藥，2014，25（12）：2860-2861

[10]李杰，伍樹松，熊興耀，等博落回生物堿對豬腸上皮細胞增殖的影響[J]動物營養(yǎng)學報2014，26（6）：1632-1637

[11]張之鵬不同栽培方式對鐵皮石斛生長及有效成分的影響[D]南昌：南昌大學，2016

[12]趙鳳春苦參不同部位化學成分及含量差異研究[D]北京：中國中醫(yī)科學院，2015

[13]鄭梅霞，蘇海蘭，朱育菁博落回生物堿提取工藝優(yōu)化[J]食品安全質量檢測學報，2020，11（10）：3087-3091

[14]劉秀斌博落回屬植物中生物堿代謝累積研究[D]長沙：湖南農業(yè)大學，2012

[15]鐘明，黃可龍，曾建國，等采用UPLCESIMS快速測定博落回各器官中主要生物堿的含量[J]中南大學學報（自然科學版），2011，42（7）：1899-1905

[16]張炯炯，李功華，李躍軍，等博落回植株地上部分各器官生物堿含量的研究[J]中華中醫(yī)藥學刊，2009，27（7）：1428-1430

[17]吳周威，程辟，劉秀斌，等博落回藥材采收及初加工工藝研究[J]中國現(xiàn)代中藥，2013，15（10）：860-864

[18]楊鵬，向鋒，卿志星，等博落回鮮葉中生物堿類化學成分的分離與結構鑒定[J]中國現(xiàn)代中藥，2017，19（10）：1371-1375

[19]郭宇鴿，曾建國，談滿良，等博落回葉與小果博落回葉中4種生物堿的含量比較[J]中南藥學，2011，9（11）：829-832

[20]汪學軍，閔長莉，韓彭壘博落回不同部位提取物對大腸菌群的抑菌作用研究[J]天然產物研究與開發(fā)，2016，28（2）：247-250

[21]黃敬，曾建國，羅衛(wèi)梅，等HPLC法同時測定博落回不同部位原阿片堿、別隱品堿的含量[J]湖南中醫(yī)藥大學學報，2010，30（1）：41-42

[22]劉秀斌，黃嘉璐，鄭亞杰，等博落回和小果博落回不同部位中生物堿類成分的比較[J]中國現(xiàn)代中藥，2017，19（10）：1382-1386

[23]MIAO F，YANG X J，MA Y N，et al.Structural modification of sanguinarine and chelerythrie and their in vitro acaricidal activity against Psoroptes cuniculi[J].Chem Pharm Bull，2012，60（12）：1508-1513

（責任編輯：柯文輝）

蘇海蘭，鄭梅霞，陳宏，等野生與種植博落回各部位生物堿含量分析＼[J＼]福建農業(yè)科技，2021，51（2）：32-36.

收稿日期：2021-01-20

作者簡介：蘇海蘭，女，1980年生，碩士，高級農藝師，主要從事藥用植物資源利用與仿生栽培研究。

*通信作者：朱育菁，女，1972年生，博士，研究員，主要從事農業(yè)生物資源保護與利用（Email：zyjingfz@163com）。

基金項目：福建省科技計劃項目——省屬公益類科研院所基本科研專項（2020R1034008）;福建省農業(yè)科學院自由探索科技創(chuàng)新項目（ZYTS2019010）。