達州縣級獸醫(yī)實驗室檢測能力比對結(jié)果分析

趙小波，劉俐君通信作者，李 成，楊 青，黎丁箕，鄭永剛，王 勤

(1.達州市動物疫病預防控制中心，四川 達州 635000；2.達州市職業(yè)技術(shù)學院，四川 達州 635000)

0 引言

開展獸醫(yī)實驗室檢測能力比對，是評價獸醫(yī)實驗室檢測技術(shù)水平，加強獸醫(yī)實驗室質(zhì)量控制的有效方法[1]，更是強化獸醫(yī)實驗室檢測能力建設，提升動物疫病監(jiān)測預警水平的重要舉措[2]。2020年10月，達州市動物疫病預防控制中心組織全市7個縣級獸醫(yī)實驗室進行了檢測能力比對，并對檢測結(jié)果進行分析，以期有針對性地改進提高。

1 材料與方法

1.1 比對項目

共設H5亞型禽流感抗體(H5-AI Ab)、O口蹄疫抗體(O-FMD Ab)和非洲豬瘟病毒(ASFV)核酸檢測3個比對項目。其中H5-AI Ab檢測采用HI方法，按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》(GB/T18936-2003)進行[3]；O-FMD Ab檢測采用競爭ELISA方法、ASFV核酸檢測采用RT-PCR方法，參照試劑盒說明書進行。

1.2 比對材料

1.2.1 檢測試劑

市中心統(tǒng)一提供禽流感病毒H5亞型(Re-11)血凝抑制試驗抗原(哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司、批號2019009)和標準陰性、陽性血清；口蹄疫病毒O型競爭ELISA抗體檢測試劑盒(批號020092017)和非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒(批號040222012)由青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心提供；DNA提取試劑由各實驗室自備。

1.2.2 比對樣品

每個項目每個縣準備比對樣品5份，并設置重復樣品。其中H5-AI Ab檢測比對樣品抗體滴度設置﹤1 log 2、4 log 2和7 log 2 3個參考值(哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司制備)；O-FMD Ab、ASFV核酸檢測比對樣品設置陰性、陽性和弱陽性3個參考值(青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心制備)。經(jīng)市中心驗證后制備盲樣。

1.3 評判標準

H5-AI Ab檢測：檢測結(jié)果與參考值一致或±1；O-FMD Ab和ASFV檢測：陽性、弱陽性樣品檢測結(jié)果為“陽性”，陰性樣品檢測結(jié)果為“陰性”。

2 結(jié)果

2.1 總體結(jié)果

3個比對項目平均符合率92.33%，H5-AI Ab、O-FMD Ab、ASFV核酸檢測符合率分別為94.29%、94.29%、88.57%。2個縣全部正確，3個縣符合率為93.33%，如表1所示。

表1 各縣實驗室比對結(jié)果統(tǒng)計

2.2 H5-AI Ab

2個實驗室檢測結(jié)果與參考值完全一致；參考值為7log2的樣品，1個實驗室檢測結(jié)果相差2個滴度，3個實驗室相差1個滴度；參考值為4log2的樣品，5個實驗室相差1個滴度。各實驗室的重復樣品，檢測結(jié)果一致。

2.3 O-FMD Ab

有5個實驗室O-FMD Ab檢測結(jié)果全部正確；A縣1份陰性樣品檢測為陽性，B縣將1份弱陽性檢測為陰性。

2.4 ASFV核酸

3個實驗室檢測結(jié)果與參考值完全一致；另外4個縣弱陽性樣品檢測結(jié)果為陰性。各縣強陽性和陰性樣品檢測結(jié)果較準確，弱陽性的檢出率低。

3 討論

從比對結(jié)果看，達州市縣級獸醫(yī)實驗室具備此3種方法檢測相應動物疫病的能力。但個別實驗室個別項目檢測結(jié)果仍有偏差，還需查找原因加以改進提高。

血凝抑制試驗受器材、稀釋液、抗原、待檢血清、紅細胞、人員操作及其他因素影響，試驗結(jié)果易出現(xiàn)偏差[4]。個別實驗室測定抗原滴度較高，導致比對結(jié)果抗體滴度偏高。個別樣品檢測結(jié)果偏倚方向與其余4份樣品不一致，可能是由于加樣不準確或主觀結(jié)果判讀有誤導致。而ELISA試驗不易受主觀因素影響，個別樣品結(jié)果有誤可能是加樣造成污染或加樣量不足導致。

為適應非洲豬瘟防控需要，2020年達州市首次將RT-PCR方法納入比對項目。但ASFV弱陽性樣品符合率較低，而影響RT-PCR試驗的因素包括檢測試劑和檢測儀器的靈敏度、樣品的病毒含量及人員操作等。本次出現(xiàn)假陰性的可能原因有如下幾點。一是弱陽性樣品CT值接近臨界值，病毒含量低，各縣核酸提取試劑的提取效率不同導致個別實驗室檢測失敗。二是個別實驗室購置的簡易RT-PCR檢測儀器靈敏度有待比對，移液器等未定期進行質(zhì)量檢定。三是病毒核酸檢測技術(shù)剛在縣級實驗室普及，操作不熟練。工作實踐中，環(huán)境、唾液、豬肉產(chǎn)品等樣品病毒含量通常較低，所以病毒核酸檢測能力急需提高。

4 結(jié)語

達州市縣級獸醫(yī)實驗室檢測能力仍需加強。一是強化實驗室建設，配置精良儀器設備并定期檢定更新。二是定期開展培訓，提升人員素養(yǎng)。定期開展實驗室間、檢測人員間、儀器設備間比對，及時發(fā)現(xiàn)問題整改。三是完善實驗室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系，嚴格操作程序，規(guī)范實驗活動。