益生菌復(fù)配富鉻酵母緩解2型糖尿病的效果評(píng)價(jià)

于雷雷，周興婷，翟齊嘯*，郭仁妹，崔樹茂，陳 衛(wèi)

（1 江南大學(xué)食品學(xué)院 江蘇無(wú)錫 214122 2 蘇州硒泰克生物科技有限公司 江蘇蘇州215100）

近些年，隨著物質(zhì)生活的豐富和膳食結(jié)構(gòu)的改變，全世界糖尿病患者的數(shù)量急劇上升。糖尿病主要分為4 種類型，分別為1 型糖尿病、2 型糖尿病、妊娠糖尿病和其它類型糖尿病，其中2 型糖尿病是造成全世界糖尿病患者數(shù)量激增的主要因素[1]。國(guó)際衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)2025年患者數(shù)量將突破3 億，中國(guó)是世界上糖尿病患者人數(shù)位居第二的國(guó)家[2]。目前2 型糖尿病的機(jī)理尚不明確，導(dǎo)致發(fā)病的誘因眾多，包括遺傳、環(huán)境、年齡、種族、生活方式等。2 型糖尿病會(huì)導(dǎo)致糖尿病腎病、糖尿病眼部并發(fā)癥、糖尿病足、糖尿病心血管和腦血管病等多種并發(fā)癥[3]，目前采用的較為普遍的是藥物療法、飲食療法、運(yùn)動(dòng)療法和心理干預(yù)。藥物療法主要是磺脲類藥物、格列奈類藥物、雙胍類藥物、噻唑烷二酮類藥物和α-糖苷酶抑制劑類藥物。藥物在控制血糖的同時(shí)也帶來(lái)了不可避免的副作用。研究發(fā)現(xiàn)磺脲類藥物與機(jī)體生長(zhǎng)激素紊亂、惡性腫瘤和體重增加等不良反應(yīng)有關(guān)[4]。格列奈類藥物通過(guò)刺激胰島素的早期分泌而降低餐后血糖達(dá)到降糖效果，然而也會(huì)加劇低血糖和體重增加的風(fēng)險(xiǎn)。雙胍類藥物會(huì)導(dǎo)致惡心、嘔吐、頭暈以及乳酸中毒等不良癥狀[5]。噻唑烷二酮類藥物通過(guò)增加靶細(xì)胞對(duì)胰島素作用的敏感性而降低血糖，體重增加和水腫是該類藥物最常見(jiàn)的副作用。α-糖苷酶抑制劑類藥物最常見(jiàn)的不良反應(yīng)是胃腸道不適。飲食療法、運(yùn)動(dòng)療法和心理干預(yù)在一定程度可以預(yù)防和改善糖尿病，然而無(wú)法替代藥物治療的效果。探尋更安全、有效的降糖方法非常必要。膳食補(bǔ)充劑是指添加了礦物質(zhì)、維生素及相對(duì)功能明確的補(bǔ)充劑等成分的一種復(fù)配產(chǎn)品。目前膳食補(bǔ)充劑被廣泛使用，針對(duì)不同的適宜人群，有多種多樣的膳食補(bǔ)充劑，例如適合育齡婦女、嬰兒、兒童的膳食補(bǔ)充劑[6]，具有減少飲食內(nèi)毒素血癥功能的益生菌膳食補(bǔ)充劑[7]等，其中益生菌膳食補(bǔ)充劑成為目前研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)與地衣芽孢桿菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌復(fù)配的葫蘆巴種子的攝入能夠增加金頭鯛體內(nèi)超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶[8]；而且益生菌膳食補(bǔ)充劑的攝入有顯著的改善心理亞健康，緩解焦慮和抑郁等癥狀[9]。

乳酸菌屬于益生菌的種類之一，近些年對(duì)乳酸菌的研究越來(lái)越多。由于益生菌的益生作用和安全性，因此被廣泛應(yīng)用于發(fā)酵食品。文獻(xiàn)報(bào)道，乳酸菌對(duì)改善2 型糖尿病的癥狀具有顯著的效果[10-13]。鼠李糖乳桿菌LGG 能夠顯著抑制機(jī)體對(duì)葡萄糖的吸收，從而降低餐后血糖[10-11]。鼠李糖乳桿菌CRL981 能夠緩解高血糖水平，調(diào)節(jié)機(jī)體血脂水平和抗氧化酶的活力[12]。羅伊氏乳桿菌GMNL-263 可以明顯改善胰島素抵抗水平，從而改善糖尿病癥狀[13]。而植物乳桿菌X1 和鼠李糖乳桿菌CCFM0528 已在本團(tuán)隊(duì)的前期研究中發(fā)現(xiàn)具有顯著緩解機(jī)體炎癥癥狀、改善腸道通透性、降低血糖水平的作用[14-15]。因此，本研究選擇這兩種菌進(jìn)行深入研究。

鉻是自然界中的一種金屬元素，常見(jiàn)的化合價(jià)是二價(jià)、三價(jià)、六價(jià)。同時(shí)鉻是人體必需的微量元素之一，在維持人體健康方面有著顯著的作用，人體所需要的鉻是三價(jià)鉻[16]，美國(guó)建議成人每日鉻攝入量為50～200 μg，英國(guó)建議成人每日安全攝入量大于25 μg，而我國(guó)建議成人每日攝入量為50 μg，最大耐受劑量為200 μg。1959年，科學(xué)家成功從啤酒酵母中提取出有機(jī)鉻結(jié)合蛋白（GTF），GTF 能夠很好地維持機(jī)體血糖水平，鉻參與糖代謝，調(diào)控胰島素發(fā)揮作用，從而達(dá)到降糖的效果[17-19]。鉻同時(shí)參與生物體內(nèi)的脂代謝過(guò)程，可以減少脂肪和膽固醇的堆積，促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，維持生物體核酸穩(wěn)定[20]。富鉻酵母產(chǎn)品具有降糖效果，能夠明顯緩解糖尿病癥狀，因其效果好和安全性高的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用。

本文研究2 株具有顯著降糖效果的乳桿菌——植物乳桿菌 X1 和鼠李糖乳桿菌CCFM0528 與富鉻酵母復(fù)配的膳食補(bǔ)充劑，對(duì)高脂飼料和STZ 作用下誘導(dǎo)的2 型糖尿病模型的血糖水平、炎癥因子水平、抗氧化水平和糖尿病相關(guān)指標(biāo)的影響，探究其在降糖方面是否有協(xié)同增效作用。

1 材料和方法

1.1 菌株和試劑

植物乳桿菌（X1）、鼠李糖乳桿菌（CCFM0528），來(lái)源于江南大學(xué)食品生物中心菌種保藏中心；蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、無(wú)水葡萄糖、無(wú)水乙酸鈉、七水合硫酸鎂、一水合硫酸錳、檸檬酸氫二鈉、三水合磷酸氫二鉀、吐溫80 等，均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鹽酸二甲雙胍片，購(gòu)于中美上海施貴寶制藥有限公司；鏈脲佐菌素（STZ），購(gòu)于Sigma 公司；高脂飼料（D12492），購(gòu)于北京華阜康生物科技股份有限公司；富鉻酵母，購(gòu)于安琪酵母股份有限公司。

1.2 設(shè)備與儀器

小型冷凍離心機(jī)，德國(guó)Hettich 有限公司；大容量冷凍離心機(jī)，美國(guó)Beckman 公司；高速冷凍離心機(jī)，Eppendorf 公司；隔水式恒溫生物培養(yǎng)箱，上海一恒科技有限公司；SW-CJ-1CV 型微生物操作超凈工作臺(tái)，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；高溫高壓滅菌鍋，日本SANYO 公司；EL204 型電子天平，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；血糖儀，臺(tái)灣厚美德生物科技股份有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 乳桿菌的活化與培養(yǎng) 從-80 ℃冰箱中取出乳桿菌的保菌管，在乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基（MRS）固體平板上劃線，挑出單菌落接種到MRS 液體培養(yǎng)基后37 ℃培養(yǎng)18 h，之后以1%～2%的接種量接種于MRS 液體培養(yǎng)基中37 ℃培養(yǎng)18 h，連續(xù)活化3 代后用于后續(xù)試驗(yàn)。

1.3.2 益生菌復(fù)配劑的制備 將活化菌株按1%的接種量接種于1 L 的液體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)，37 ℃恒溫下培養(yǎng)18 h 后，在4 ℃，6 000 r/min 的條件下離心10 min 后獲得菌泥，無(wú)菌生理鹽水沖洗3 次，用10%的脫脂乳作為保護(hù)劑重懸，冷凍干燥后與富鉻酵母進(jìn)行復(fù)配，其中小鼠每日攝入每種乳桿菌含量達(dá)到109CFU，富鉻酵母按小鼠每日鉻攝入量100 μg/kg 為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行復(fù)配。灌胃小鼠之前，用無(wú)菌生理鹽水重懸調(diào)整菌液濃度為5×109CFU/mL，富硒酵母為5 mg/mL，并在37 ℃水浴中復(fù)蘇30 min 后使用。

1.3.3 益生菌復(fù)配劑的降糖效果評(píng)價(jià)試驗(yàn)

1.3.3.1 動(dòng)物試驗(yàn)及適應(yīng)性喂養(yǎng) 選取50 只體重相似的3 周齡SPF 級(jí)C57BL/6J 雄性小鼠，喂養(yǎng)程序經(jīng)江南大學(xué)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)的許可（許可證號(hào)：JN.No 20180115c0700613[24]）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房常年恒溫恒濕，保持溫度在（22±2）℃和濕度在（55±5）%的范圍內(nèi)，并嚴(yán)格遵循12 h 晝夜循環(huán)標(biāo)準(zhǔn)。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周，喂食普通飼料，1 周后隨機(jī)分為5 組，分別為空白組、模型組、藥物組、乳酸菌組、復(fù)合組。分組后前4 周試驗(yàn)期間，正常組喂食普通飼料，其余各組喂食高脂飼料，同時(shí)正常組、模型組、藥物組灌胃脫脂乳，乳酸菌組喂食混合乳酸菌溶液，復(fù)合組喂食膳食補(bǔ)充劑。第5 周，所有小鼠禁食8 h 以上，除正常組外，其余各組小鼠注射新鮮的鏈脲佐菌素STZ（按100 mg/kg 體重注射）。造模1 周后，第6 周模型組開始灌胃鹽酸二甲雙胍（按10 mg/kg 體重灌胃）。試驗(yàn)第5 周以后所有小鼠喂食普通飼料，同時(shí)正常組、模型組、藥物組灌胃脫脂乳，乳酸菌組喂食混合乳酸菌溶液、復(fù)合組喂食膳食補(bǔ)充劑。試驗(yàn)期間定時(shí)記錄體重變化以及攝食量。

1.3.3.2 小鼠糖尿病相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

1）小鼠體重與攝食量 試驗(yàn)期間，每周固定時(shí)間稱重記錄小鼠體重和攝食量。

2）血糖的測(cè)定 試驗(yàn)期間，每周固定時(shí)間測(cè)定小鼠的空腹血糖和餐后血糖，測(cè)定前，小鼠禁食不禁水8 h，用一次性采血針采取小鼠尾巴血液，用血糖儀進(jìn)行電化學(xué)方法測(cè)定空腹血糖，測(cè)定結(jié)束喂食，在喂食2 h 后測(cè)定餐后血糖。

3）口服糖耐量檢測(cè) 試驗(yàn)期間，在造模成功后（第6 周）和動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)束前（第13 周）測(cè)定口服糖耐量檢測(cè)（OGTT），測(cè)定前，小鼠禁食不禁水8 h，檢測(cè)血糖（0 min），隨后灌胃葡萄糖溶液（2 g/kg），在15，30，60，90 和120 min 時(shí)分別測(cè)定血糖。隨后根據(jù)數(shù)據(jù)繪制血糖變化曲線，并計(jì)算出糖耐量曲線下面積。

4）采用ELISA 試劑盒測(cè)定血清中糖化血紅蛋白（HbA1c）、胰島素、內(nèi)毒素的含量，以及肝勻漿中的肝糖原含量。

1.3.3.3 小鼠血脂、炎癥因子、氧化應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)定

1）血脂指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束后，小鼠禁食處理12 h 后，摘眼球取血，4 ℃，3 000×g 條件下，離心10 min，收集上層血清樣品，存于-80 ℃冰箱中用于后期指標(biāo)測(cè)定。隨后用血液生化儀測(cè)定血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）和低密度脂蛋白（LDL-C）的濃度。

2）炎癥因子 血清存于-80 ℃冰箱中用于測(cè)定細(xì)胞因子，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素10（IL-10）含量的測(cè)定采用ELISA 試劑盒。

3）氧化應(yīng)激指標(biāo) 小鼠取血斷頸處死之后，迅速解剖，取出肝臟組織，放于生理鹽水中漂洗干凈后，迅速放入液氮中，后期剪取0.1 g 肝臟放入勻漿EP 管中，加入9 倍質(zhì)量的生理鹽水，放入組織研磨機(jī)中充分研磨，3 000×g 離心15 min 后，吸取上清為肝組織勻漿液，存于-80 ℃冰箱中用于后期指標(biāo)測(cè)定，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）、總超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）和活性氧（MDA）含量的測(cè)定采用ELISA 試劑盒。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用oneway ANOVA 分析進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Graphpad做圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體重與攝食量變化

2 型糖尿病小鼠最典型的癥狀就是三多一少，即攝食多、飲水多、排尿多和體重下降[21]。本研究中各組小鼠的體重變化和攝食量結(jié)果如表1所示。造模結(jié)束后，造模組小鼠出現(xiàn)體重下降、排尿明顯增加的現(xiàn)象，且所有注射STZ 的小鼠均表現(xiàn)出精神萎靡不振、毛發(fā)脫落的癥狀?？瞻捉M小鼠的體重明顯高于其它組小鼠（P<0.05），體重增長(zhǎng)平均達(dá)到11.96 g，而喂食混合乳酸菌和膳食補(bǔ)充劑的小鼠體重下降有所改善，均較模型組有所上升，但并不顯著（P>0.05）。各組小鼠進(jìn)食量之間沒(méi)有顯著性差異，但是模型組攝食量較其它各組均略微偏高（P>0.05）。

2.2 小鼠血糖變化

2 型糖尿病的模型造模成功的標(biāo)準(zhǔn)為：空腹血糖達(dá)到7.0 mmol/L，餐后血糖達(dá)到11.0 mmol/L[21]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[22-24]，喂食高脂飼料會(huì)使小鼠出現(xiàn)肥胖、高胰島素血癥和胰島素抵抗，而不是明顯的高血糖或糖尿病，注射STZ 后會(huì)直接導(dǎo)致胰腺β 細(xì)胞被破壞，導(dǎo)致胰島素缺乏而不是胰島素抵抗的后果。動(dòng)物試驗(yàn)第5 周通過(guò)腹腔注射藥物STZ 來(lái)進(jìn)行2 型糖尿病的模型建立，造模1 周后，測(cè)定各組小鼠的血糖值，結(jié)果如圖1所示。由圖1a、圖1b可知，在腹腔注射STZ 1 周后，空白組血糖保持在4 mmol/L，其余各組的空腹血糖水平均高于參考值7.0 mmol/L，餐后血糖高于11.0 mmol/L，可以判斷實(shí)驗(yàn)小鼠2 型糖尿病模型造模成功。

表1 小鼠體重及進(jìn)食變化Table 1 Change in body weight and food intake of mice

整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，每周固定監(jiān)測(cè)小鼠的空腹血糖和餐后血糖的變化，結(jié)果如圖1c、圖1d 所示?？瞻捉M小鼠空腹血糖保持在4 mmol/L，餐后血糖保持在8 mmol/L 的水平上，而造模后發(fā)現(xiàn)造模組小鼠空腹血糖急劇上升，達(dá)到9.50 mmol/L，餐后血糖達(dá)到了14.94 mmol/L，在后期試驗(yàn)過(guò)程中，造模組小鼠血糖水平有所回升，但空腹血糖保持在8 mmol/L 以上，餐后血糖保持在13 mmol/L 以上，這進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)驗(yàn)小鼠2 型糖尿病模型造模成功。而試驗(yàn)結(jié)束后藥物組、乳酸菌組、復(fù)合組空腹血糖水平分別恢復(fù)到了4.4，5.26 和4.66 mmol/L，餐后血糖水平分別恢復(fù)到8.50，10.33 和10.30 mmol/L，與模型組有顯著差異（P<0.05），這說(shuō)明藥物組的治療效果顯著，乳酸菌和富鉻酵母對(duì)2 型糖尿病具有緩解效果，其中復(fù)合組小鼠緩解血糖效果優(yōu)于乳酸菌組，說(shuō)明乳酸菌和富鉻酵母對(duì)于緩解2 型糖尿病具有一定的協(xié)同增效作用。

圖1 小鼠血糖水平變化Fig.1 Change in blood glucose levels of mice

2.3 小鼠糖耐受結(jié)果

血糖控制由胰島素和胰高血糖素介導(dǎo)，葡萄糖耐受能力的降低是因?yàn)闄C(jī)體代謝糖類物質(zhì)時(shí)存在紊亂，這種紊亂會(huì)加劇2 型糖尿病的癥狀，所以監(jiān)測(cè)機(jī)體的糖耐受能力是判斷和診斷機(jī)體是否患有2 型糖尿病的一個(gè)重要手段[25]。正常個(gè)體在一次性大量攝入葡萄糖后，血糖會(huì)短時(shí)間出現(xiàn)小幅度升高，約在2 h 后恢復(fù)正常血糖狀態(tài)，這種屬于糖耐受狀態(tài)，2 型糖尿病患者在一次性大量攝入葡萄糖后，血糖會(huì)出現(xiàn)急劇上升，而且2 h 內(nèi)無(wú)法恢復(fù)到正常水平，并且保持在較高水平。造模成功后及試驗(yàn)結(jié)束前各組小鼠的口服葡萄糖耐量（OCTT）和糖耐量曲線下面積 （AUC）結(jié)果如圖2所示。

如圖2a、b 所示，造模成功后（第6 周），灌胃15 min 內(nèi)，各組小鼠血糖水平均快速上升，但空白組血糖明顯低于其它組，在2 h 后除空白組外血糖維持在較高水平，說(shuō)明葡萄糖耐受能力明顯降低，符合2 型糖尿病糖耐量降低的特征。乳酸菌組和復(fù)合組的AUC 顯著低于模型組，說(shuō)明乳酸菌組和復(fù)合組可以改善糖尿病小鼠的糖耐量。如圖2c、d 所示，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（第13 周），空白組的血糖值與前期測(cè)量變化不大，糖耐量依然保持平穩(wěn)。藥物組血糖水平接近空白組，說(shuō)明藥物的治療效果顯著。乳酸菌組和復(fù)合組的AUC 值均比模型組顯著降低，說(shuō)明乳酸菌組和復(fù)合組對(duì)2 型糖尿病小鼠的糖耐量具有顯著改善作用。Sircana 等[26]也得到相似結(jié)果，用LGG、MTCC5689、二甲雙胍或維達(dá)列汀治療后的2 型糖尿病小鼠，其AUC 水平明顯降低。因此，喂食乳酸菌和藥物治療能夠使小鼠葡萄糖耐受能力增加。

圖2 小鼠糖耐受性及AUC 葡萄糖Fig.2 OGTT and AUC of all groups

2.4 小鼠血清中血脂各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

血脂異常是導(dǎo)致2 型糖尿病發(fā)病的重要原因，可以誘導(dǎo)多種并發(fā)癥，如心血管疾病、高血脂等，具有重大危害[26]。所以生活中及時(shí)檢測(cè)血脂的水平狀態(tài)是保持身體健康的良好習(xí)慣，2 型糖尿病患者多伴有混合型血脂異常，其中最主要的變化表現(xiàn)為血漿甘油三酯水平升高，可伴隨血漿總膽固醇水平升高，同時(shí)伴有低密度脂蛋白的升高和高密度脂蛋白的降低，檢測(cè)機(jī)體血脂狀態(tài)能夠直觀地反映其病癥的嚴(yán)重程度。試驗(yàn)結(jié)束后各組小鼠血清中血脂含量如表2所示。模型組的血脂水平與空白組有明顯差異（P<0.05），藥物組血脂水平與空白組無(wú)明顯差異（P>0.05），說(shuō)明藥物能夠有效改善糖尿病的癥狀，喂食酵母鉻和乳酸菌后，低密度脂蛋白和甘油三酯水平均有明顯改善（P<0.05），而高密度脂蛋白和甘油三酯的水平與模型組沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）。文獻(xiàn)報(bào)道[27]，羅伊氏乳桿菌GMNL-263 能夠明顯降低2 型糖尿病模型小鼠中總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白的含量，同時(shí)顯著增加高密度脂蛋白含量。

表2 小鼠血清中血脂指標(biāo)Table 2 Lipid-metabolic parameters in blood serum of mice

2.5 小鼠血清炎癥因子的水平

高脂飲食可以改變機(jī)體的腸道生態(tài)平衡，并且促進(jìn)炎癥因子的釋放，2 型糖尿病機(jī)體體內(nèi)LPS的含量增加，LPS 可以激活 TLR4/MyD88/NFκB 途徑，釋放炎癥因子[28-30]。這種炎癥級(jí)聯(lián)的激活，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞胰島素抵抗（IR）。細(xì)胞因子是反映炎癥水平最直接的指標(biāo)，TNF-α 是腫瘤細(xì)胞因子，可以促進(jìn)T 細(xì)胞產(chǎn)生各種炎癥因子，進(jìn)而促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，加劇炎癥水平。IL-10 是抗炎細(xì)胞因子，抑制抗原呈遞和炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)各組小鼠血清中的炎癥因子水平如圖3a、b 所示。模型組小鼠血清TNF-α 與IL-10 水平與空白組小鼠有顯著差異（P<0.05），這進(jìn)一步證明糖尿病患者體內(nèi)炎癥水平的異常狀態(tài)，而藥物組、復(fù)合組和乳酸菌組的TNF-α 水平和IL-10水平均有所恢復(fù)，說(shuō)明酵母鉻和乳酸菌能夠改善2 型糖尿病的炎癥癥狀。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[31]，植物乳桿菌OLL2712 可以顯著降低血清中的IL-6 含量和MCP-1 水平，抑制脂肪組織中的慢性炎癥。

圖3 各組小鼠TNF-α、IL-10 炎癥水平Fig.3 Inflammation levels of TNF-α and IL-10 of all groups

2.6 小鼠肝臟的氧化應(yīng)激指標(biāo)

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，2 型糖尿病的發(fā)病原因與氧化應(yīng)激有著緊密的聯(lián)系，宿主可以通過(guò)體內(nèi)的酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生自由基，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用，損傷活細(xì)胞，造成胰島組織受損[32-35]。肝勻漿中氧化應(yīng)激指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果如表3所示。

表3 小鼠肝勻漿中氧化應(yīng)激指標(biāo)Table 3 Oxidative stress parameters in the livers of mice

GSH-Px 是一種清除自由基能力的抗氧化酶，有助于防止脂質(zhì)過(guò)氧化并維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)以及氧化還原平衡[36]。造模組小鼠GSH-Px 指標(biāo)明顯低于其它各組，藥物組、乳酸菌復(fù)合組小鼠GSH-Px 水平與空白組小鼠沒(méi)有顯著性差異 （P>0.05），與模型組相比恢復(fù)明顯（P<0.05），GSH-Px 的降低說(shuō)明機(jī)體清除自由基能力減弱，加劇了炎癥癥狀。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[37]，口服嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌能夠增加谷胱甘肽含量。ROS 的產(chǎn)生與抗氧化能力之間相互平衡，在細(xì)胞生理學(xué)和大腦發(fā)育中起著至關(guān)重要的作用，其可在2 型糖尿病并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)理中起非常重要的作用。本研究結(jié)果顯示造模組小鼠ROS 含量明顯上升，而其它組小鼠ROS 含量與正常組持平。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[38]，約氏乳桿菌N6.2 可明顯降低其糖尿病小鼠ROS 含量，使其恢復(fù)至正常水平。MDA 能夠激活肝內(nèi)皮細(xì)胞和星狀細(xì)胞發(fā)揮作用，并且可在肝臟中誘導(dǎo)炎癥和纖維化反應(yīng)[39]。試驗(yàn)結(jié)果顯示，造模組小鼠MDA 水平明顯升高，而其它組小鼠MDA 水平均較空白組無(wú)明顯差異（P>0.05）[40]。上述試驗(yàn)結(jié)果證明在喂食富鉻酵母和乳酸菌之后各組小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)均有所改善，說(shuō)明富鉻酵母、植物乳桿菌X1 和鼠李糖乳桿菌CCFM0528 對(duì)緩解2 型糖尿病具有明顯效果，其中富鉻酵母和乳酸菌的復(fù)配配方效果更明顯，進(jìn)一步證明復(fù)配配方在降糖方面具有協(xié)同增效作用。

2.7 小鼠血糖相關(guān)生化指標(biāo)

HbA1c 是成人血紅蛋白的一部分，由血紅蛋白和葡萄糖經(jīng)非酶促反應(yīng)形成，其形成速率與環(huán)境葡萄糖的濃度成正比，所以HbA1c 能夠提供有關(guān)近期平均血糖的重要信息，它可以用來(lái)作為長(zhǎng)期監(jiān)測(cè)血糖水平的一個(gè)重要指標(biāo)[41]。胰島分泌胰島素，參與糖代謝和控制血糖平衡，可用于治療糖尿病。內(nèi)毒素進(jìn)入機(jī)體體內(nèi)能夠破壞腸道通透性同時(shí)加劇機(jī)體炎癥水平，加劇糖尿病癥狀，研究發(fā)現(xiàn)2 型糖尿病和血脂異常患者體內(nèi)LPS 水平明顯高于正常人水平[26，42]。肝糖原是體內(nèi)的儲(chǔ)能物質(zhì)，由葡萄糖分子聚合而成，一般以糖原的形式儲(chǔ)存在機(jī)體體內(nèi)，當(dāng)機(jī)體缺乏能量時(shí)，可以轉(zhuǎn)化為能量，提供機(jī)體需要[26]。

如表4中所示，模型組HbA1c、胰島素、內(nèi)毒素和肝糖原的含量與空白組含量相比均有顯著性差異（P<0.05）。復(fù)合組和乳酸菌組的HbA1c 的含量比模型組含量分別顯著降低了43.37%和40.8%，并且復(fù)合組的HbA1c 與藥物組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。復(fù)合組和乳酸組的內(nèi)毒素含量比模型組含量分別降低了29.9%和21.11%。模型組胰島素和肝糖原水平分別比空白組顯著降低了43.19%和7.4%，復(fù)合組和乳酸菌組的胰島素和肝糖原水平較模型組均有所恢復(fù)。

表4 小鼠血清中糖基化血紅蛋白、胰島素、內(nèi)毒素及肝糖原指標(biāo)Table 4 Serum HbA1c，insulin，endotoxin and glycogen in the livers in mice

3 結(jié)論

將具有緩解2 型糖尿病癥狀的植物乳桿菌X1、鼠李糖乳桿菌CCFM0528 與富鉻酵母進(jìn)行復(fù)配，在高脂飼料和STZ 誘導(dǎo)下的2 型糖尿病模型中評(píng)價(jià)藥物組、乳酸菌組與復(fù)合組的降糖效果。試驗(yàn)結(jié)果表明藥物組具有非常明顯的改善作用，而乳酸菌組與復(fù)合組能夠有效緩解血糖水平和口服糖耐量水平，改善機(jī)體炎癥水平，部分程度上改善氧化應(yīng)激水平、相關(guān)糖尿病生化水平和血脂水平，達(dá)到一定的降糖效果。值得注意的是，富鉻酵母和乳酸菌的混合配方在降糖方面具有協(xié)同增效作用，這為研發(fā)具有緩解2 型糖尿病效果的富鉻酵母益生菌產(chǎn)品提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。