LncRNA-SVUGP2在肝細胞癌中的表達及臨床意義

王俊，張華，劉彥

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是臨床最常見的肝癌類型，是肝硬化患者的主要死亡原因之一[1]。目前HCC的主要治療手段是肝臟移植、手術(shù)切除及放化療等，但治療成功率較低[2-3]。因此，尋找新的HCC治療手段或治療靶點成為當前的研究熱點。近年來，長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNAs,LncRNAs)受到頗多關(guān)注，被視為腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要調(diào)控因子[4]。研究發(fā)現(xiàn)，其在乳腺癌、結(jié)腸癌及肝癌等腫瘤中存在差異表達，并具有DNA損傷和細胞周期調(diào)控、表觀遺傳調(diào)控、microRNA調(diào)控及參與信號轉(zhuǎn)導等多種生物學功能[5]。有研究顯示長鏈非編碼RNA剪接變體UDP-葡萄糖焦磷酸化酶2基因(LncRNA-SVUGP2)能夠抑制HCC的進展[6]，但其在HCC患者癌組織中的表達情況及臨床意義尚不清楚。本研究主要探討LncRNA-SVUGP2在HCC中的表達情況及其臨床意義，以期為HCC提供新的治療靶點。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2016年1月至2019年1月在成都市第五人民醫(yī)院就診的HCC患者80例。納入標準：①在我院初治的HCC患者；②不合并其他惡性腫瘤且既往無其他惡性腫瘤病史；③行根治性肝切除手術(shù)治療；④術(shù)后組織病理學檢查證實為HCC；⑤術(shù)前未經(jīng)放療、化療及其他方式治療；⑥有完整的臨床資料和隨訪資料。排除標準：①近4周內(nèi)有全身性或系統(tǒng)性感染者；②有自身免疫性疾病或活動性免疫性疾病者；③有嚴重高血壓及心臟疾病者；④孕婦。所有患者均簽署知情同意書，且本研究方案經(jīng)我院倫理委員會批準。

1.2 主要儀器及試劑 臺式高速冷凍離心機(Beckman Coulter，美國)；超凈工作臺(蘇州蘇潔凈化設備公司，中國)；普通PCR儀(Eppemdorf，德國)；實時熒光定量PCR(RT-qPCR)儀(Applied Biosystems，美國)；Trizol試劑(Invitrogen，美國)；DNase Ⅰ、反轉(zhuǎn)錄試劑盒及SYBR(TAKARA，日本)；引物(上海生工生物工程股份有限公司，中國)。

1.3 RT-qPCR檢測癌組織和癌旁組織中LncRNA-SVUGP2的表達水平 采用Trizol法提取所有HCC及癌旁組織樣本中的RNA，DNaseⅠ處理后，按試劑盒說明書將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA為模板，采用LncRNA-SVUGP2及GAPDH特異性引物進行RT-qPCR實驗。引物序列如下，LncRNA-SVUGP2：正向5′-GGAAGAGAGACCTGCCCTGTAGC-3′,反向5′-CTTTTCTCAGTCCTCCCGCTTC-3′；GAPDH：正向5′-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3′，反向5′-GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG-3′。PCR反應條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 10 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，反應40個循環(huán)。PCR結(jié)果顯示：擴增曲線良好，熔解曲線峰形單一,即引物特異性良好。以GAPDH表達水平為內(nèi)參，根據(jù)目的基因的相對量=2(CtGAPDH-CtLncRNASVUGP2)計算LncRNA-SVUGP2在癌旁組織和HCC組織中的表達量。根據(jù)相對表達水平的中位數(shù)(7.13)將80例患者分為低表達組(38例)和高表達組(42例)，分析LncRNA-SVUGP2表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、是否合并乙型肝炎病毒(HBV)感染、腫瘤TNM分期、腫瘤分化程度及患者預后等臨床病理特征的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 HCC組織和癌旁組織中LncRNA-SVUGP2的表達水平比較 癌旁組織相對于HCC組織中LncRNA-SVUGP2的相對表達量為10.174±0.865，差異有統(tǒng)計學意義(t=94.84，P<0.05)。

2.2 HCC組織中LncRNA-SVUGP2的表達水平與臨床病理特征的關(guān)系 LncRNA-SVUGP2的表達水平與患者年齡、性別、腫瘤大小及是否合并HBV感染無關(guān)(P>0.05)，而與患者TNM分期、腫瘤分化程度、是否合并肝硬化及患者預后有關(guān)(P<0.05)，見表1。

表1 LncRNA-SVUGP2表達水平與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

3 討論

HCC是我國常見的惡性腫瘤之一，其死亡率居癌癥死亡譜的第2位。HCC的發(fā)生發(fā)展與多種因素有關(guān)，如乙型或丙型肝炎病毒感染、飲酒及非酒精性脂肪肝等，是一個多因素參與和多步驟發(fā)展的復雜過程[7-8]。目前，臨床上治療HCC的方案以肝臟移植、手術(shù)切除和放化療為主，不同的治療手段都有著各自的適應證與禁忌證，且受腫瘤本身特點、肝臟貯備功能、患者身體狀況等多種因素影響，并且部分肝癌是多灶性的，治療成功率較低，復發(fā)或轉(zhuǎn)移的可能性較大，因此，尋找和探索HCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)基因及機制可為HCC的診斷及治療提供理論基礎。

既往關(guān)于HCC的研究多集中于DNA和蛋白水平，隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，非編碼RNA家族(non-coding RNAs，ncRNAs)受到越來越多的關(guān)注，其中LncRNAs是一類長度大于200 nt、由RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)轉(zhuǎn)錄生成，缺少或無開放閱讀框而不能編碼蛋白質(zhì)的RNA，具有較高的組織器官特異性[9]。LncRNAs具有重要的生理學功能，其異常表達與人類疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，如癌癥、心腦血管疾病及退行性神經(jīng)疾病等[10-12]。Yang等[13]報道LncRNA-HEIH在HCC組織中高表達，且可通過人類Zeste同源物2(EZH2)的增強子促進腫瘤生長；Huang等[14]報道LncRNA CDKN2B-AS1通過靶向let-7c-5p/NAP1L1軸促進人HCC的生長和轉(zhuǎn)移；Deng等[15]報道LncRNA CCAT1通過let-7海綿促進HCC的進展。以上研究均提示LncRNA可能在HCC的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移過程中扮演重要角色。此外，有些LncRNAs在肝癌中特異性表達，可能成為HCC的腫瘤標志物或判斷預后的指標[16]。由此可見，LncRNAs在HCC的診斷及治療中發(fā)揮重要作用。

LncRNA-SVUGP2能抑制肝癌細胞的侵襲能力，下調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2和MMP-9的mRNA和蛋白水平，進而抑制HCC的進展。此外，LncRNA-SVUGP2與肝癌組織中的許多mRNA呈正相關(guān)或負相關(guān)關(guān)系，表明它在調(diào)節(jié)癌變方面具有多功能性，是一個具有研究價值的重要分子[6]。本研究選取80例HCC患者，檢測HCC組織和癌旁組織中LncRNA-SVUGP2的表達情況并分析其與患者臨床病理特征間的關(guān)系，結(jié)果顯示，HCC組織中LncRNA-SVUGP2的表達水平顯著低于癌旁組織，與文獻報道一致[6]，且lncRNA-SVUGP2的表達水平與患者年齡、性別、腫瘤大小及是否合并HBV感染無關(guān)，而與患者TNM分期、腫瘤分化程度、是否合并肝硬化及患者預后有關(guān)，提示lncRNA-SVUGP2可能作為HCC早期診斷、預后和治療效果評估的新靶點。

綜上所述，LncRNA-SVUGP2在HCC組織中表達明顯降低，且與患者的腫瘤分期及預后等重要臨床病理特征有關(guān)。