木霉菌對(duì)黃瓜生理特性及立枯病防治效果的影響

馬光恕，梁 梟，李 梅，劉明鑫，陳玉蓉，廉 華*

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)園藝園林學(xué)院，大慶 163319；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193）

黃瓜（CucumissativusL.）又名胡瓜，葫蘆科，是一種世界性的蔬菜經(jīng)濟(jì)作物，有重要的生產(chǎn)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[1]。隨著黃瓜種植面積的擴(kuò)大、復(fù)種指數(shù)的提高，土傳病害的發(fā)生和危害日益加重。立枯絲核菌（Rizoctoniasolani，簡稱Rs）等病原菌可侵染黃瓜發(fā)生立枯病，造成幼苗生長遲緩或迅速死亡[2]，是一種重要的黃瓜苗期土傳病害。目前主要采用種子和床土消毒等物理法，或用多菌靈、代森錳鋅、惡霉靈、甲霜靈等化學(xué)農(nóng)藥來防治黃瓜立枯病，存在病原菌抗藥性增強(qiáng)、農(nóng)藥殘留、土壤環(huán)境惡化等諸多問題和風(fēng)險(xiǎn)[3]。利用拮抗微生物防治黃瓜立枯病，有利于黃瓜的安全生產(chǎn)，并日益受到關(guān)注。

木霉菌Trichodermaspp.是廣泛應(yīng)用的植病生防真菌，對(duì)多種植物病原真菌，特別是土傳病原真菌有較好的拮抗作用[4]，同時(shí)，木霉菌還是重要的植物促生菌（plant growth-promoting fungi，PGPF），不僅促進(jìn)植物的生長發(fā)育，還能夠改善植物生理代謝等功能[5-7]。不同的木霉菌種和菌株，對(duì)植物病害的防病機(jī)制、防病效果和適應(yīng)性存在較大的差異[8]。木霉能產(chǎn)生多種具有抗菌活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，并較多地溶解于發(fā)酵液中，因此，木霉發(fā)酵液更利于促進(jìn)植物生長，并提高對(duì)病害的防治效果[9]。如深綠木霉T.atroviride發(fā)酵液的稀釋液促進(jìn)了山新楊幼苗SOD（超氧化物歧化酶，superoxide dismutase）、POD（過氧化物酶，peroxidase）、CAT（過氧化氫酶，catalase）、PAL（苯丙氨酸解氨酶，phenylalanine ammonialyase）和PPO（多酚氧化酶，polyphenoloxidase）等防御酶活性的提高[10]。而不同稀釋倍數(shù)的深綠木霉T.atroviride發(fā)酵液對(duì)黑麥草幼苗具有明顯的促生作用，提高了幼苗的株高、根系的長度、鮮重、干重和根冠比，顯著提高幼苗葉綠素、可溶性蛋白含量和PPO、POD和PAL等酶的活性[11]。

利用生防木霉菌防治 Rs引起的立枯病已有較多的研究報(bào)道[12,13]，如綠色木霉對(duì)西瓜有顯著的促生效果，處理后植株的株高、莖粗、地上部質(zhì)量、根冠比、壯苗指數(shù)等均顯著高于對(duì)照[14]。利用深綠木霉 T95、哈茨木霉SQR-T37等防治黃瓜立枯病均取得了較好的效果[15,16]，能夠明顯增加黃瓜葉片中的葉綠素a、葉綠素b含量，葉片凈光合速率也穩(wěn)定在相對(duì)高的水平[17]。但目前關(guān)于木霉菌處理對(duì)黃瓜的生長特性、生理生化特性、防病效果的影響尚缺乏系統(tǒng)研究。本研究采用前期篩選出的對(duì)黃瓜立枯病菌 Rs具有較強(qiáng)拮抗效果的3株木霉菌，系統(tǒng)研究了木霉菌處理對(duì)黃瓜的生長及生理特性的影響，以及對(duì)黃瓜立枯病的防治效果，為揭示木霉菌與植物的互作機(jī)制，推動(dòng)木霉菌的開發(fā)應(yīng)用提供依據(jù)，為黃瓜優(yōu)質(zhì)、安全、高產(chǎn)栽培提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試黃瓜品種：“長春密刺”購于山東新泰市裕園種業(yè)有限公司。

供試培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯 200 g，葡萄糖 20 g，瓊脂 10 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0～7.2。馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（PD）：馬鈴薯 200 g，葡萄糖 20 g，蒸餾水1000 mL，pH 7.0～7.2。

供試菌株：棘孢木霉Trichodermaasperellum437、哈茨木霉T.harzianum670和752，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所木霉研究組提供。

立枯絲核菌Rhizoctoniasolani（Rs），由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所土傳病害生物防治研究組提供。

供試基質(zhì)材料：試驗(yàn)中所使用的基質(zhì)材料是草炭和蛭石的混合物，草炭:蛭石（體積比）=2:1（基質(zhì)基本農(nóng)化性狀如下：pH 6.92，有機(jī)質(zhì)34.5%，堿解氮760 mg/kg，速效磷53 mg/kg，速效鉀157 mg/kg）?；|(zhì)過篩（1 mm）后于烘箱中160 ℃高溫滅菌2 h，自然冷卻后繼續(xù)在160 ℃烘2 h后放涼備用[18]。

1.2 木霉發(fā)酵液和立枯絲核菌菌絲懸浮液的制備

木霉發(fā)酵液的制備：將木霉菌株670、752、437分別接種于PDA平板，于28 ℃活化培養(yǎng)3 d。從菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅，轉(zhuǎn)接到含有100 mL PD液體培養(yǎng)基的 250 mL三角瓶中，于28 ℃、250 r/min振蕩培養(yǎng) 3 d，雙層紗布過濾去除菌絲，制成木霉發(fā)酵液。用血球計(jì)數(shù)板測定孢子數(shù)，并將木霉發(fā)酵液的孢子數(shù)調(diào)整到1.5×108孢子/mL備用[18]。

立枯絲核菌菌絲懸浮液的制備：將病原菌Rs在PDA培養(yǎng)基上28 ℃黑暗條件培養(yǎng)3 d，從菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅5塊，接種在含有100 mL PD的250 mL三角瓶中，28 ℃、250 r/min振蕩培養(yǎng)3 d，用雙層紗布濾出菌絲團(tuán)，將菌絲攪碎，用無菌水調(diào)整濃度為1.1×107CFU/mL的菌絲懸浮液，備用。

1.3 盆栽試驗(yàn)方法

1.3.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 黃瓜育苗在黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院教學(xué)基地的日光溫室內(nèi)進(jìn)行。將滅菌基質(zhì)材料裝入塑料材質(zhì)的育苗盤（34.5 cm×24 cm×11 cm），每個(gè)育苗盤播入120粒催芽后的黃瓜種子。播種后澆無菌水，保證黃瓜正常出苗和生長。出苗后，根據(jù)苗勢保留大小一致的小苗50株。在第一片真葉展開時(shí)（播種后5 d），用木霉發(fā)酵液和Rs菌絲懸浮液進(jìn)行灌根處理，每個(gè)育苗盤用量為150 mL，即保證黃瓜單株接種量為3 mL。試驗(yàn)共設(shè)9個(gè)處理，每個(gè)處理3盤，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，5次重復(fù)。處理如下：① 接種木霉437（T437）；② 接種木霉670（T670）；③ 接種木霉752（T752）；④ 復(fù)合接種木霉437和Rs（T437B）；⑤ 復(fù)合接種木霉670和Rs（T670B）；⑥ 復(fù)合接種木霉752和Rs（T752B）；⑦ 多菌靈 800倍液與 Rs處理作為化學(xué)對(duì)照（CB）；⑧ 接種 Rs為病原菌對(duì)照（B）；⑨ 接種無菌PD培養(yǎng)液為對(duì)照（P）。

1.3.2 試驗(yàn)測定指標(biāo)與方法 播種后12 d，分別測定黃瓜的抗病性指標(biāo)、生長指標(biāo)和生理指標(biāo)。每個(gè)處理選30株苗，用于抗病性指標(biāo)測定，抗病性指標(biāo)包括植株發(fā)病率、病情指數(shù)、防治效果；每個(gè)處理選5株苗用于測定幼苗生長指標(biāo)；選15 株苗用于測定生理指標(biāo)。檢測指標(biāo)和方法如下：

株高：莖基部到生長點(diǎn)之間的距離，用直尺測定；莖粗：子葉節(jié)下1 cm處粗度，用游標(biāo)卡尺測定；根體積：采用排水法[19]；葉面積采用稱重法，即用葉片打孔器（1.5～2.0 cm）取一定面積（A1）的葉片，將它與其余的葉片分別烘干，求出打孔取樣的干葉重量（W1）和葉片其余部分的干葉重（W2），即可求出該葉片的面積（A），A=A1/W1×（W1＋W2）；植株鮮重：植株用清水反復(fù)沖洗后，用吸水紙吸干，用1/1000電子天平測定鮮重。

葉綠素含量，采用丙酮乙醇法[20]；根系活力，采用α—萘胺氧化法[21]；葉片硝酸還原酶活性，采用活體分光光度法[22]；根系總吸收面積，采用甲烯藍(lán)法[23]。

葉片超氧化物歧化酶（SOD）活性，采用氮藍(lán)四唑法[24]；葉片過氧化物酶（POD）活性，采用愈創(chuàng)木酚比色法[25]；葉片過氧化氫酶（CAT）活性，采用高錳酸鉀滴定法[26]；葉片多酚氧化酶（PPO）活性，采用滴定法[27]。

黃瓜苗期枯萎病參照方中達(dá)[28]的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，病情指數(shù)參照宗兆鋒和康振生[29]的計(jì)算方法。0級(jí)：無癥狀；1級(jí)：莖基部有小病斑，占莖圍的1/4以下；2級(jí)：莖基部的病斑較大，約占莖圍的1/4～1/2之間；3級(jí)：莖基部的病斑占莖圍的1/2以上，但尚未破壞整個(gè)莖圍；4級(jí)：莖基部的病斑占據(jù)全部莖圍，植株死亡。植株發(fā)病率為播種后12 d各處理發(fā)病株數(shù)占調(diào)查總株數(shù)的百分比。病情指數(shù)= ∑（病級(jí)株數(shù)×代表級(jí)數(shù)）/（植株總數(shù)×最高代表級(jí)值）×100。防治效果（%）=（對(duì)照病情指數(shù)－處理病情指數(shù)）/對(duì)照病情指數(shù)×100。

1.4 田間試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 田間試驗(yàn)在黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)農(nóng)學(xué)院試驗(yàn)基地塑料大棚內(nèi)進(jìn)行，土壤類型為黑鈣土。每畝施用有機(jī)肥5000 kg、磷酸二氫銨50 kg，土壤充分耕翻，設(shè)置高畦，下畦寬120 cm、上畦寬100 cm，畦高13～15 cm，畦長5 m。高畦定植2 行，株距25 cm，行距60 cm，一個(gè)栽培畦設(shè)置為一個(gè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積為12 m2。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，每個(gè)處理3個(gè)試驗(yàn)小區(qū)，隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，5次重復(fù)。當(dāng)幼苗長到4葉1心（播種后30 d）時(shí)，選取長勢一致的健壯苗定植于大棚內(nèi)。每個(gè)小區(qū)栽植黃瓜42 株。緩苗（定植后3 d）后分別以木霉437（T437）、670（T670）和752（T752）的發(fā)酵液灌根處理，每株100 mL，對(duì)照灌無菌PD培養(yǎng)液（CK）。緩苗后及時(shí)吊蔓，單蔓整枝，每3 d澆水一次。

1.4.2 試驗(yàn)測定指標(biāo)與方法 在黃瓜果實(shí)采摘中期，各試驗(yàn)小區(qū)隨機(jī)選取 20 個(gè)果實(shí)，測定品質(zhì)指標(biāo)。可溶性固形物含量采用日本愛宕 PAL-1 型便攜式手持折光儀測定；可溶性糖含量采用蒽酮比色法測定[30]；Vc含量采用紫外分光光度法[31]；可溶性蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)G-250 染色法[32]。每個(gè)試驗(yàn)小區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)果實(shí)，測定平均單瓜重。跟蹤測定各小區(qū)產(chǎn)量，按照小區(qū)面積折算為畝產(chǎn)量。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

利用Microsoft Excel 2007軟件進(jìn)行圖表制作，試驗(yàn)數(shù)據(jù)取3次重復(fù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差，利用DPS 7.05（data processing system）進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 木霉對(duì)黃瓜幼苗形態(tài)和生物量積累的影響

經(jīng)木霉437、670和752處理的黃瓜幼苗株高、莖粗、葉面積、根體積、全株鮮重均顯著高于對(duì)照P，說明3株木霉菌對(duì)黃瓜幼苗的生長均具有顯著的促進(jìn)作用，其中以T670的促進(jìn)作用最強(qiáng)，T437居中，T752較弱。T670處理的黃瓜幼苗的株高、莖粗、葉面積、根體積和全株鮮重分別比對(duì)照增加了53.48%、19.80%、32.47%、26.00%和54.43%。病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)接種，即T437B、T670B、T752B、CB處理，其幼苗的相應(yīng)生長指標(biāo)均顯著高于病原菌對(duì)照B，其中以木霉670對(duì)病原菌的抑制和對(duì)黃瓜的促生作用最強(qiáng)，T670B處理的黃瓜幼苗的株高、莖粗、葉面積、根體積和全株鮮重分別比B增加了42.14%、20.14%、27.47%、72.73%和66.42%（表1）。

表1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗形態(tài)和生物量積累的影響Table 1 Effect of Trichoderma on the morphology and biomass accumulation of cucumber seedlings

2.2 木霉對(duì)黃瓜幼苗生理特性的影響

2.2.1 木霉對(duì)黃瓜幼苗葉綠素含量和硝酸還原酶活性的影響 3個(gè)木霉菌處理（T437、T670、T752）的黃瓜幼苗葉綠素含量均顯著高于P處理，T670處理葉綠素含量最高，T670與T437、T437與T752之間差異均不顯著，說明木霉菌處理可以不同程度地提高幼苗葉綠素含量。病原菌Rs處理（B）的葉綠素含量最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（T437B、T670B、T752B、CB）的葉綠素含量均顯著高于B處理，T670B處理葉綠素含量顯著高于其他處理，其中以T670B處理的葉綠素含量最高（圖1）。

木霉菌處理均不同程度地提高了幼苗葉片硝酸還原酶活性，其中 T670的促進(jìn)作用顯著高于 T437和T752，且T437和T752的差異不顯著。B處理的硝酸還原酶活性最低，顯示病原菌不利于黃瓜對(duì)氮素營養(yǎng)的利用；木霉菌或多菌靈與病原菌同時(shí)施用（T437B、T670B、T752B、CB）時(shí)，黃瓜葉片的硝酸還原酶活性均顯著高于B，表明木霉菌或多菌靈減弱了病原菌對(duì)黃瓜氮素利用的抑制作用（圖1）。

圖1 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗葉綠素含量和葉片硝酸還原酶活性的影響Fig.1 Effect of Trichoderma on chlorophyll content and leaf nitrate reductase activity of cucumber seedlings

2.2.2 木霉對(duì)黃瓜幼苗根系活力和根系總吸收面積的影響 木霉菌處理（T437、T670、T752）可以不同程度地提高幼苗根系活力和根系總吸收面積，其中T670與T437之間差異不顯著但均顯著高于T752；B處理的根系活力和根系總吸收面積最低；病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（T437B、T670B、T752B、CB）處理的根系活力和根系總吸收面積均顯著高于B，表明施用木霉菌或多菌靈有利于提高幼苗根系活性，減弱病原菌對(duì)幼苗根系活性的抑制作用（圖2）。

圖2 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗根系活力和根系總吸收面積的影響Fig.2 Effect of Trichoderma on root activity and total root absorption area of cucumber seedlings

綜上檢測結(jié)果，3株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗的葉綠素含量、葉片硝酸還原酶活性、根系活力、根系總吸收面積均都有顯著的促進(jìn)作用，并以木霉670的促進(jìn)作用最強(qiáng)，播種后12 d，T670處理的黃瓜幼苗的葉綠素含量、葉片硝酸還原酶活性、根系活力、根系總吸收面積分別比P增加了43.55%、51.52%、28.42%、17.31%；復(fù)合接種中，以T670B的促進(jìn)作用最強(qiáng)，T670B處理黃瓜幼苗的葉綠素含量、葉片硝酸還原酶活性、根系活力和根系總吸收面積分別比B增加了68.82%、45.06%、64.44%和21.38%（圖1，2）。

2.2.3 木霉對(duì)黃瓜幼苗保護(hù)性酶活性的影響 3株木霉菌處理均不同程度地提高了幼苗葉片SOD和POD活性，其中T670對(duì)提高SOD和POD活性的促進(jìn)作用最大。處理B的SOD和POD活性最低；病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（T437B、T670B、T752B、CB）處理的SOD、POD活性均顯著高于處理B，其中T670B處理的SOD活性顯著高于其他含有病原菌的處理，T437B、T670B和T752B處理POD活性差異不顯著，但顯著高于處理CB（圖3）。

圖3 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗超氧化物歧化酶和過氧化物酶活性的影響Fig.3 Effect of Trichoderma on superoxide dismutase activity and peroxidase activity of cucumber seedlings

3株木霉菌均不同程度地提高了幼苗葉片CAT和PPO活性，其中以T670處理的促進(jìn)作用最大。B處理的CAT和PPO活性最低，病原菌與木霉菌或多菌靈同時(shí)施用（T437B、T670B、T752B、CB）的黃瓜葉片中兩種酶活性均顯著高于B，T670B與T752B、T752B與T437B之間差異均不顯著，CB處理的兩種酶活性顯著低于T437B、T670B、T752B（圖4）。

圖4 木霉菌對(duì)黃瓜幼苗過氧化氫酶和多酚氧化酶活性的影響Fig.4 Effect of Trichoderma on catalase activity and polyphenol oxidase activity of cucumber seedlings

綜上結(jié)果，3株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗葉片的SOD、POD、CAT、PPO活性均有顯著的促進(jìn)作用，以木霉670的促進(jìn)作用最強(qiáng)，播種12 d時(shí)，T670處理的黃瓜幼苗的SOD、POD、CAT、PPO活性分別比P增加了74.06%、92.91%、57.04%、87.38%；復(fù)合接種中以T670B處理的促進(jìn)作用最強(qiáng)，T670B處理的黃瓜幼苗SOD、POD、CAT、PPO活性分別比B增加了93.64%、101.60%、40.50%、53.00%（圖3，4）。

2.3 木霉對(duì)黃瓜枯萎病盆栽防治效果的影響

單獨(dú)病原菌處理（B）的發(fā)病率和病情指數(shù)顯著高于 Rs與木霉菌（T437B、T670B、T752B）及多菌靈（CB）的組合處理，T437B、T670B、T752B的防治效果分別為76.63%、76.87%和75.18%，三者的差異不顯著，但均顯著高于CB的防治效果53.25%（表2）。

表2 木霉菌對(duì)黃瓜立枯病防效的影響Table 2 Effect of the control efficiency of Trichoderma against cucumber R.solani

2.4 木霉對(duì)黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的影響

3株木霉菌不同程度的提高了黃瓜的單瓜重和畝產(chǎn)量，并改善了黃瓜品質(zhì)。木霉菌處理（T437、T670、T752）的黃瓜果實(shí)的可溶性固形物、可溶性糖、Vc、可溶性蛋白含量均顯著高于CK。其中T670處理效果最好，黃瓜單瓜重、畝產(chǎn)量、可溶性固形物含量、可溶性糖含量、Vc含量和可溶性蛋白含量分別比CK增加了22.12%、22.08%、31.25%、24.40%、160.00%和23.72%（表3）。

表3 木霉菌對(duì)黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)的影響Table 3 Effect of Trichoderma on yield and quality of cucumber

3 討論

立枯絲核菌是一種全球性以危害葫蘆科、茄科和禾本科等作物為主的土傳病原真菌，由 Rs引起的植物立枯病經(jīng)常造成大面積缺苗和毀滅性的損失[33]，篩選高效廣譜的木霉菌株并采用合理的施用方法對(duì)有效防治立枯病具有重要意義[34]。本研究的盆栽試驗(yàn)顯示，棘孢木霉437、哈茨木霉670和752對(duì)黃瓜立枯病的盆栽防治效果均達(dá)到75%以上，進(jìn)一步證明這3株木霉菌具有良好的應(yīng)用潛力。

木霉菌不僅能夠防治植物病害，還具有促進(jìn)植物生長、增強(qiáng)植物生理特性等功能[35]。張春秋等[36]利用拮抗木霉菌防治由尖孢鐮刀菌Fusariumoxysporum引起的黃瓜根腐病，表明拮抗木霉菌能夠顯著提高黃瓜幼苗生理活性、促進(jìn)幼苗生長，其中擬康氏木霉T.pseudokoningii886處理的黃瓜幼苗的株高、莖粗和全株鮮重與對(duì)照相比分別提高了28.8%、35.1%、10.70%；谷祖敏等[37]研究發(fā)現(xiàn)，綠色木霉T.virideTV菌株促進(jìn)了黃瓜的生長，黃瓜地上部分和地下部分鮮質(zhì)量分別增加了42.81%和86.92%。本研究中的3株木霉菌處理均可顯著提高黃瓜幼苗形態(tài)建成和物質(zhì)積累，并且不同木霉菌之間存在差異，其中以哈茨木霉 670對(duì)黃瓜幼苗的株高、莖粗、葉面積、根體積和全株鮮重促進(jìn)效果最明顯，分別比對(duì)照（P，無菌PD培養(yǎng)液）增加了53.48%、19.80%、32.47%、26.00%和54.43%；株高、莖粗和全株鮮重增加幅度均高于張春秋等[36]研究結(jié)果，全株鮮重略低于谷祖敏等[37]報(bào)道的對(duì)應(yīng)指標(biāo)，可能與木霉菌株、黃瓜品種、檢測時(shí)間以及植株生長環(huán)境的差異有關(guān)。而只接種病原菌 Rs幼苗的株高、莖粗、葉面積、根體積、全株鮮重最低，說明病原菌不利于幼苗的生長，木霉菌和多菌靈均對(duì)病原菌有較強(qiáng)的抑制作用，因此在與病原菌同時(shí)施用時(shí)，木霉菌或多菌靈能夠減弱病原菌對(duì)黃瓜幼苗生長的抑制作用。

植物抗氧化酶活性如SOD、POD、CAT、PPO等與植物抗病性的強(qiáng)弱存在正相關(guān)關(guān)系。木霉菌能夠誘導(dǎo)植物抗病相關(guān)防御酶活性提高，增強(qiáng)植物體的抗病防御能力[38]。宋玉娟[39]利用棘孢木霉T-6孢子懸浮液處理土壤后，煙草體內(nèi)SOD、POD、CAT酶活性顯著提高，酶活性達(dá)到峰值時(shí)分別比對(duì)照增加27.52%、47.26%和46.78%；李聰[40]利用哈茨木霉 TH 發(fā)酵液的5倍稀釋液處理蘆筍，提高了蘆筍苗根部SOD、POD、CAT、β-1,3-葡聚糖酶和幾丁質(zhì)酶活性，增加幅度分別為對(duì)照的5.89、2.32、3.12、5.21和1.22倍。本研究采用木霉菌或多菌靈處理黃瓜幼苗，黃瓜葉片中SOD、POD、CAT、PPO活性均顯著高于只接種Rs 的對(duì)照處理，其中以復(fù)合接種木霉670和Rs的促進(jìn)作用最強(qiáng)，說明不同木霉對(duì)黃瓜葉片保護(hù)作用存在差異，哈茨木霉670強(qiáng)于棘孢木霉437和哈茨木霉752，木霉處理對(duì)黃瓜的保護(hù)作用強(qiáng)于多菌靈。

張春秋等[36]利用棘孢木霉525、哈茨木霉610和擬康氏木霉886處理黃瓜，3株木霉均可以提高黃瓜幼苗生理指標(biāo)，黃瓜葉綠素含量、硝酸還原酶活性、根系活力、根系總吸收面積增加幅度分別達(dá)到38.7%～49.5%、29.5%～66.3%、10.8%～21.5%、19.6%～23.5%。葉綠素含量反映了植物光合作用的強(qiáng)弱，硝酸還原酶的活性直接影響植物體對(duì)氮素營養(yǎng)的利用效果，根系活力和根系總吸收面積是反映根系活性強(qiáng)弱的重要指標(biāo)，這4個(gè)指標(biāo)均會(huì)對(duì)黃瓜品質(zhì)和產(chǎn)量產(chǎn)生一定的影響。本研究的3株木霉菌處理對(duì)黃瓜幼苗的葉綠素含量、葉片硝酸還原酶活性、根系活力、根系總吸收面積均有顯著的促進(jìn)作用，單獨(dú)接種中以木霉 670的促進(jìn)作用最強(qiáng)，而復(fù)合接種中以T670B的促進(jìn)作用最強(qiáng)。同時(shí)，不同木霉菌處理的黃瓜產(chǎn)量和品質(zhì)之間也存在差異，與其對(duì)生理指標(biāo)的促進(jìn)作用相吻合。

木霉能產(chǎn)生一系列具有抗菌活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，并較多地存在于發(fā)酵液中。本研究利用木霉發(fā)酵液代替孢子懸液，顯著提高了黃瓜幼苗葉片的SOD、POD、CAT和PPO酶活性，提高了黃瓜生理活性，進(jìn)而提高了對(duì)立枯病的抗性，與前人研究結(jié)果[15,16]相似，對(duì)于發(fā)酵液中的哪些代謝產(chǎn)物起作用，有待進(jìn)一步研究。