PFK1在肝癌患者組織中的表達(dá)及與臨床預(yù)后關(guān)系的研究

曹永新，陳良才，鄧惠君，彭玉龍

東莞東華醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,廣東東莞 523000

肝癌作為人類常見的惡性腫瘤之一,近年來其發(fā)病率及病死率呈逐年上升趨勢[1-2],據(jù)2015年國家癌癥中心發(fā)布的惡性腫瘤數(shù)據(jù)顯示,2015年我國肝癌新發(fā)病例約37萬例,位居惡性腫瘤第四位,死亡病例約32.6萬例,高居惡性腫瘤第二位,該病對人類的生命健康及財(cái)產(chǎn)安全造成了極大威脅[3]。鑒于肝癌的較大危害性,故探尋新的肝癌防治途徑迫在眉睫。肝臟作為糖代謝途徑主要的器官,鑒于糖酵解能滿足腫瘤細(xì)胞的快速增殖和生長,故在臨床上肝癌患者往往伴有糖代謝異常[4-5],因此,探討糖代謝重編程在肝癌發(fā)生中的作用,對于闡明肝癌致病機(jī)制和提高肝癌防治水平具有重大意義。磷酸果糖激酶1（PFK1）作為糖代謝的關(guān)鍵酶,已有的研究表明PFK1在胃癌細(xì)胞中異常高表達(dá)[6],但其與肝癌之間的相關(guān)關(guān)系未見相關(guān)報(bào)道。為此,筆者以97例肝癌患者作為研究對象,系統(tǒng)探究磷酸果糖激酶1（PFK1）在肝癌組織中的表達(dá)規(guī)律及其與臨床預(yù)后之間的關(guān)系,現(xiàn)將2017年1月—2020年1月期間97例研究對象相關(guān)結(jié)果進(jìn)行分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究隨機(jī)選取該院的肝癌患者97例作為研究對象,男58例,女39例；年齡42～77歲,平均（61.5±5.2）歲；腫瘤直徑≤5 cm的患者46例,＞5 cm的患者51例；腫瘤個(gè)數(shù)1個(gè)者48例,腫瘤個(gè)數(shù)多個(gè)者43例。所有研究對象均明確研究意義,并自愿簽署知情同意書。該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn):臨床確診為肝細(xì)胞惡性腫瘤；年齡18～75歲；依從性較高,自愿簽署知情同意書；

排除標(biāo)準(zhǔn):年齡＜18歲或＞75歲的患者；妊娠期及哺乳期的患者；合并其他嚴(yán)重器質(zhì)性疾病的患者；依從性較差,不自愿簽署知情同意書的患者。

1.3 方法

該研究使用Trizol裂解液（R0016）對組織標(biāo)本中的總RNA進(jìn)行提取,隨后遵循逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara,RR037A）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈方式對患者肝癌組織及癌旁組織PFK1的表達(dá)情況進(jìn)行檢測,反應(yīng)體系如下:5×buffer加4μL、dNTPs加0.4 mmol/L,上下游引物各加0.4μmol/L,Taq酶加1 U,cDNA加100 ng。反應(yīng)程序?yàn)?95℃5 min,95℃10 s,55℃10 s,72℃1 min,擴(kuò)增40個(gè)循環(huán),72℃10 min。并分析擴(kuò)增結(jié)果。

1.4 隨訪

該研究采用電話或入戶方式進(jìn)行隨訪,其生存期從手術(shù)之日起開始計(jì)算,終止日期為死亡,隨訪截止日期為2017年1月—2020年1月,以3個(gè)月為單位周期進(jìn)行定期隨訪。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

該研究采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù),計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示,組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝癌組織與癌旁組織PFK1表達(dá)陽性率及相對表達(dá)量情況

較之于癌旁組織,肝癌組織樣本中PFK1的表達(dá)陽性率以及相對表達(dá)量顯著較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1,表2。相關(guān)結(jié)果提示PFK1的表達(dá)在肝癌病情發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,其較高的表達(dá)陽性率以及相對表達(dá)量提示臨床患者肝癌病情發(fā)展的可能性。

表1 肝癌組織與癌旁組織PFK1表達(dá)陽性率比較

表2 肝癌組織與癌旁組織PFK1相對表達(dá)量情況比較（±s）

表2 肝癌組織與癌旁組織PFK1相對表達(dá)量情況比較（±s）

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2.2 不同生存期患者肝癌組織中PFK1表達(dá)陽性率情況

生存期＜1年的患者其體內(nèi)PFK1的表達(dá)陽性率顯著高于生存期1～3年的患者,而生存期1～3年的患者亦顯著高于生存期＞3年的患者,各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。相關(guān)結(jié)果提示,PFK1表達(dá)陽性率的增加與患者預(yù)后不佳相關(guān),建議臨床著重關(guān)注。

表3 不同生存期患者肝癌組織中PFK1表達(dá)陽性率情況比較

3 討論

據(jù)相關(guān)研究結(jié)果表明,患者機(jī)體在癌變過程中,腫瘤細(xì)胞形成了一套獨(dú)具特色的異常能量代謝模式,其中以糖酵解增高最為顯著,即“Warburg效應(yīng)”。 Warburg這項(xiàng)重大發(fā)現(xiàn)不但使其獲得了諾貝爾生理學(xué)與醫(yī)學(xué)獎,并由此開拓了腫瘤細(xì)胞糖代謝重編程的新研究領(lǐng)域,相關(guān)研究成果被廣泛應(yīng)用于臨床惡性腫瘤診斷、定位以及療效評估等諸多方面[7-8]。而磷酸果糖激酶1（PFK1）,作為糖代謝重編程過程關(guān)鍵酶,是近年來腫瘤研究的重要分子,關(guān)于該分子在鼻咽癌[9-10]以及卵巢癌[9]等惡性腫瘤的表達(dá)及臨床意義已被廣泛研究,但其與肝癌的相關(guān)性的研究卻鮮有報(bào)道。故基于此,該文以97例肝癌患者作為研究對象,系統(tǒng)探究磷酸果糖激酶1（PFK1）在肝癌組織中的表達(dá)規(guī)律及其與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。

該研究結(jié)果表明,PFK1 mRNA在肝癌組織中的表達(dá)陽性率和相對表達(dá)量分別為74.2%（72/97）和（1.146±0.124）,顯著高于癌旁組織,并且其表達(dá)陽性率的增加與患者預(yù)后不佳相關(guān),究其原因主要?dú)w于內(nèi)皮細(xì)胞新陳代謝因其為腫瘤新生血管的出芽過程提供了能量,故對腫瘤血管網(wǎng)絡(luò)化進(jìn)程具有促進(jìn)作用,而內(nèi)皮細(xì)胞中80%以上的ATP產(chǎn)生依賴于糖酵解途徑[11],PFK1作為腫瘤細(xì)胞糖酵解限速關(guān)鍵酶之一,其可能通過參與腫瘤新生血管的形成影響腫瘤的生長與轉(zhuǎn)移,該研究結(jié)果證明肝癌臨床組織標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)PFK1在肝癌血管內(nèi)皮細(xì)胞中異常高表達(dá),相關(guān)結(jié)果提示PFK1很可能與肝癌新生血管的生成密切相關(guān)。曾有研究表明PFK1在咽鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá),其在癌組織中表達(dá)陽性率為52.5%以及30.0%[12],相關(guān)結(jié)果與該研究結(jié)果一致,但在該研究結(jié)果中,PFK1在肝癌組織中表達(dá)陽性率更高,這可能歸因于肝臟作為糖代謝途徑主要的器官,使得腫瘤細(xì)胞糖酵解限速關(guān)鍵酶PKF1在肝癌組織中的表達(dá)高于鱗狀細(xì)胞癌組織。另一方面,該研究結(jié)果亦發(fā)現(xiàn)PFK1表達(dá)陽性率的增加與患者預(yù)后不良相關(guān),而這對患者病情監(jiān)測具有重要意義。

該研究雖系統(tǒng)論證了PFK1在肝癌組織中的表達(dá)規(guī)律及其與臨床預(yù)后之間的關(guān)系,但依舊存在一定不足,主要體現(xiàn)在鑒于受到樣本數(shù)量的限制,故相關(guān)結(jié)論的推廣可能存在一定的局限性,后續(xù)建議納入更多的研究對象,以期為相關(guān)結(jié)論的推廣及延展奠定更為堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。