• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    具有異養(yǎng)硝化-好氧反硝化功能的水產(chǎn)養(yǎng)殖生物絮團(tuán)菌的分離鑒定及其性能研究

    2021-04-15 04:09:28張宇軒于曉斌崔德杰
    關(guān)鍵詞:生長(zhǎng)

    李 哲,呂 劍,張宇軒,武 君,于曉斌,崔德杰

    (1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院,山東 青島 266109;2.中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所,中國(guó)科學(xué)院海岸帶環(huán)境過程與生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 煙臺(tái) 264003;3. 魯東大學(xué)資源與環(huán)境工程學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264025)

    水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中,未被利用的殘餌以及水生動(dòng)物產(chǎn)生的糞便直接排入水體,使養(yǎng)殖水體中氮素含量和有機(jī)物含量較高,造成水體富營(yíng)養(yǎng)化。水質(zhì)惡化產(chǎn)生的亞硝態(tài)氮等會(huì)毒害水生生物,使病害頻發(fā),增加養(yǎng)殖成本[1]。因此,降低養(yǎng)殖水體中的氮濃度是目前養(yǎng)殖廢水處理的研究熱點(diǎn)[2]。生物脫氮被認(rèn)為是去除養(yǎng)殖廢水中氮元素最經(jīng)濟(jì)有效的方式,且無二次污染[3-5]。生物絮團(tuán)是由細(xì)菌、原生動(dòng)物、微藻、有機(jī)碎屑等形成的絮狀物質(zhì)[6],能夠通過細(xì)菌的氨化、硝化、反硝化及同化作用等將水產(chǎn)養(yǎng)殖廢水中的無機(jī)氮轉(zhuǎn)化為自身的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[7],降低有害氮素對(duì)水體的污染,實(shí)現(xiàn)養(yǎng)殖水的循環(huán)利用,因此利用生物絮團(tuán)調(diào)節(jié)水產(chǎn)養(yǎng)殖污水得到了普遍關(guān)注。

    在傳統(tǒng)的污水處理過程中,利用微生物脫氮時(shí),硝化過程和反硝化過程必須分開進(jìn)行且必須保證嚴(yán)格的好氧和厭氧環(huán)境[8-9]。近年來,研究人員已發(fā)現(xiàn)并分離出一些同步進(jìn)行異養(yǎng)硝化和好氧反硝化的細(xì)菌[10],突破了對(duì)傳統(tǒng)脫氮理論的認(rèn)識(shí)。在同一反應(yīng)容器中,異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌在硝化作用中將氨氮轉(zhuǎn)化為硝態(tài)氮或亞硝態(tài)氮甚至直接轉(zhuǎn)化成氮?dú)馊コ齕11],在反硝化過程中,可以將硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化成亞硝態(tài)氮最后變成氣態(tài)氮脫除[12]。由于不涉及厭氧條件,減少了生物處理系統(tǒng)體積并且降低運(yùn)行所需能量,從而降低了運(yùn)行的成本,所以異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌在生物脫氮方面具有巨大的優(yōu)勢(shì)[13]。生物絮團(tuán)是微生物的集合體,異養(yǎng)菌在生物絮團(tuán)的脫氮功能中起著重要作用,其中異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌能同步進(jìn)行硝化和反硝化作用,因此,生物絮團(tuán)中的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌有待進(jìn)一步研究。

    本文試驗(yàn)從水產(chǎn)養(yǎng)殖生物絮團(tuán)分離出一株異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌,并研究溫度、pH等因素對(duì)其生長(zhǎng)狀況的影響以及菌株的脫氮性能,以期增加對(duì)生物絮團(tuán)中的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌種類和性能的認(rèn)識(shí),為其在將來的應(yīng)用提供理論支持。

    1 試 驗(yàn) 方 法

    1.1 培養(yǎng)基

    0.5 g硫酸銨、2.17 g琥珀酸鈉和50 mL維氏鹽溶液溶解后定容至1 L,配成富集培養(yǎng)基;6.5 gK2HPO4·3H2O、2.5 gMgSO4·7H2O、2.5 gNaCl、0.05 gFeSO4·7H2O和0.04 gMnSO4·H2O溶解后定容至1 L,配成維氏鹽溶液[14]。異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基、好氧反硝化培養(yǎng)基、異養(yǎng)硝化好氧反硝化培養(yǎng)基均含有3.38 g琥珀酸鈉、50 mL維氏鹽溶液、950 mL H2O,溶液pH為7.0。此外,異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基含有0.5 g (NH4)2SO4,好氧反硝化培養(yǎng)基(亞硝酸鹽培養(yǎng)基)含有0.49 g NaNO2,好氧反硝化培養(yǎng)基(硝酸鹽培養(yǎng)基)含有0.61 g NaNO3,異養(yǎng)硝化好氧反硝化培養(yǎng)基(氨氮亞硝態(tài)氮培養(yǎng)基)含有0.25 g (NH4)2SO4、0.25 g NaNO2,異養(yǎng)硝化好氧反硝化培養(yǎng)基(氨氮硝態(tài)氮培養(yǎng)基)含有0.25 g (NH4)2SO4、0.31 g NaNO3,以上培養(yǎng)基均置于高壓滅菌鍋中滅菌[15]。

    1.2 分析方法

    1.3 菌株的分離鑒定

    取羅非魚養(yǎng)殖系統(tǒng)中的生物絮團(tuán)至富集培養(yǎng)基,在搖床中以溫度28℃,轉(zhuǎn)速170 r/min培養(yǎng)72 h,然后從中吸取10%至新的培養(yǎng)基,重復(fù)3次。取1 mL溶液,以10倍濃度梯度將溶液分別稀釋至10-8、10-9、10-10,從中各取0.1 mL涂布于固體異養(yǎng)硝化培養(yǎng)基,選出優(yōu)勢(shì)菌落搖床培養(yǎng)48 h,然后用接種環(huán)劃線分離接種到異養(yǎng)硝化固體培養(yǎng)基上,連續(xù)純化3次得到單菌。將分離得到的單菌接種到異養(yǎng)硝化液體培養(yǎng)基,若氨氮濃度降低則菌株有異養(yǎng)硝化功能,后將菌株分別接種到亞硝酸鹽反硝化培養(yǎng)基和硝酸鹽反硝化培養(yǎng)基中,若亞硝態(tài)氮和硝態(tài)氮的濃度降低則菌株具有好氧反硝化功能,從而篩選出脫氮效果良好的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化菌。

    將目的菌株活化后稀釋涂布至反硝化培養(yǎng)基, 觀察菌落形態(tài)特征。使用TIANGEN基因組DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA提取,16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增采用通用引物27F:5′-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3′,1492R:5′-AAGGAGGTGATCCAGCCGCA-3′進(jìn)行,將獲得的PCR產(chǎn)物送至華大基因進(jìn)行測(cè)序,得到測(cè)序結(jié)果后在NCBI中進(jìn)行Blast分析,通過MEGA X軟件構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。

    1.4 菌株的異養(yǎng)硝化影響因素研究

    研究菌株不同的異養(yǎng)硝化影響因素時(shí),均將1 mL菌株接種到100 mL配置的培養(yǎng)基中,在搖床中培養(yǎng)72 h,每6 h取一次樣測(cè)OD600,另外取2 mL樣進(jìn)行離心,檢測(cè)上清液中的氨氮含量,其余各項(xiàng)試驗(yàn)條件如下(每個(gè)條件下設(shè)置3組平行試驗(yàn))。

    pH:配置pH分別為5、6、7、8、9的液體培養(yǎng)基,丁二酸鈉為碳源,硫酸銨為氮源,C/N=10(質(zhì)量比)。設(shè)置搖床為溫度28℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min。

    溫度:設(shè)置搖床溫度分別為15℃、25℃、35℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min。配置pH=7.0,丁二酸鈉為碳源,硫酸銨為氮源,C/N=10的培養(yǎng)基。

    碳源:配置碳源分別為葡萄糖、蔗糖、乙酸鈉、丁二酸鈉、檸檬酸鈉、淀粉、碳酸氫鈉,硫酸銨為氮源,C/N=10,pH=7.0的培養(yǎng)基。設(shè)置搖床為溫度28℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min。

    C/N:配置碳氮比分別是0、5、10、15、20、25、30,pH=7.0,丁二酸鈉為碳源,硫酸銨為氮源的培養(yǎng)基。設(shè)置搖床為溫度28℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min。

    氨氮濃度:配置氨氮質(zhì)量濃度分別是50 mg/L、200 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L,pH=7.0,丁二酸鈉為碳源,硫酸銨為氮源,C/N=10的培養(yǎng)基。設(shè)置搖床為溫度28℃,轉(zhuǎn)速為170 r/min。

    1.5 菌株在異養(yǎng)硝化-好氧反硝化培養(yǎng)基中的脫氮特性研究

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株的鑒定

    菌株L3在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)24 h后,菌落呈圓形、乳白色,且表面光滑。對(duì)菌株L3的16S rRNA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到長(zhǎng)度為1401 bp的序列。將菌株L3的16S rRNA基因序列經(jīng)BLAST比對(duì)分析,發(fā)現(xiàn)菌株L3與假單胞菌同源性最高。利用MEGA X軟件對(duì)菌株L3構(gòu)筑系統(tǒng)發(fā)育樹,結(jié)果如圖1所示。菌株L3與假單胞菌在同一發(fā)育地位,確定菌株L3為假單胞菌。

    圖1 基于16S rRNA基因同源性構(gòu)建菌株L3與相關(guān)好氧反硝化菌的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic trees of strain L3 based on partial 16S rRNA gene sequences with neighbor-joining analysis

    2.2 pH對(duì)菌株生長(zhǎng)和硝化性能的影響

    pH影響細(xì)菌的生物活性,適宜的pH是細(xì)菌具有良好硝化特性的重要條件之一。由圖2可知,菌株L3在pH為5~9這一范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)。當(dāng)菌株培養(yǎng)30 h,相比于其他幾種條件,pH=5時(shí)菌株的生長(zhǎng)速度緩慢,菌株到達(dá)生長(zhǎng)峰值所需時(shí)間更長(zhǎng),且氨氮的去除速率最慢,推測(cè)知酸性條件不利于該菌株的生長(zhǎng)及氨氮的去除。pH為6~9時(shí),氨氮的最大去除率達(dá)到88.5%~94.2%,但當(dāng)菌株培養(yǎng)24 h,pH=9條件下氨氮的去除速率明顯低于其他3種pH條件下的氨氮去除速率。所以,保證菌株L3生長(zhǎng)以及良好硝化作用的最適pH為6~8,與方海洋等[18]研究中菌株Alcaligenes faecalis No.4所得結(jié)果相同。

    圖2 pH對(duì)菌株L3生長(zhǎng)和硝化性能的影響Fig.2 Effect of pH on growth and nitrifying capacity of strain L3

    2.3 溫度對(duì)菌株生長(zhǎng)和硝化性能的影響

    溫度的改變可以通過影響蛋白質(zhì)的合成、微生物的代謝以及基因調(diào)控等過程對(duì)微生物造成廣泛的影響[19]。由圖3可知,在菌株L3培養(yǎng)30 h時(shí),15℃條件下菌株生長(zhǎng)緩慢,方開始進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期,而25℃條件下菌株即將達(dá)到生長(zhǎng)峰值,35℃條件下菌株已經(jīng)達(dá)到生長(zhǎng)峰值。此外,15℃條件下氨氮的最大去除率為72.0%,同樣低于25℃時(shí)的97.1%和35℃時(shí)的97.7%,溫度為15℃時(shí)不利于菌株L3生長(zhǎng)及對(duì)氨氮的去除。因此,適合菌株L3生長(zhǎng)的最適溫度是25~35℃,與姜磊等[20]研究中YX-6菌所得適宜溫度范圍一致。

    圖3 溫度對(duì)菌株L3生長(zhǎng)和硝化性能的影響Fig.3 Effect of temperature on growth and nitrifying capacity of strain L3

    2.4 碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)和硝化性能的影響

    碳源是菌株硝化過程中的電子供體,同時(shí)為菌株生命活動(dòng)提供所需能量[21]。由圖4可知,菌株L3在以葡萄糖、乙酸鈉、丁二酸鈉、檸檬酸鈉為唯一碳源時(shí)均能生長(zhǎng),其中丁二酸鈉作碳源時(shí)菌株L3的OD600最高,檸檬酸鈉次之,但兩者數(shù)值相近,以蔗糖、淀粉為唯一碳源時(shí),OD600很小,推測(cè)是由于不同碳源有不同的分子結(jié)構(gòu),有機(jī)酸相較于糖類更易于被菌株利用[22]。以碳酸氫鈉為唯一碳源時(shí),菌株不生長(zhǎng)。以丁二酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉為唯一碳源時(shí),氨氮的去除率較高,最高去除率分別為96.1%、87.5%和74.7%。以葡萄糖、蔗糖、淀粉、碳酸氫鈉為唯一碳源時(shí),氨氮的去除率小于27.5%。由此推知,適宜菌株L3生長(zhǎng)的最佳碳源是丁二酸鈉,與王田野等[23]研究菌株SQ2得到的結(jié)果一致。

    圖4 碳源對(duì)菌株L3生長(zhǎng)和硝化性能的影響Fig.4 Effect of carbon source on growth and nitrifying capacity of strain L3

    2.5 C/N對(duì)菌株生長(zhǎng)和硝化性能的影響

    由圖5可知,C/N=0時(shí),菌株L3不生長(zhǎng),C/N=5時(shí),菌株L3生長(zhǎng)量較低,且氨氮去除量較低,由于沒有足夠的能量供菌株生長(zhǎng),影響了菌株的異養(yǎng)硝化特性[24]。C/N為10~30時(shí),氨氮的最大去除率達(dá)到88.8%~96.8%。培養(yǎng)72 h時(shí),盡管C/N=30時(shí)菌株OD600最高,但是碳氮比過高時(shí)會(huì)造成資源浪費(fèi),當(dāng)菌株培養(yǎng)6~18 h,C/N為10和15條件下,氨氮的去除速率明顯高于其他碳氮比條件下的去除速率。綜合考慮,菌株L3生長(zhǎng)的適宜C/N為10~15。

    圖5 C/N對(duì)菌株L3生長(zhǎng)和硝化性能的影響Fig.5 Effect of C/N on growth and nitrifying capacity of strain L3

    2.6 氨氮負(fù)荷對(duì)菌株生長(zhǎng)和硝化性能的影響

    相比自養(yǎng)菌,異養(yǎng)菌通??梢赃m應(yīng)高濃度氨氮廢水[25]。如圖6所示,氨氮初始質(zhì)量濃度為50 mg/L時(shí),菌株OD600最低為1.1,在高氨氮濃度下,菌株L3均生長(zhǎng)良好,說明菌株耐受氨氮負(fù)荷范圍廣泛。試驗(yàn)中因異養(yǎng)菌利用外部碳源,TOC濃度較初始濃度大幅降低。亞硝態(tài)氮幾乎無積累,硝態(tài)氮與羥胺有少量積累。在50 mg/L、200 mg/L氨氮負(fù)荷下,氨氮最大去除率分別高達(dá)98.5%和93.9%,在500 mg/L、1 000 mg/L氨氮負(fù)荷下,氨氮去除率分別為51.9%和39.8%。盡管隨著氨氮初始濃度的增高,氨氮去除率有所降低,但菌株L3生長(zhǎng)并未受到影響,且高于顏薇芝等[22]研究中的菌株YN3的氨氮耐受范圍,所以菌株L3有潛在的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

    圖6 氨氮負(fù)荷對(duì)菌株L3生長(zhǎng)和硝化性能的影響Fig.6 Effect of ammonia nitrogen loading on growth and nitrifying capacity of strain L3

    2.7 菌株的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化特性研究

    為研究菌株的異養(yǎng)硝化-好氧反硝化特性,將菌株分別接種到含有硫酸銨亞硝酸鈉以及含有硫酸銨硝酸鈉的培養(yǎng)基中,結(jié)果見圖7。在含有硫酸銨和亞硝酸鈉的培養(yǎng)基中,0~30 h內(nèi),菌株一直處在迅速生長(zhǎng)狀態(tài),OD600最大值為1.5,此時(shí)總氮、氨氮和亞硝態(tài)氮均處于迅速去除階段,這3種物質(zhì)最大去除率分別為88.3%、95.8%和95.4%。0~6 h,亞硝態(tài)氮含量不斷增加,推測(cè)原因?yàn)榫陜?yōu)先利用氨氮。在含有硫酸銨和硝酸鈉的培養(yǎng)基中,OD600最大值為1.5,亞硝態(tài)氮有少量積累。硝態(tài)氮的去除速率在0~12 h較低,而后升高,推測(cè)是由于菌株優(yōu)先進(jìn)行硝化作用??偟钡拖鯌B(tài)氮的最大去除率分別是90.6%、93.9%、97.7%。由此推知,菌株L3在2種培養(yǎng)基中均能優(yōu)先利用氨氮進(jìn)行異養(yǎng)硝化作用,且都有良好的脫氮效果。

    圖7 菌株L3在同步硝化反硝化過程中的物質(zhì)變化曲線Fig.7 Changing curves of substances during the process of bacterial simultaneous nitrification and denitrification

    3 結(jié) 語

    筆者從水產(chǎn)養(yǎng)殖生物絮團(tuán)中分離出一株異養(yǎng)硝化-好氧反硝化細(xì)菌L3,通過對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和16S rRNA基因序列分析,確定此菌株為假單胞菌。通過對(duì)不同影響因素下菌株的異養(yǎng)硝化能力進(jìn)行研究,得到適宜菌株生長(zhǎng)的最佳pH為6~8,最適宜溫度是25~35℃,最佳碳源是丁二酸鈉,最佳碳氮比為10~15,菌株能耐受高濃度氨氮負(fù)荷。對(duì)菌株脫氮性能的研究表明,在異養(yǎng)硝化-好氧反硝化培養(yǎng)基中,菌株優(yōu)先利用氨氮進(jìn)行異養(yǎng)硝化反應(yīng)且有良好的脫氮效果。因此,從水產(chǎn)養(yǎng)殖生物絮團(tuán)中分離得到的具有異養(yǎng)硝化-好氧反硝化功能的菌株L3有運(yùn)用到未來實(shí)際生產(chǎn)工作的巨大潛力。

    猜你喜歡
    生長(zhǎng)
    野蠻生長(zhǎng)
    碗蓮生長(zhǎng)記
    小讀者(2021年2期)2021-03-29 05:03:48
    生長(zhǎng)的樹
    自由生長(zhǎng)的家
    美是不斷生長(zhǎng)的
    快速生長(zhǎng)劑
    共享出行不再“野蠻生長(zhǎng)”
    生長(zhǎng)在哪里的啟示
    野蠻生長(zhǎng)
    NBA特刊(2018年21期)2018-11-24 02:48:04
    生長(zhǎng)
    文苑(2018年22期)2018-11-19 02:54:14
    成人鲁丝片一二三区免费| 丝袜喷水一区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 综合色丁香网| 成人三级黄色视频| 亚洲无线观看免费| 亚洲精品456在线播放app| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲av男天堂| 亚洲av中文av极速乱| 国内精品一区二区在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产 一区精品| 日本熟妇午夜| 欧美最黄视频在线播放免费| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 中文字幕av在线有码专区| 精品久久久久久久久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 91aial.com中文字幕在线观看| 三级经典国产精品| 国产成人一区二区在线| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 美女内射精品一级片tv| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲av免费在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲精品自拍成人| 国内精品美女久久久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 在线天堂最新版资源| 日韩成人伦理影院| 天堂影院成人在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 美女大奶头视频| 免费无遮挡裸体视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久久久九九精品影院| 久久综合国产亚洲精品| 国产视频首页在线观看| 色吧在线观看| 久久热精品热| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 美女cb高潮喷水在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 有码 亚洲区| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久午夜欧美精品| 国产极品精品免费视频能看的| 免费av观看视频| 成人综合一区亚洲| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久性生活片| 简卡轻食公司| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲av免费高清在线观看| 一级毛片我不卡| 亚洲av第一区精品v没综合| 日日撸夜夜添| 日韩制服骚丝袜av| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲精品色激情综合| 99久久精品热视频| 欧美bdsm另类| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲中文字幕日韩| 三级经典国产精品| 国产伦在线观看视频一区| a级一级毛片免费在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 黄色欧美视频在线观看| 成人综合一区亚洲| 国产精品野战在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99热6这里只有精品| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美在线一区亚洲| 偷拍熟女少妇极品色| av在线天堂中文字幕| 日韩欧美三级三区| 久久久成人免费电影| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 中文字幕精品亚洲无线码一区| 一区二区三区免费毛片| 亚洲最大成人手机在线| 久久久久九九精品影院| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 91久久精品电影网| 成人亚洲欧美一区二区av| 国内精品一区二区在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 在线国产一区二区在线| 国产色爽女视频免费观看| 97超视频在线观看视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 人妻久久中文字幕网| 亚洲av不卡在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久久久久久久久丰满| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 久久久a久久爽久久v久久| 乱码一卡2卡4卡精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲在线观看片| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产免费男女视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 在线播放无遮挡| 九草在线视频观看| 在线a可以看的网站| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品一区二区在线观看99 | 黄色日韩在线| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久99精品国语久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲欧美日韩无卡精品| 免费观看在线日韩| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品福利在线免费观看| 26uuu在线亚洲综合色| 成人国产麻豆网| 日韩制服骚丝袜av| 国产一区二区在线av高清观看| 久久中文看片网| 亚洲av成人av| 亚洲av.av天堂| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲无线在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 一级毛片我不卡| 亚洲av免费高清在线观看| 51国产日韩欧美| 亚洲欧美精品综合久久99| 色尼玛亚洲综合影院| av在线老鸭窝| 日韩视频在线欧美| av在线亚洲专区| 久久久久久久久久久免费av| 三级国产精品欧美在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久国产乱子免费精品| 久久久成人免费电影| 国产高清视频在线观看网站| 久久久精品94久久精品| 日日摸夜夜添夜夜爱| 简卡轻食公司| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久人妻av系列| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲欧美成人精品一区二区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美精品国产亚洲| 亚洲七黄色美女视频| av卡一久久| 久久久色成人| 国产美女午夜福利| 久久久久久久久久久丰满| 赤兔流量卡办理| www.av在线官网国产| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲美女视频黄频| 亚洲自偷自拍三级| 久久久精品欧美日韩精品| 青春草亚洲视频在线观看| 最近手机中文字幕大全| 简卡轻食公司| 99久久人妻综合| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲精品自拍成人| 国产精品久久久久久精品电影| 色综合站精品国产| 欧美一区二区亚洲| 久久国内精品自在自线图片| 人妻系列 视频| 天堂影院成人在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费av观看视频| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 黄片wwwwww| 亚洲无线在线观看| 男女视频在线观看网站免费| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日本欧美国产在线视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美高清成人免费视频www| av.在线天堂| 免费看a级黄色片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美激情久久久久久爽电影| 日本黄大片高清| 精华霜和精华液先用哪个| 波多野结衣高清作品| 欧美一区二区亚洲| 亚洲四区av| 成年av动漫网址| 国产午夜精品一二区理论片| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品国产自在天天线| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲七黄色美女视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产成人a区在线观看| 亚洲av二区三区四区| 美女大奶头视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 成人av在线播放网站| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产亚洲精品av在线| 小说图片视频综合网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 我要看日韩黄色一级片| 一个人观看的视频www高清免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 青春草国产在线视频 | www.av在线官网国产| 国产极品天堂在线| 少妇的逼好多水| 久久午夜亚洲精品久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产探花在线观看一区二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 日本与韩国留学比较| 欧美精品国产亚洲| 给我免费播放毛片高清在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 高清在线视频一区二区三区 | 能在线免费观看的黄片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲最大成人中文| 日日啪夜夜撸| 久久久久久国产a免费观看| videossex国产| 欧美成人免费av一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 男的添女的下面高潮视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产三级中文精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 91久久精品国产一区二区成人| 精品人妻熟女av久视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 少妇高潮的动态图| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲av成人av| 一本久久中文字幕| 一级av片app| 国产精品人妻久久久久久| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲国产欧美在线一区| 99riav亚洲国产免费| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲国产高清在线一区二区三| 美女大奶头视频| 深夜精品福利| 国产精华一区二区三区| 欧美色欧美亚洲另类二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费无遮挡裸体视频| 波多野结衣高清无吗| 97超视频在线观看视频| 国产精品久久视频播放| 国产69精品久久久久777片| 国产精品电影一区二区三区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| .国产精品久久| 少妇丰满av| 一区二区三区四区激情视频 | 欧美区成人在线视频| 波多野结衣高清无吗| 久久久久久久久久黄片| 精品久久久久久久末码| 国产久久久一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 青青草视频在线视频观看| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 美女高潮的动态| 日韩成人伦理影院| 久久久久久九九精品二区国产| www.色视频.com| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品蜜桃在线观看 | 久久久久久久久久成人| 91久久精品电影网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲va在线va天堂va国产| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产伦理片在线播放av一区 | 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 久久精品夜色国产| 久久国产乱子免费精品| 成人三级黄色视频| 欧美bdsm另类| 深爱激情五月婷婷| 亚洲人与动物交配视频| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲最大成人中文| 最好的美女福利视频网| 亚洲内射少妇av| 在线免费观看不下载黄p国产| 日韩大尺度精品在线看网址| 男女啪啪激烈高潮av片| 舔av片在线| 人妻系列 视频| 国产精品国产高清国产av| 国产极品天堂在线| 97超视频在线观看视频| 欧美一区二区亚洲| 少妇熟女欧美另类| 免费人成在线观看视频色| 天天一区二区日本电影三级| 高清午夜精品一区二区三区 | 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲成人久久爱视频| 国产在线男女| 国产不卡一卡二| 欧美性猛交黑人性爽| 九九爱精品视频在线观看| 熟女电影av网| 亚洲精品色激情综合| 日韩 亚洲 欧美在线| 麻豆一二三区av精品| 国产精品国产高清国产av| 男人舔女人下体高潮全视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 欧美3d第一页| 黄色配什么色好看| 精品国产三级普通话版| 好男人视频免费观看在线| 国产精品蜜桃在线观看 | 精品人妻偷拍中文字幕| 听说在线观看完整版免费高清| 国产日本99.免费观看| 久久久久国产网址| 91麻豆精品激情在线观看国产| 午夜老司机福利剧场| 午夜久久久久精精品| 在线天堂最新版资源| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久欧美国产精品| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品蜜桃在线观看 | 男女啪啪激烈高潮av片| 最近视频中文字幕2019在线8| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩欧美三级三区| 午夜精品在线福利| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲真实伦在线观看| 国产高清有码在线观看视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| av在线蜜桃| 嫩草影院精品99| 国产一级毛片在线| 国产老妇女一区| 久久久精品94久久精品| 极品教师在线视频| av福利片在线观看| 波多野结衣高清作品| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩国内少妇激情av| 亚洲欧美日韩无卡精品| 69av精品久久久久久| 亚洲第一电影网av| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 免费观看人在逋| 国产大屁股一区二区在线视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 免费搜索国产男女视频| 亚洲人成网站在线播| 身体一侧抽搐| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久精品夜色国产| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲美女视频黄频| 一进一出抽搐动态| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 美女国产视频在线观看| 热99re8久久精品国产| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲国产精品成人综合色| 色尼玛亚洲综合影院| 身体一侧抽搐| a级毛片免费高清观看在线播放| 极品教师在线视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 六月丁香七月| 亚洲三级黄色毛片| 国产精品福利在线免费观看| 97热精品久久久久久| 赤兔流量卡办理| 在线观看一区二区三区| 夜夜爽天天搞| 国产视频内射| 亚洲,欧美,日韩| 国产真实伦视频高清在线观看| 中国国产av一级| 精品久久久久久成人av| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲国产欧美在线一区| 一级av片app| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产成人福利小说| 99热这里只有是精品在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲18禁久久av| 欧美3d第一页| 亚洲国产高清在线一区二区三| 色哟哟·www| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品一区二区在线观看99 | 丰满乱子伦码专区| 国产91av在线免费观看| 身体一侧抽搐| 免费看美女性在线毛片视频| 国产69精品久久久久777片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 天堂√8在线中文| 一级黄片播放器| 麻豆一二三区av精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲图色成人| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩强制内射视频| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品日产1卡2卡| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 国产真实乱freesex| 大香蕉久久网| 久久精品综合一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲最大成人中文| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日韩亚洲欧美综合| 国产黄片美女视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 免费看日本二区| 午夜福利高清视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产探花极品一区二区| 久久精品影院6| 成年av动漫网址| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品久久久久久av不卡| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品人妻熟女av久视频| 熟女电影av网| 欧美激情在线99| 国产亚洲精品av在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 韩国av在线不卡| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 偷拍熟女少妇极品色| 久久这里有精品视频免费| 高清日韩中文字幕在线| 婷婷色av中文字幕| 国产免费一级a男人的天堂| 久久6这里有精品| 亚洲成av人片在线播放无| 一边亲一边摸免费视频| 色尼玛亚洲综合影院| 久久久午夜欧美精品| 亚洲国产色片| av.在线天堂| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲18禁久久av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲精品自拍成人| 国产片特级美女逼逼视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美日韩乱码在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲欧美精品专区久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 美女脱内裤让男人舔精品视频 | 毛片女人毛片| 黄色配什么色好看| a级毛片免费高清观看在线播放| 免费黄网站久久成人精品| 蜜臀久久99精品久久宅男| 能在线免费观看的黄片| 亚洲第一区二区三区不卡| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产亚洲欧美98| 91久久精品电影网| 禁无遮挡网站| 亚洲最大成人中文| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲国产精品国产精品| 国产真实伦视频高清在线观看| 麻豆国产av国片精品| 精品不卡国产一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 18+在线观看网站| 变态另类丝袜制服| 亚洲第一电影网av| 久久久午夜欧美精品| 麻豆国产av国片精品| 成年女人看的毛片在线观看| 夜夜爽天天搞| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 床上黄色一级片| 国产成人a区在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 欧美丝袜亚洲另类| 边亲边吃奶的免费视频| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产黄片视频在线免费观看| 国产成人一区二区在线| 中文字幕熟女人妻在线| 99久久精品一区二区三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 如何舔出高潮| av国产免费在线观看| 国产一级毛片在线| 国产 一区精品| 久久久国产成人精品二区| 午夜福利高清视频| 毛片女人毛片| 日本黄色视频三级网站网址| 国产成人a∨麻豆精品| 婷婷亚洲欧美| 亚洲七黄色美女视频| 国产探花极品一区二区| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久久久免费精品人妻一区二区| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美最黄视频在线播放免费| 波多野结衣高清作品| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产成年人精品一区二区| 国产精品永久免费网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本一二三区视频观看| 天天一区二区日本电影三级| 日本爱情动作片www.在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 99九九线精品视频在线观看视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品色激情综合| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲av男天堂| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲18禁久久av| 99久久人妻综合| 精品一区二区免费观看| 高清在线视频一区二区三区 | 国产亚洲精品av在线| 一级毛片电影观看 | 少妇熟女欧美另类| 国产精品福利在线免费观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产成人aa在线观看| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久久国产成人免费| 日韩一本色道免费dvd| 在线免费观看不下载黄p国产| 黄色一级大片看看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 三级经典国产精品| 日韩欧美精品免费久久| 身体一侧抽搐| 99久国产av精品国产电影| 在线观看av片永久免费下载| 久久人人爽人人片av| 国产一区二区三区av在线 | 成人特级黄色片久久久久久久| 性色avwww在线观看| 成人毛片60女人毛片免费| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品电影一区二区三区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品456在线播放app| 26uuu在线亚洲综合色| 乱码一卡2卡4卡精品| 波多野结衣高清作品| 成人午夜精彩视频在线观看|