白條雙鋸魚胚胎及仔稚魚發(fā)育形態(tài)學觀察

呂爽 夏蘇東 高燕 張丹 尤宏爭 牟希東

摘要：【目的】觀察記錄白條雙鋸魚從受精到孵化的胚胎發(fā)育及早期個體發(fā)育規(guī)律，為海葵魚的人工繁育提供科學依據(jù)。【方法】以人工海水為養(yǎng)殖用水，在水溫（27±1）℃、鹽度27‰的條件下，白條雙鋸魚自然產(chǎn)卵，經(jīng)紫外燈照射殺菌后進行人工孵化及仔稚魚培育，在顯微鏡下定期觀察記錄受精卵及仔稚魚發(fā)育過程的形態(tài)特征變化，并手繪制圖?！窘Y(jié)果】白條雙鋸魚受精卵整體上呈長條狀，橙紅或粉紅色，輪廓類似葫蘆狀的橢圓形，長徑2.40～2.60 mm、短徑0.90～1.20 mm。依據(jù)受精卵的分裂、分化及發(fā)育形態(tài)，可將白條雙鋸魚胚胎發(fā)育過程劃分為：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、體節(jié)期、翻轉(zhuǎn)期、血管形成期和器官形成期。白條雙鋸魚受精卵經(jīng)8～10 d的孵化時間破膜，初孵仔魚體長4.10～4.50 mm;孵出第1 d即可開口攝食輪蟲，孵出后7 d左右由仔魚期進入稚魚期，尾鰭、臀鰭和背鰭彼此分離，此時的體長達7.67±0.48 mm;至孵化后第20 d開始出現(xiàn)第一道白色條紋;孵化后第30 d仔稚魚體色由黑色轉(zhuǎn)為暗紅色，并開始長出第二道白色條紋;從孵化后第50 d第二道白色條紋開始褪去;至孵化后第60 d其體色開始轉(zhuǎn)為紅色?！窘Y(jié)論】白條雙鋸魚胚體發(fā)育時間為8～10 d，相較于雙鋸魚屬其他品種需要更長的孵化時間，究其原因是白條雙鋸魚受精卵尺寸更大。此外，孵化環(huán)境溫度對受精卵的發(fā)育時間有明顯影響，在適當范圍內(nèi)，環(huán)境溫度越高白條雙鋸魚受精卵發(fā)育速度越快。白條雙鋸魚仔稚魚飼養(yǎng)宜分為3個階段喂養(yǎng)不同類型的餌料，以保證仔稚魚的高成活率。

關鍵詞： 白條雙鋸魚;受精卵;胚胎發(fā)育;仔稚魚;形態(tài)學

中圖分類號： S965.82? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2021）12-3303-08

Morphologic observation on embryonic and larval

development of Amphiprion frenatus

LYU Shuang1，2， XIA Su-dong1*， GAO Yan3， ZHANG Dan1， YOU Hong-zheng3，

MOU Xi-dong2， SUN Jin-hui1， JIANG Ju-feng3， MAO Tian-qi1

（1Department of Fishery Science， Tianjin Agricultural University/Tianjin Key Lab of Aqua-Ecology and Aquaculture，? Tianjin? 300384， China; 2Key Laboratory of Recreational Fisheries， Ministry of Agriculture and Rural Affairs/

Pearl River Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences， Guangzhou? 510380， China;

3Tianjin Fisheries Research Institute， Tianjin? 300221， China）

Abstract：【Objective】Observed and recorded the embryonic development and early ontogenesis of Amphiprion frenatus from fertilization to hatching， to provide scientific basis for artificial breeding of anemonefish. 【Method】Artificial seawater was used for aquaculture， anemonefish spawned at （27±1）℃， and in the salinity of 27‰ conditions. Artificially hatching and breeding larval and juvenile after the aquaculture water was sterilized by ultraviolet lamp. Morphological changes of zygote and larval and juvenile during development were observed regularly under a microscope and the images were freehand sketched. 【Result】The fertilized eggs of A. frenatus were long strips， orange-red or pink， with a gourd-like oval shape in outline， with a long diameter of 2.40-2.60 mm and a short diameter of 0.90-1.20 mm. According to the division， differentiation and developmental morphology of the zygote， the embryonic development of A. frenatus could be divided into following stages：precleavage stage， cleavage stage， blastocyst stage， gastrum stage， neuroembryo stage， segmental stage， turnover stage， angiogenesis stage and organogenesis stage. It took 8-10 days for the zygote to develop and break its egg membrane. The length of the newly hatched A. frenatus was 4.10-4.50 mm. On the first day after hatching， they could open their mouths to take food. They took about 7 d to develop from larva stage to juvenile stage. The caudal， anal and dorsal fins were separated from each other and the body length at this time reached 7.67±0.48 mm. The first white stripe appeared on the 20 d after incubation. On the 30 d after hatching， the body color of juvenile fish changed from black to dark red and began to grow a second white stripe. From 50 d after hatching， the second white stripe began to fade. On the 60 d after incubation， its body color began to turn red. 【Conclusion】The actual development time of the embryo body is 8-10 d， which is longer than that of other species belonging to Amphiprion. The reason is that the fertilized eggs of the A. frenatus are larger in size. In addition， the incubation environment temperature has influence on the development time of fertilized eggs， and the higher the ambient temperature is， the faster fertilized eggs of A. frenatus develop. The feeding of larval and juvenile of A. frenatus can be divided into three stages by feeding different types of bait to ensure the high survival rate of larval and juvenile.

Key words： Amphiprion frenatus; zygote; embryonic development; fish larvae; morphology

Foundation item：“Blue Granary Technology Innovation” Project of National Key Research and Development Program of China（2019YFD0902103）; Open Project of Key Laboratory of Recreational Fisheries， Ministry of Agriculture and Rural Affairs（XXYY202102）; Ornamental Fish Innovation Team Project of Tianjin Mariculture Research System（ITTMRS2021004）

0 引言

【研究意義】白條雙鋸魚（Amphiprion frenatus）又名番茄小丑魚（Tomato clownfish）或紅小丑魚（Red clownfish），隸屬于鱸形目（Perciformes）雀鯛科（Pomacentridae）?？~亞科（Amphiprioninae），分布于印度洋和太平洋珊瑚礁海域（張芬等，2017;李曉雨等，2018）。?？~是熱帶海水觀賞魚的重要品種，因其色彩絢麗多彩，形態(tài)甜美可愛，體型小巧靈動而備受消費者喜愛。海葵魚除了短暫的仔稚魚期，其生命周期中絕大部分時間與?？采夷芙档秃？U刺對自身的傷害（Feeney and Brooker，2017）。隨著自然環(huán)境的破壞及人工捕撈強度的增加，自然海域?？~類資源量逐年下降，但其人工繁育與養(yǎng)殖技術得到快速發(fā)展，因此亟待開展海葵魚生物學特性，尤其是繁殖生物學特性的研究，進一步推動海水觀賞魚人工養(yǎng)殖及其相關產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展?！厩叭搜芯窟M展】目前，針對海水觀賞魚的研究主要集中在其生活習性、分布、分類、生理、人工繁殖及發(fā)育等方面，已實現(xiàn)人工繁殖的魚類僅限于蝦虎魚科（Gobiidae）、擬雀鯛科（Pseudochromidae）和雀鯛科的部分品種。在雀鯛科中已發(fā)現(xiàn)的海葵魚約有30種，能實現(xiàn)人工繁育的有十幾種（劉亞娟等，2019）。針對?？~的胚胎及仔稚魚發(fā)育，Aratake和Naknzono（2005，2006）研究了紅雙帶小丑魚（A. clarkii）暫養(yǎng)在日本九州島西、南2個海域中其產(chǎn)卵卵徑和數(shù)量的季節(jié)性變化規(guī)律及卵徑與蘊含能量間的關系;Liew等（2006）在實驗室條件下觀察了眼斑雙鋸魚（A. ocellaris）胚胎發(fā)育的形態(tài)特征;Yasir和Qin（2007）研究了公子小丑魚的繁殖習性及胚胎和仔魚的發(fā)育過程;Dhaneesh等（2012）研究了背紋雙鋸魚（A. akallopisos）的繁殖特性、胚胎發(fā)育規(guī)律及其鹽度耐受性;Ye等（2011）探究了溫度對紅雙帶小丑幼魚成活率及生長發(fā)育的影響。近年來，國內(nèi)外學者對?？~繁殖生物學的研究逐步深入，尤其是隨著分子技術的發(fā)展，其繁殖發(fā)育過程中的性轉(zhuǎn)化機制也取得一定進展（Park et al.，2010;Kim et al.，2012）。鮑鷹等（2009，2011）對白條雙鋸魚和棘頰雀鯛（Premnas biaculeatus）的親魚、仔稚魚培養(yǎng)方法進行總結(jié);Ghosh等（2010）探究了ntl和sox3基因在白條雙鋸魚胚胎發(fā)育中的表達位置，并對白條雙鋸魚受精卵中胚層和神經(jīng)外胚層的發(fā)育過程進行分析;鞠晨曦和吳美慧（2018）對白條雙鋸魚人工養(yǎng)殖環(huán)境下的親魚飼養(yǎng)、幼魚孵化及仔稚魚喂養(yǎng)的技術要點進行闡述。【本研究切入點】隨著海水觀賞魚產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，針對?？~的研究越來越多，其繁殖特性和胚胎發(fā)育規(guī)律得到進一步明確，涉及背紋雙鋸魚（Dhaneesh et al.，2012）、眼斑雙鋸魚（鞠晨曦等，2014）、棘頰雀鯛 （單樂州等，2015;王珊珊，2015）及畢加索小丑魚（何麗斌等，2017）等，但至今未見有關白條雙鋸魚胚胎與仔稚魚發(fā)育形態(tài)特征變化的研究報道?！緮M解決的關鍵問題】開展白條雙鋸魚的人工孵化及養(yǎng)殖，通過顯微鏡拍照及繪制圖像方式進行白條雙鋸魚胚胎及仔稚魚發(fā)育觀察記錄，闡明其胚胎學和早期個體發(fā)育規(guī)律，為?？~的人工繁育提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 白條雙鋸魚親本培育

2020年6月—2021年2月，在天津市水產(chǎn)生態(tài)及養(yǎng)殖重點實驗室進行白條雙鋸魚親本培育。供試親魚購自天津市觀賞魚市場，其來源為泰國漁民野外捕撈并進口至國內(nèi)，共20尾，成功配對6組。白條雙鋸魚養(yǎng)殖于玻璃水槽中，養(yǎng)殖用水為人工海水，水溫（27±1）℃，鹽度27‰，溶解氧>5 mg/L，光照周期12 h：12 h;投喂蝦肉糜和魷魚肉糜，每天上、下午各投喂1次，飼料制成直徑1.8～2.3 mm的球狀，每次每對親魚投喂12～16粒，每天要及時清理殘余的飼料。每3 d換水1次，每次換水量在20%左右。

1. 2 白條雙鋸魚產(chǎn)卵、孵化及仔稚魚培育

白條雙鋸魚在產(chǎn)卵前利用嘴啄食和胸鰭扇動的方式，清理巢穴中巖石表面的藻類、污物及砂礫，然后將卵產(chǎn)于經(jīng)精心清理的巖石上。白條雙鋸魚產(chǎn)卵前后有護卵行為，可選取適當具有遮蔽性的容器作為產(chǎn)卵床，如花盆或瓦罐壁等。本研究選用從中間剖開的半邊陶制花盆作為白條雙鋸魚的產(chǎn)卵床和巢穴。

白條雙鋸魚親魚通常在下午16：00時前后開始產(chǎn)卵，每次產(chǎn)卵300～700枚。雌魚發(fā)情后以腹部摩擦產(chǎn)卵床排出卵子，與此同時雄魚在雌魚排出的卵子上射精以完成受精，形成受精卵。交配歷時一般為1.5～3.0 h。受精卵的動物極形成黑褐色附著絲，協(xié)助受精卵黏附在產(chǎn)卵床上。產(chǎn)卵后，白條雙鋸魚親魚護卵特性表現(xiàn)為孵化過程中精心維護產(chǎn)卵床環(huán)境，親魚面向魚卵用其胸鰭扇動水流，為受精卵提供充足氧氣。本研究于孵化缸內(nèi)放置氣石充氣增氧，旨在產(chǎn)生水流吹動魚卵塊，輔助魚卵孵化并協(xié)助仔稚魚破膜。在孵化過程中，水溫控制在（27±1）℃，鹽度為27‰，使用紫外燈照射殺菌，保證鹽度、水溫與親魚缸相同。計錄好受精卵破膜的時間，當天晚上緊閉門窗遮光，緩慢拿出產(chǎn)卵床置于孵化缸中，同時以氣石持續(xù)充氣，為受精卵破膜提供助力以確保孵化成功率，孵化過程一般需2.0 h左右，孵化完成后調(diào)節(jié)孵化缸氣石至適量氣流。

破膜后采用光照誘導收集初孵仔魚，并轉(zhuǎn)移至仔魚缸（40 cm×25 cm×25 cm）內(nèi)飼養(yǎng)。仔魚孵出第1 d開始投喂經(jīng)小球藻營養(yǎng)強化的輪蟲，輪蟲投放量保持在10～12個/mL;同時在白條雙鋸魚仔魚培育缸中添加小球藻。從孵出第6 d開始漸進添加豐年蝦幼體，投喂密度為0.5個/mL;孵出第26 d開始投喂配合飼料，孵出第35 d開始全部轉(zhuǎn)變?yōu)橥段谷斯づ浜巷暳?。在轉(zhuǎn)食訓化期間遵循單次少量的原則，避免造成仔稚魚攝食不當而傷亡。

1. 3 觀察方法

親魚產(chǎn)卵結(jié)束后，將產(chǎn)卵巢穴取出進行取樣。親魚產(chǎn)卵第1 d每30 min取樣1次，第2 d每1 h取樣1次，第3 d每2 h取樣1次，第4 d開始每4 h取樣1次，第5 d開始每6 h取1次樣。每次取樣量為5～10枚受精卵。使用解剖刀將樣本卵刮下并以滴管吸取，置于顯微鏡載玻片上進行觀察。刮取后剩余的受精卵放回原缸中繼續(xù)孵化，分開后的親魚和受精卵保持同樣的水溫、鹽度、溶氧量及光照條件。參照劉亞娟等（2019）的方法，使用光源引誘仔稚魚至水面并收集，在JNOEC JSZ 6型號光學顯微鏡（德國OPTON公司）下進行觀察，后期稚幼魚需同時配合肉眼觀察，采用相機拍照記錄，并在顯微鏡下手工繪圖，記錄白條雙鋸魚受精卵及仔稚魚發(fā)育過程的形態(tài)特征變化。

2 結(jié)果與分析

2. 1 白條雙鋸魚胚胎發(fā)育觀察

通過觀察白條雙鋸魚受精卵的分裂、分化及發(fā)育形態(tài)，并結(jié)合相關研究資料，可將白條雙鋸魚胚胎發(fā)育過程劃分為：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經(jīng)胚期、體節(jié)期、翻轉(zhuǎn)期、血管形成期和器官形成期（鞠晨曦等，2014;邵鑫斌等，2017）。在試驗過程中約有60%的受精卵樣本可較清晰觀察到上述幾個發(fā)育階段的主要形態(tài)和功能特點。

2. 1. 1 受精卵形態(tài) 白條雙鋸魚受精卵整體上呈長條狀，輪廓類似葫蘆狀的橢圓形。受精卵動物極一側(cè)有叢狀的附著絲，有助于將受精卵黏附在產(chǎn)卵床上。附著絲在初入水中時有一定的流動性和黏性，約經(jīng)10 min后緩慢呈現(xiàn)固化。受精卵中間部位呈內(nèi)凹的圓弧，類似葫蘆的細腰部。在植物極一側(cè)圓弧較小，較動物極一側(cè)圓弧更尖細收斂。在整個孵化過程中，卵殼形態(tài)和尺寸無明顯變化，呈現(xiàn)出類似于蛋殼一樣的剛度，并具有一定程度的彈性。白條雙鋸魚受精卵長徑2.40～2.60 mm，短徑0.90～1.20 mm。在淡黃色的原生質(zhì)內(nèi)部有0.3～0.5 mm的球形油滴，還有數(shù)目不定的小滴散布在受精卵內(nèi)。卵黃呈黃澄色，整個卵塊在宏觀視角上呈橙紅或粉紅色。受精卵在進入水體后因吸水膨脹而現(xiàn)出卵周隙，且長徑的膨脹尺度在0.30 mm左右。

2. 1. 2 卵裂期（1～4 h） 白條雙鋸魚受精卵進入水體后先進行受精卵激活。水分子經(jīng)過受精卵的外膜滲透作用進入外殼與卵黃絨毛膜之間，從動物極進入并逐步浸入植物極，從而將外殼與卵黃絨毛膜分離，形成卵周隙，并在植物極一側(cè)出現(xiàn)明顯的月牙形空間。此時，受精卵激活完成，動物極的有絲分裂開始活躍，紡錘絲開始形成并進入有絲分裂過程。

卵細胞受精1 h后，原生質(zhì)開始不斷地從整個受精卵向動物極一側(cè)流動。受精1 h 20 min后，初期動物極單個大的受精卵細胞開始從正中間的部位分裂，呈現(xiàn)出受精卵細胞的第一道分裂溝。分裂溝持續(xù)擴展，最終將受精卵細胞分為兩半，形成2個細胞，即2-細胞期（圖1-1）;受精2 h 10 min后，在垂直于第一道分裂溝的位置，第二道分裂溝開始成型。從動物極一側(cè)觀察，呈現(xiàn)出如同將蛋糕以垂直交叉切割成均勻的4個等份，即受精卵發(fā)育至4-細胞期（圖1-2）;此后，胚盤細胞以30～35 min的間隔進行有絲分裂，依次進入8-細胞期（圖1-3）、16-細胞期（圖1-4）、32-細胞期（圖1-5）和64-細胞期（圖1-6）。隨著胚盤細胞的不斷分裂，在整體胚盤體積無明顯變化或稍有增大的情況下，胚盤細胞逐漸變小并開始層疊。單個胚盤細胞也從邊界分明、清晰可見逐漸變?yōu)榉至褱峡v橫交錯，且細小而難以區(qū)分。

2. 1. 3 囊胚期（4～12 h） 受精卵經(jīng)卵裂不斷地細分變小，直到細胞邊界模糊難以區(qū)分。細胞層疊并隆起，囊胚吸附在動物極的絨毛膜一側(cè)并開始包裹動物極的原生質(zhì)膜，呈碗狀或帽狀（圖1-7）。隨著囊胚體不斷地擴展并包裹絨毛膜，而形成囊胚腔（圖1-8）。白條雙鋸魚受精卵從受精后5～6 h開始進入囊胚期;至受精后8 h可觀察到油球（圖1-9），也就是中央大油滴有向動物極移動的趨勢。究其原因可能是原生質(zhì)因胚盤的能量消耗不斷向動物極移動，從而帶動脂肪球移動。在原生質(zhì)的流動過程中也觀察到離散的小油滴融合或破散現(xiàn)象。白條雙鋸魚受精胚盤在受精后12 h左右開始結(jié)束囊胚期，進入原腸胚期。

2. 1. 4 原腸胚期（12～20 h） 在原腸胚期，胚體呈口袋狀，起始于動物極不斷向植物極擴張包裹。胚盤隨著自身的不斷分裂與分化，原腸胚不斷變深，并逐漸包裹吞噬卵黃（圖1-10）。當這種包裹擴張至卵黃的25%位置后，原腸胚一側(cè)沿縱向出現(xiàn)加厚跡象，即胚體的雛形。原腸胚包裹卵黃達到50%的位置時，可明顯地觀察到原腸胚包裹卵黃前緣投像出來的胚環(huán)（圖1-11）。原腸胚繼續(xù)發(fā)育生長，在后續(xù)過程中可看到原腸胚的細胞開始向胚體聚集，促使胚體愈發(fā)粗壯、明顯，但其他部位的細胞對原生質(zhì)依然包裹（圖1-12）。受精20 h后，受精卵開始脫離原腸胚，進入神經(jīng)與體節(jié)發(fā)育期。

2. 1. 5 神經(jīng)與體節(jié)發(fā)育期（20～35 h） 白條雙鋸魚卵受精20 h后，胚體開始發(fā)育形成神經(jīng)系統(tǒng)和體節(jié)。胚體與胚外膜層完全包裹原生質(zhì)時，胚體發(fā)育得愈發(fā)粗厚，開始形成頭部和神經(jīng)外胚層。此時，貫穿胚體的神經(jīng)索和神經(jīng)通道也逐漸顯現(xiàn)。在動物極附近出現(xiàn)視泡（視芽），也就是視原基，是白條雙鋸魚眼睛的發(fā)育起源結(jié)構，在受精25 h左右開始顯現(xiàn)（圖1-13和圖1-14）。同期，白條雙鋸魚的吻部結(jié)構開始形成，但不是非常明顯。胚環(huán)消逝，胚孔同時消失閉合。從受精23 h后開始，可觀察到體節(jié)結(jié)構，體節(jié)數(shù)量為4～6個。發(fā)育進行到受精35 h后可觀察到23～25個體節(jié)（圖1-15）。黑色素細胞也在這一期間形成，主要出現(xiàn)在胚體的背部及胚外膜的大部分區(qū)域，大面積分布的黑色素細胞使得受精卵集群塊肉眼觀察呈棕色。卵黃的原生質(zhì)被大量消耗，只剩原來下的50%～60%。胚體尾巴脫離卵黃，且尾巴具有抽甩動作。

2. 1. 6 翻轉(zhuǎn)期（35～70 h） 白條雙鋸魚受精卵在受精35 h后，胚體開始反轉(zhuǎn)。即隨著胚體尾部的不斷擺動推動，以及胚體體長的發(fā)育變長，致使朝向動物極的胚體頭部越過動物極而朝向植物極。整個胚體在動物極半圓形的空間內(nèi)翻折（圖1-16）。受精48 h后，可在受精卵樣本中觀察到心臟的結(jié)構。此時，心臟只是胚體頭部與卵黃囊交接部的一個膜狀，并逐漸發(fā)育成管狀結(jié)構。心臟雛形的跳動較微弱，55～60次/min，尚未觀察到明顯的血細胞。值得注意的是，從受精卵受精開始即觀察到卵黃中央大油滴的附近有一團黑色斑塊狀物質(zhì)——黑色素，發(fā)育到翻轉(zhuǎn)期黑色素團擴散消融，同時黑色素細胞在胚體各部均有出現(xiàn)。與此同時，胚體結(jié)構進一步分化，可觀察到明顯的耳板及嗅囊結(jié)構，但未觀察到耳石。尾巴擺動越來越劇烈，更多長度的尾巴開始脫離卵黃囊，胚體頭部開始越過動物極而朝向植物極（圖1-17），翻轉(zhuǎn)過程完成。

2. 1. 7 血管形成期（70～120 h） 受精100 h后，首次觀察到血細胞的出現(xiàn)（圖1-18）。血細胞數(shù)量逐漸增多，在心臟的泵輸作用下往返于胚體與胚外膜之間，不斷將胚外膜吸收的卵黃營養(yǎng)物質(zhì)及從外界吸收氧氣運輸?shù)脚唧w，供給胚體發(fā)育。此時，可觀察到胚外膜和胚體上有縱橫交錯的血管通路（圖1-19）。血液在心臟靠近胚外膜血管處聚集，等待心臟將其泵入胚體（圖1-20），其心率達110～120次/min。視泡的尺寸增大，且顏色愈發(fā)黑亮（圖1-21）。能觀察卵群塊，顏色轉(zhuǎn)為深棕色。

2. 1. 8 器官形成期（120～150 h） 受精120 h后，胚體的血紅細胞數(shù)量進一步增多，呈現(xiàn)出粉紅色的血管通路，心肌也呈紅色。心臟脈搏已加快到150～160次/min，胸鰭雛形已極為明顯（圖1-22）。對未破殼的受精卵進行解剖觀察，發(fā)現(xiàn)白條雙鋸魚的胸鰭已發(fā)育成熟，但背鰭、尾鰭和臀鰭依然包圍著胚體的軀體，并相互連接。白條雙鋸魚的吻部已基本成形，但尚未開口;消化道已形成，腹腔內(nèi)壁呈現(xiàn)光譜樣彩色光澤;眼睛已發(fā)育較成熟，烏黑且有光澤，虹膜囊散布于視網(wǎng)膜上;耳石成對出現(xiàn)（圖1-23）。整個胚體的尺寸已發(fā)育生長至卵長徑的1.4～1.6倍。

2. 1. 9 孵化期（150～210 h） 胚體在卵膜內(nèi)彎曲，卵殼尺寸并未發(fā)生明顯變化，但膨大的胚體幾乎充滿整個卵殼（圖1-24）。心包已完全發(fā)育成形，心臟脈搏已加快到160～170次/min。整個胚體的尺寸已發(fā)育生長至卵長徑的1.8～2.0倍。仔魚尺寸達4.10～4.50 mm，而卵黃尺寸僅為0.50～0.80 mm。劇烈擺動的尾部擊破卵殼，仔魚從尾部破殼而出。

2. 2 白條雙鋸魚仔稚魚形態(tài)學觀察

剛出殼的白條雙鋸魚仔魚體長4.10～4.50 mm。孵出1 d后仔魚即可攝食，此時投喂輪蟲;剛孵出仔魚的背鰭褶皺連接著尾鰭和臀鰭褶皺，鰭狀體下的鰭條逐漸明顯，背鰭和臀鰭開始在鰭褶上發(fā)育。與其他海葵魚不同的是，白條雙鋸魚的背鰭連接為一體，其后部較長，飄逸而出。消化道內(nèi)充滿食物，呈綠色;紅色素開始顯現(xiàn)，魚體呈澄紅色。孵出后第7 d仔魚轉(zhuǎn)變?yōu)橹婶~，尾鰭、臀鰭和背鰭彼此分離，此時的體長達7.67±0.48 mm;孵出后第14 d，稚魚的體長達12.53±0.65 mm;孵出后第18 d，其體長達16.54±1.86 mm，此時整個幼魚呈橘紅色;孵出后第20 d，在白條雙鋸魚稚魚眼睛的后部、腮的前部生長出一條從頭頂向下頜的白色條紋，條紋寬度達2.50～3.50 mm，是白條雙鋸魚較有標志性的條紋;背鰭中部同樣出現(xiàn)一條白色條紋，但在后續(xù)發(fā)育過程中逐漸退化消失。

在發(fā)育過程中，白條雙鋸魚仔稚魚的體色也發(fā)生明顯變化。剛出殼的仔魚呈澄紅色，后逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)殚偌t色，從孵出后第15 d起仔稚魚體色變黑;至孵出后第20 d開始出現(xiàn)第一道白色條紋;孵出后第30 d仔稚魚體色由黑色轉(zhuǎn)為暗紅色，并開始長出第二道白色條紋;從孵出后第50 d第二道白色條紋開始褪去;至孵出后第60 d其體色開始轉(zhuǎn)為紅色。

3 討論

3. 1 白條雙鋸魚胚胎發(fā)育過程及孵化時間

白條雙鋸魚卵為黏性卵，包含有大油滴且布滿細小油滴，拍攝圖片時受精卵結(jié)構易被油滴干涉遮擋。為此，本研究采用顯微鏡拍照結(jié)合手繪制圖的方法對白條雙鋸魚受精卵發(fā)育過程進行詳細闡述，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白條雙鋸魚受精卵的各發(fā)育階段與已研究報道的雀鯛科?？~亞科雙鋸魚屬魚類相似，包括棘頰雀鯛、眼斑雙鋸魚、背紋雙鋸魚、克氏雙鋸魚（A. clarkii）及黑雙鋸魚（A. melanopus）等，但不同研究對?？~受精卵發(fā)育階段的劃分略有不同。何麗斌等（2017）將其劃分為受精卵期、胚盤期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經(jīng)胚期和器官形成期，王珊珊（2015）則將胚盤期列為卵裂前期，同時在神經(jīng)胚期后增加了體節(jié)期、翻轉(zhuǎn)期和血管形成期，并在最后階段增加了孵化期。本研究參照王珊珊（2015）的劃分方法對白條雙鋸魚的胚胎發(fā)育階段進行劃分，且描述更清晰。

?？~的胚胎發(fā)育過程與水溫、光照、鹽度、供氧量、氣流水流強度及品種等密切相關。一般情況下，水溫越高的孵化環(huán)境其孵化破殼時間越短。與其他的海葵魚品種相比，白條雙鋸魚的受精卵尺寸更大，發(fā)育所需的時間更長。鮑鷹等（2009）研究表明，在水溫（26±1）℃、鹽度30‰～32‰的條件下白條雙鋸魚人工孵化時間為10 d;Anto和Turingan（2010）研究發(fā)現(xiàn)，在水溫（25±1）℃、鹽度（32±1）‰的條件下白條雙鋸魚孵化時間為8～11 d;Ghosh等（2010）在白條雙鋸魚的研究中統(tǒng)計得知其孵化時間為7 d;Dhaneesh等（2012）研究表明背紋雙鋸魚的孵化時間為6.5 d;張薇（2019）對白條雙鋸魚野生魚、眼斑雙鋸魚野生魚、?？p鋸魚（A. percula）選育種和眼斑雙鋸魚選育種的胚胎發(fā)育進行觀察，發(fā)現(xiàn)4種海葵魚的孵化時間均大于7 d;何麗斌等（2017）研究證實水溫為（26±1）℃時畢加索小丑魚的孵化時間約9 d;而本研究觀察得知白條雙鋸魚的孵化時間為8～10 d，可能由于孵化水溫（27±1）℃略高所致?？梢姡煌贩N?？~受精卵孵化時間的差異主要是因品種及孵化水溫等條件不同所導致。

3. 2 白條雙鋸魚仔稚魚飼養(yǎng)培育

白條雙鋸魚仔稚魚喂養(yǎng)可分為3個階段。第一階段通常是指孵出破殼后第1～5 d，主要餌料為輪蟲;第二階段為孵出破殼后第6～25 d，主要投喂豐年蝦幼體;第三階段為孵出破殼第26 d以后，可適當投喂魚蝦肉糜，并投喂配合飼料。試驗期間每隔4～7 d均需對養(yǎng)殖缸進行清潔，防止藻類和細菌滋生導致白條雙鋸魚發(fā)病死亡。鞠晨曦等（2014）建議在眼斑雙鋸魚孵化后1～7 d喂食輪蟲，孵化后3～7 d可適當增加豐年蟲，至幼魚體長超過1 cm后可喂食顆粒飼料。單樂州等（2015）研究透紅小丑魚繁殖習性及胚胎發(fā)育時發(fā)現(xiàn)，初孵仔魚宜投喂輪蟲，孵化15 d后開始喂食鹵蟲無節(jié)幼體，45 d后開始投喂配合飼料。白條雙鋸魚人工繁育過程中的主要餌料依次為輪蟲、鹵蟲無節(jié)幼體及人工配合飼料。

4 結(jié)論

白條雙鋸魚胚體發(fā)育時間為8～10 d，相較于雙鋸魚屬其他品種需要更長的孵化時間，究其原因是白條雙鋸魚受精卵尺寸更大。此外，孵化環(huán)境溫度對受精卵的發(fā)育時間有明顯影響，在適當范圍內(nèi)，環(huán)境溫度越高白條雙鋸魚受精卵發(fā)育速度越快。白條雙鋸魚仔稚魚飼養(yǎng)宜分為3個階段喂養(yǎng)不同類型的餌料，以保證仔稚魚的高成活率。

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（責任編輯 陳德元）