點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中神經(jīng)型一氧化氮合成酶的分布與定位

白帆 孫敬鋒 張勝根 韓卓然 呂愛軍 胡秀彩

摘要：【目的】研究點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中的一氧化氮（NO）含量及神經(jīng)型一氧化氮合成酶（nNOS）分布與活性，為深入揭示NO在點(diǎn)帶石斑魚神經(jīng)系統(tǒng)中的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。【方法】采用NADPH-d組織化學(xué)染色法、免疫組織化學(xué)法、蛋白免疫印跡（Western blotting）及Griess試劑法，對(duì)點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中nNOS的分布與活性及NO含量進(jìn)行分析。【結(jié)果】經(jīng)NADPH-d組織化學(xué)染色后，一氧化氮合成酶（NOS）陽性物質(zhì)呈藍(lán)色。在點(diǎn)帶石斑魚大腦中，NOS陽性物質(zhì)位于神經(jīng)元和神經(jīng)纖維;在小腦中，NOS分布在顆粒層的顆粒細(xì)胞、分子層的神經(jīng)纖維和浦肯野細(xì)胞層的浦肯野細(xì)胞;在視網(wǎng)膜中，NOS分布于色素上皮層、視錐視桿層、外核層、外網(wǎng)層、內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后，nNOS陽性物質(zhì)呈深棕色。在大腦中，nNOS存在于神經(jīng)元和神經(jīng)纖維;在小腦中，nNOS分布在顆粒層、分子層和浦肯野細(xì)胞層;在視網(wǎng)膜中，nNOS分布在色素上皮層、視錐視桿層、外核層、外網(wǎng)層、內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中的nNOS在顯色后的硝酸纖維素膜上均出現(xiàn)3條免疫印跡條帶，對(duì)應(yīng)分子量分別為80、120和130 kD。NO含量在點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中分別為17.601±1.743和13.624±1.249 ?mol/L，nNOS活性在腦組織和視網(wǎng)膜中分別為38.070±3.047和23.748±2.860 U/mg?！窘Y(jié)論】在點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中均存在nNOS，推測(cè)nNOS在點(diǎn)帶石斑魚腦神經(jīng)及視神經(jīng)系統(tǒng)生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。腦組織中的NO含量和nNOS活性均顯著高于視網(wǎng)膜，是由于腦組織作為重要的中樞神經(jīng)，對(duì)機(jī)體生理功能起重要調(diào)節(jié)作用。

關(guān)鍵詞： 點(diǎn)帶石斑魚;神經(jīng)型一氧化氮合成酶（nNOS）;腦組織;視網(wǎng)膜;免疫組織化學(xué)定位;NADPH-d組織化學(xué)染色

中圖分類號(hào)： S965.334? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2021）12-3286-08

Immunohistochemical distribution and localization of neuronal nitric oxide synthase in brain and retina of Epinephelus coioides

BAI Fan， SUN Jing-feng*， ZHANG Sheng-gen， HAN Zhuo-ran， LYU Ai-jun， HU Xiu-cai

（College of Fisheries， Tianjin Agricultural University/Tianjin Key Lab of Aqua-ecology and

Aquaculture， Tianjin? 300384， China）

Abstract：【Objective】The content of nitric oxide（NO）， distribution and activity of neuronal nitric oxide synthase （nNOS） in brain and retina of Epinephelus coioides were studied to provide foundation for further revealing the mechanism of action of NO in the nervous system of E. coioides. 【Method】NADPH-d staining， immunohistochemical method， western blotting and Griess reaction were used to study the distribution， activity of nNOS and NO content in the brain and retina.【Result】The positive material of nitric oxide synthase（NOS） was stained blue using NADPH-d method. NOS positive materials were found in neurons and nerve fibers in the cerebrum. In the cerebellum， NOS was distributed in granular cells of the granular layer， nerve fibers of the molecular layer， and Purkinje cells of the Purkinje cell layer. In the retina， the NOS was found to be distributed in the pigment epithelium layer， rod and cone layer， outer nuclear layer， outer plexiform layer， inner nuclear layer， inner plexiform layer， ganglion cell layer and retinal nerve fiber layer. In addition， the immunohistochemical positive materials of nNOS were stained dark brown. In the cerebrum， nNOS was distributed in neurons and nerve fibers. In the cerebellum， nNOS was distributed in the granular layer， molecular layer and Purkinje cell layer. In the retina， nNOS was found to be distributed in the pigment epithelium layer， rod and cone layer， outer nuclear layer， outer plexiform layer， inner nuclear layer， inner plexiform layer， ganglion cell layer and retinal nerve fiber layer. The result of western blotting showed that there were three protein blotting bands on the nitrocellulose membrane after co-lor development for nNOS in the brain and retina， their corresponding molecular weights were 80， 120 and 130 kD， respectively. The NO content in brain and retina were 17.601±1.743 and 13.624±1.249 mol/L， respectively. The nNOS acti-vity in brain and retina were 38.070±3.047 and 23.748±2.860 U/mg， respectively. 【Conclusion】nNOS exists in brain and retina of E. coioides， and it is speculated that nNOS may play an important role in the cranial and visual nervous system physiological activity of fish. The NO content and nNOS activity in brain are significantly higher than those in retina， presumably because the brain is the important central nervous system and plays an important role in regulating the physiological functions of body.

Key words： Epinephelus coioides; neuronal nitric oxide synthase（nNOS）; brain; retina; immunohistochemistry; NADPH-d staining

Foundation item： National Natural Science Foundation of China （31972840）; Tianjin Natural Science Foundation （19JCZDJC34600）;? Scientific Research and Innovation Project of Tianjin Agricultural University （2019XY037）

0 引言

【研究意義】一氧化氮（Nitric oxide，NO）是一種信使分子，具有多種生物學(xué)功能，能介導(dǎo)血管內(nèi)皮源性舒張，并參與免疫調(diào)節(jié)和免疫耐受（Seabra and Duran，2017;Alimoradi et al.，2019;Yu et al.，2019）。NO是由L-精氨酸末端胍基氧化產(chǎn)生，此反應(yīng)主要依靠一氧化氮合成酶（Nitric oxide synthases，NOS）催化完成（Hedison et al.，2018）。根據(jù)組織表達(dá)及其功能的不同，可將NOS劃分為3種：神經(jīng)型一氧化氮合成酶（Neuronal nitric oxide synthase，nNOS）、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（Inducible nitric oxide synthase，iNOS）和內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（Endothelial nitric oxide synthase，eNOS）（Bogdan，2015）。其中，nNOS主要在腦神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)元中表達(dá)，通過神經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)而引起血管和非血管平滑肌松弛，產(chǎn)生的NO參與大腦的發(fā)育、學(xué)習(xí)、擴(kuò)展及記憶等過程（Luo and Zhu，2011;刁宏旺和李守林，2017;Chong et al.，2019）。因此，研究魚類nNOS的分布及活性，可為揭示NO在魚類神經(jīng)系統(tǒng)中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】NO是神經(jīng)元NMDA受體激活后產(chǎn)生的一種重要遞質(zhì)，可促使神經(jīng)系統(tǒng)第二信使cGMP的產(chǎn)生，從而對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生影響（Zhang et al.，2017）。視網(wǎng)膜是魚類產(chǎn)生視覺的部位，而NO是魚類視網(wǎng)膜中重要的神經(jīng)調(diào)節(jié)因子，通過影響突觸前和突觸后的神經(jīng)元以調(diào)節(jié)視覺信息處理（Neufeld et al.，2000;李超等，2014;Wang et al.，2018）。3種亞型NOS在視網(wǎng)膜中均有不同程度的表達(dá)，但nNOS是視覺反應(yīng)的主要參與者（Vielma et al.，2012）。還原型輔酶Ⅱ依賴性黃遞酶（NADPH-d）作為NOS的組織化學(xué)標(biāo)記物，可間接反映NO的分布及活性，已廣泛應(yīng)用于NOS在神經(jīng)系統(tǒng)中的定位研究，但NADPH-d組織化學(xué)染色無法直接區(qū)分NOS的3種亞型（Sun et al.，2020）。免疫組織化學(xué)法是通過抗原和抗體特異性結(jié)合區(qū)分不同亞型NOS（韓卓然等，2016），已有學(xué)者將這2種方法相結(jié)合用于神經(jīng)系統(tǒng)中的nNOS定位研究。Sánchez-Islas和León-Olea（2001）通過分析nNOS在美西鈍口螈（Ambystoma mexicanum）嗅上皮中的分布情況，發(fā)現(xiàn)其主要存在于嗅覺受體神經(jīng)元;王平利等（2011）研究發(fā)現(xiàn)恒河猴（Macaca mulatta）紋狀體中分布著大量的nNOS陽性神經(jīng)元;Bombardi等（2013）研究證實(shí)nNOS在寬吻海豚（Tursiops truncatus）的脊髓中廣泛表達(dá);Chong等（2019）研究報(bào)道了nNOS在嚙齒動(dòng)物大腦不同區(qū)域的分布情況;López等（2019）通過研究澳大利亞肺魚（Neoceratodus forsteri）氮能系統(tǒng)，并以此評(píng)估神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)間的相互作用;Serenini等（2020）研究證實(shí)NO是肌腸神經(jīng)細(xì)胞中重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，在平滑肌松弛過程中發(fā)揮中介作用;Yan等（2021）研究發(fā)現(xiàn)NOS在大鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞中有表達(dá)。【本研究切入點(diǎn)】目前，針對(duì)nNOS的研究主要集中在哺乳動(dòng)物（Anaeigoudari et al.，2016;Coelho et al.，2017;Zhang et al.，2018），僅在馬蘇大馬哈魚（Oncorhynchus masou）及大菱鲆（Scophthalmus maximus）等少數(shù)魚類中有報(bào)道（Pushchina et al.，2012;韓卓然等，2016），而有關(guān)點(diǎn)帶石斑魚（Epinephelus coioides）腦組織和視網(wǎng)膜中nNOS分布及活性與NO含量的研究至今鮮見報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用NADPH-d組織化學(xué)染色法、免疫組織化學(xué)法、蛋白免疫印跡（Western blotting）及Griess試劑法，對(duì)點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中nNOS的分布與活性及NO含量進(jìn)行研究，為深入揭示NO在點(diǎn)帶石斑魚神經(jīng)系統(tǒng)中的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

供試點(diǎn)帶石斑魚購(gòu)自天津市海發(fā)珍品實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司，平均體長(zhǎng)20±1 cm、平均體重210±20 g;挑選健康無病的30尾點(diǎn)帶石斑魚備用。羊nNOS一抗（ab6175）和二抗（ab6746）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司;NO測(cè)定試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所;NOS測(cè)定試劑盒和蛋白定量測(cè)試盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1. 2 樣品采集與處理

點(diǎn)帶石斑魚以三卡因（MS-222）進(jìn)行麻醉，體表消毒后于冰盤上取出腦組織和視網(wǎng)膜，放入4%多聚甲醛中固定5 h，然后置于20%蔗糖溶液中至組織沉底，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 NADPH-d組織化學(xué)染色

使用冰凍切片機(jī)（Thermo Microm HM 525）進(jìn)行快速冷凍切片;切片（厚度7 ?m）以PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）沖洗3次，每次5 min;然后在β-NADPH孵育液（0.3% Triton X-100，1 mg/mL NBT，0.6 mg/mL β-NADPH，0.1 mol/L PBS）中37 ℃孵育3 h，經(jīng)脫水、透明及封片后進(jìn)行鏡檢。陰性對(duì)照孵育液中不含β-NADPH。

1. 4 免疫組織化學(xué)定位

參照韓卓然等（2016）的方法進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位。在阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性后進(jìn)行抗原修復(fù)，具體操作：將冷凍切片置于枸櫞酸緩沖液（0.01 mol/L，pH 6.0）中煮沸15～20 min。以PBS（0.01 mol/L，pH 7.4）代替一抗用于陰性對(duì)照。

1. 5 Western blotting檢測(cè)

將點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜樣品分別置于勻漿器中，加入單去污劑裂解液（0.05 mol/L Tris HCl，8.76 mg/mL NaCl，1% Triton X-100，100 μg/mL PMSF），在冰上進(jìn)行充分勻漿后，參照孫敬鋒等（2017）的方法進(jìn)行Western blotting檢測(cè)。

1. 6 NO含量與nNOS活性測(cè)定

取點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜樣品各100 mg，解凍后充分勻漿，分別采用蛋白定量測(cè)試盒（考馬斯亮藍(lán)法）測(cè)定蛋白含量，NO測(cè)定試劑盒（Griess試劑法）測(cè)定NO含量，NOS測(cè)定試劑盒（化學(xué)比濁法）測(cè)定nNOS活性，具體方法按試劑盒說明進(jìn)行操作。

1. 7 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 16.0中的獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 NADPH-d組織化學(xué)染色結(jié)果

經(jīng)NADPH-d組織化學(xué)染色后，NOS陽性物質(zhì)呈藍(lán)色。如圖1-A所示，點(diǎn)帶石斑魚大腦中存在豐富的神經(jīng)元和神經(jīng)纖維，神經(jīng)元細(xì)胞核淡染，呈梭形或多角形，還有一些呈卵圓形。小腦顆粒層中的陽性顆粒細(xì)胞及分子層中的陽性神經(jīng)纖維均呈藍(lán)色;浦肯野細(xì)胞中也存在NOS陽性反應(yīng)（圖1-B）。在視網(wǎng)膜中，色素上皮層和視錐視桿層可觀察到大量藍(lán)色顆粒（圖1-C）;此外，在外核層、外網(wǎng)層和內(nèi)核層（圖1-D），以及內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層均可觀察到NOS陽性物質(zhì)（圖1-E）。

2. 2 免疫組織化學(xué)定位結(jié)果

經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后，nNOS陽性物質(zhì)呈深棕色。在點(diǎn)帶石斑魚大腦中可觀察到神經(jīng)元（圖2-A）和神經(jīng)纖維（圖2-B）nNOS陽性物質(zhì);在小腦顆粒層中有少量nNOS陽性顆粒細(xì)胞，分子層中有許多的nNOS陽性神經(jīng)纖維，浦肯野細(xì)胞也呈現(xiàn)nNOS陽性反應(yīng)（圖2-C）。在視網(wǎng)膜中的色素上皮層、視錐視桿層、外核層和外網(wǎng)層（圖2-D），以及內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層均呈明顯的nNOS陽性反應(yīng)（圖2-E）。

2. 3 Western blotting檢測(cè)結(jié)果

經(jīng)Western blotting檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中的nNOS分別在硝酸纖維素膜上出現(xiàn)3條免疫印跡條帶（圖3）。根據(jù)蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker遷移率，計(jì)算得到對(duì)應(yīng)的蛋白分子量分別為80、120和130 kD。

2. 4 NO含量及nNOS活性測(cè)定結(jié)果

由圖4可看出，點(diǎn)帶石斑魚腦組織中NO含量為17.601±1.743 ?mol/L，視網(wǎng)膜中NO含量為13.624±1.249 ?mol/L，即腦組織中的NO含量顯著高于視網(wǎng)膜（P<0.05，下同）。由圖5可看出，點(diǎn)帶石斑魚腦組織中nNOS活性為38.070±3.047 U/mg，視網(wǎng)膜中nNOS活性為23.748±2.860 U/mg，即腦組織中的nNOS活性顯著高于視網(wǎng)膜。

3 討論

NO是一種簡(jiǎn)單的雙原子分子，參與體內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，在多種器官、系統(tǒng)和組織中發(fā)揮重要作用（Wang et al.，2018;Tejero et al.，2019）。NOS是NO合成過程中的關(guān)鍵酶，由于NO不穩(wěn)定，因此主要通過觀察NOS分布及活性對(duì)NO進(jìn)行定位研究（劉鵬等，2009;高川等，2020）。本研究采用NADPH-d組織化學(xué)染色法定位NOS，但無法直接鑒別NOS的亞型，故同時(shí)采用免疫組織化學(xué)法定位nNOS。nNOS結(jié)構(gòu)域高度保守，在不同物種中均含有氧化蛋白域、還原蛋白域及鈣調(diào)素（CaM）結(jié)合位點(diǎn)等結(jié)構(gòu)域（張湑澤等，2014）。nNOS的基因編碼區(qū)（CDS）高度保守，人類和鼠的nNOS氨基酸序列相似性為93%，鼠和牛的nNOS氨基酸序列相似性為98%（杜濱，2012）。經(jīng)BLAST比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)，羊nNOS抗體作為抗原肽的第1409～1429位氨基酸序列高度保守，故本研究以羊nNOS抗體檢測(cè)點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中的nNOS分布情況。

經(jīng)NADPH-d染色后，發(fā)現(xiàn)在點(diǎn)帶石斑魚大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元和神經(jīng)纖維及小腦皮質(zhì)顆粒層、分子層和浦肯野細(xì)胞層中均存在NOS，與Schober等（1993）對(duì)虹鱒（Oncorhynchus mickiss）、Holmqvist等（1994）對(duì)大西洋鮭（Salmo salar）的研究結(jié)果相似。Villani和Guarnieri（1996）利用NADPH-d組織化學(xué)染色法對(duì)金魚（Carassius auratus）視網(wǎng)膜中的NOS進(jìn)行定位，結(jié)果表明NOS主要分布在內(nèi)核層、節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層和外網(wǎng)層。除此之外，本研究還在點(diǎn)帶石斑魚視網(wǎng)膜的色素上皮層、視錐視桿層、外核層和視神經(jīng)纖維層中發(fā)現(xiàn)NOS陽性表達(dá)，造成這種差異的原因可能是魚的種類不同。鑒于NOS的3種亞型無法通過NADPH-d組織化學(xué)染色進(jìn)行直接鑒別，本研究同時(shí)采用免疫組織化學(xué)法定位nNOS，結(jié)果發(fā)現(xiàn)nNOS位于點(diǎn)帶石斑魚大腦皮質(zhì)的神經(jīng)元和神經(jīng)纖維及小腦皮質(zhì)顆粒層、分子層和浦肯野細(xì)胞層中，與NADPH-d組織化學(xué)染色結(jié)果一致，且nNOS陽性神經(jīng)元主要呈梭形，與Jadhao和Malz（2004）在伯氏妊麗魚（Haplochromis burtoni）腦組織中的觀察結(jié)果相似。已有研究證明，NO是視網(wǎng)膜中生理及病理過程的重要活性介質(zhì)（Vielma et al.，2012）。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色后，在點(diǎn)帶石斑魚視網(wǎng)膜中深棕色的nNOS陽性物質(zhì)主要分布在色素上皮層、視錐視桿層、外核層、外網(wǎng)層、內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層，與NADPH-d組織化學(xué)染色顯示的NOS分布部位一致，但NADPH-d組織化學(xué)染色的外核層、外網(wǎng)層、內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)層、節(jié)細(xì)胞層和視神經(jīng)纖維層顏色較弱，究其原因可能是NADPH-d組織化學(xué)染色定位的是NOS（包含3種NOS亞型），而免疫組織化學(xué)只定位nNOS。在點(diǎn)帶石斑魚的腦組織和視網(wǎng)膜中均存在nNOS，故推測(cè)nNOS產(chǎn)生的NO可作為神經(jīng)遞質(zhì)介導(dǎo)并參與神經(jīng)系統(tǒng)的信息傳遞和生理調(diào)節(jié)過程。

Kim等（1999）采用Western blotting檢測(cè)NOS在大鼠、小鼠、豚鼠及兔子視網(wǎng)膜中的表達(dá)情況，結(jié)果均獲得1條分子量為155 kD的免疫印跡條帶。孫敬鋒等（2017）通過研究nNOS在毛蚶（Scapharca kagoshimensis）外套膜和鰓組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)有2條nNOS免疫反應(yīng)條帶，對(duì)應(yīng)的分子量分別為120和80 kD。本研究利用Western blotting對(duì)點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中的nNOS進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)果獲得3條免疫印跡條帶，對(duì)應(yīng)的蛋白分子量分別為80、120和130 kD。nNOS在進(jìn)化過程中高度保守，在不同物種的不同組織器官中均有分布，但其蛋白分子量存在差異。在點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中均出現(xiàn)3條不同分子量的nNOS免疫印跡條帶，究其原因可能是nNOS存在不同的修飾和剪接作用下并非以單一形式存在，但具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

NO含量變化在機(jī)體生理機(jī)能中發(fā)揮重要作用，免疫調(diào)節(jié)、血小板凝集反應(yīng)及神經(jīng)信號(hào)傳遞等生理過程均伴隨有低水平的NO，而許多疾病的產(chǎn)生和發(fā)展與機(jī)體體內(nèi)穩(wěn)定的NO含量變化有關(guān)（張勝根等，2011;Akanji et al.，2020）。在正常生理狀況下，nNOS可在組織器官內(nèi)低水平表達(dá)（Robbins and Grisham，1997）。張勝根等（2011）研究表明，在半滑舌鰨（Cynoglossus semilaevis Gunther）不同組織器官中均能檢測(cè)到NO和NOS，但不同組織器官中的NO含量和NOS活性存在明顯差異。本研究結(jié)果顯示，點(diǎn)帶石斑魚腦組織中的NO含量和nNOS活性均顯著高于視網(wǎng)膜，推測(cè)腦組織作為重要的中樞神經(jīng)，含有豐富的nNOS，產(chǎn)生的NO可調(diào)節(jié)機(jī)體的生理功能。

4 結(jié)論

在點(diǎn)帶石斑魚腦組織和視網(wǎng)膜中均存在nNOS，推測(cè)nNOS在點(diǎn)帶石斑魚腦神經(jīng)及視神經(jīng)系統(tǒng)生理活動(dòng)中發(fā)揮重要作用。腦組織中的NO含量和nNOS活性均顯著高于視網(wǎng)膜，是由于腦組織作為重要的中樞神經(jīng)，對(duì)機(jī)體生理功能起重要調(diào)節(jié)作用。

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（責(zé)任編輯 陳德元）