一個(gè)中國全色盲家系CNGB3基因新突變

周鐘強(qiáng) 彭海鷹 史平玲 唐賀 魏圓夢(mèng) 李苗 雷博 黃愛國

河南省人民醫(yī)院 鄭州大學(xué)人民醫(yī)院 河南省立眼科醫(yī)院 河南省眼科研究所，鄭州 450003

全色盲又稱典型性全色盲或視桿細(xì)胞單色視，是一種罕見的、常染色體隱性遺傳視錐細(xì)胞功能障礙疾病，主要表現(xiàn)為畏光、眼球震顫、視力下降和色覺異常[1-5]。目前已發(fā)現(xiàn)6個(gè)全色盲致病基因，分別是環(huán)核苷酸門控通道α3(cyclic nucleotide gated channel alpha 3，CNGA3)、環(huán)核苷酸門控通道β3(cyclic nucleotide gated channel beta 3，CNGB3)、鳥嘌呤結(jié)合蛋白α轉(zhuǎn)導(dǎo)活性肽2(G protein subunit alpha transducin 2，GNAT2)、磷酸二酯酶6C(phosphodiesterase 6C，PDE6C)、磷酸二酯酶6H(phosphodiesterase 6H，PDE6H)和抗體活化轉(zhuǎn)錄因子6(activating transcription factor 6，ATF6)[1-6]。CNGA3、CNGB3和GNAT2基因編碼的蛋白在視錐細(xì)胞的光傳導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用，PDE6C和PDE6H基因編碼視錐細(xì)胞環(huán)鳥核苷酸(cyclic guanosine monophosphate，cGMP)PDE亞單位，使cGMP轉(zhuǎn)化為5’-GMP，在視錐細(xì)胞的視覺傳導(dǎo)方面發(fā)揮重要作用。ATF6與蛋白正確折疊有著密切關(guān)系，其活性減弱會(huì)造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化應(yīng)激增加，甚至引起細(xì)胞凋亡，與視網(wǎng)膜退行性疾病，包括CNGA3和CNGB3基因缺陷引起的全色盲有著密切關(guān)系。這些基因在光傳導(dǎo)通路中相互關(guān)聯(lián)，其中任何環(huán)節(jié)的異常都可能導(dǎo)致全色盲的發(fā)生[1-4]。目前已有的全色盲家系研究多為高加索人種，尚缺少中國人群的研究。本研究對(duì)1個(gè)中國全色盲家系進(jìn)行遺傳學(xué)研究，以進(jìn)行鑒別診斷并確定該家系的致病基因突變。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用家系調(diào)查研究方法，對(duì)2018年11月在河南省立眼科醫(yī)院收集的1個(gè)來自河南省洛陽市的漢族全色盲家系進(jìn)行研究。本研究經(jīng)河南省立眼科醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)[批文號(hào)：HNEECKY-2019(15號(hào))]，研究過程嚴(yán)格遵循《赫爾辛基宣言》。成年受試者及未成年受試者監(jiān)護(hù)人均了解本研究方法及目的并自愿簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1眼科臨床檢查 詳細(xì)詢問并記錄該家系家族史，進(jìn)行詳細(xì)的眼科?？茩z查。家系所有成員均接受最佳矯正視力(best-corrected visual acuity，BCVA)檢查；采用裂隙燈顯微鏡和前置鏡檢查患者眼前節(jié)和眼底情況；采用阿托品眼用凝膠點(diǎn)眼擴(kuò)瞳后經(jīng)電腦自動(dòng)驗(yàn)光儀驗(yàn)光、檢影驗(yàn)光和主覺驗(yàn)光確定受檢眼屈光度；采用CR-2 AF型自動(dòng)免擴(kuò)瞳眼底照相機(jī)(日本佳能公司)進(jìn)行眼底照相；采用頻域光相干斷層掃描成像(spectral-domain optical coherence tomography，SD-OCT)儀(RTVue XR 100-2型，美國Optovue公司)檢查黃斑區(qū)結(jié)構(gòu)；采用孟塞爾色覺測(cè)試工具(Munsell FM 100，美國愛色麗公司)進(jìn)行色覺檢查；采用全視野閃光視網(wǎng)膜電圖(flash electroretinography，F(xiàn)ERG)(RETI-Port 21型眼電生理儀，德國羅蘭公司)評(píng)估受檢眼視網(wǎng)膜功能。由于裂隙燈顯微鏡和前置鏡檢查發(fā)現(xiàn)Ⅲ1雙眼黃斑顳側(cè)、赤道及赤道前視網(wǎng)膜可見斑片狀萎縮灶，且赤道部及赤道前視網(wǎng)膜可見明顯色素沉著，故補(bǔ)充全景眼底照相儀(Daytona P200T型激光掃描檢眼鏡，意大利Optos Plc公司)照相。Ⅲ2因無法配合進(jìn)行FM100孟塞爾色覺檢查及FERG檢查，改為色盲檢查圖檢查和RETeval便捷式視覺電生理系統(tǒng)(美國LKC公司)檢查。

1.2.2DNA提取 采集所有家系成員外周靜脈血各4 ml，保存于乙二胺四乙酸處理過的抗凝管中。采用血液基因組DNA提取試劑盒(美國Omega公司)，按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程提取全基因組DNA，用紫外分光光度計(jì)(美國Nanodrop公司)進(jìn)行定量及質(zhì)量控制。

1.2.3遺傳眼病捕獲芯片靶向捕獲富集高通量測(cè)序 根據(jù)中國眼遺傳病診療小組、中國眼科遺傳聯(lián)盟制定的《眼遺傳病基因診斷方法專家共識(shí)》[7]，首先采用包含441個(gè)致病基因的遺傳眼病捕獲芯片(北京中因科技有限公司)進(jìn)行靶向捕獲富集高通量測(cè)序。從先證者(Ⅲ1)及其胞弟(Ⅲ2)、父母外周血中提取基因組DNA，構(gòu)建全基因組文庫，通過Illumina HiSeq高通量測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行DNA測(cè)序，二代panel的平均測(cè)序深度為500 X，數(shù)據(jù)量為1 G，對(duì)明確的致病性變異采用Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。測(cè)序儀下機(jī)原始數(shù)據(jù)使用bcl2fastq將.bcl文件轉(zhuǎn)換成.fastq文件，并使用BWA、Samtools和Picard軟件將reads比對(duì)到人類參考基因組GRCh37/hg19，生成的.bam文件采用GATK系列軟件進(jìn)行局部重新比對(duì)和重復(fù)序列去除并進(jìn)行變異檢出。采用Annovar對(duì).vcf變異文件進(jìn)行變異注釋。致病變異位點(diǎn)篩選原則：(1)篩選ExAC、1000 Genomes、gnomAD等數(shù)據(jù)庫中未見正常人攜帶或攜帶頻率小于5%的變異。(2)使用SIFT、Polyphen2、MutationTaster等多種蛋白功能預(yù)測(cè)軟件進(jìn)行基因變異位點(diǎn)分析；采用dbscSNV_ADA_SCORE和dbscSNV_RF_SCORE預(yù)測(cè)剪切位點(diǎn)變異。(3)參考OMIM、HGMD、ClinVar等多種數(shù)據(jù)庫對(duì)變異位點(diǎn)進(jìn)行致病性評(píng)估，對(duì)明確的致病性變異采用Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。

1.2.4人全基因組測(cè)序 由于應(yīng)用包含441個(gè)致病基因的遺傳眼病捕獲芯片進(jìn)行靶向捕獲富集高通量測(cè)序未獲得有意義的致病基因及突變位點(diǎn)，故對(duì)Ⅲ1及其父母、Ⅲ2共4人的DNA進(jìn)行全基因組測(cè)序(whole-genome sequencing，WGS)。從受檢者外周血中提取基因組DNA，構(gòu)建全基因組文庫，通過Illumina HiSeq高通量測(cè)序平臺(tái)測(cè)序，平均測(cè)序深度為30 X，數(shù)據(jù)量為90 G。對(duì)明確的致病性變異采用Sanger測(cè)序進(jìn)行驗(yàn)證。測(cè)序儀下機(jī)原始數(shù)據(jù)使用bcl2fastq將.bcl文件轉(zhuǎn)換成.fastq文件，并使用BWA、Samtools和Picard軟件將reads比對(duì)到人類參考基因組GRCh37/hg19，生成的.bam文件采用GATK系列軟件進(jìn)行局部重新比對(duì)，重復(fù)序列去除并進(jìn)行變異檢出。使用Annovar對(duì).vcf變異文件進(jìn)行變異注釋。致病變異位點(diǎn)篩選原則：(1)篩選ExAC、1000 Genomes、gnomAD等數(shù)據(jù)庫中未見正常人攜帶或攜帶頻率小于5%的變異。(2)使用SIFT、Polyphen2、MutationTaster等多種蛋白功能預(yù)測(cè)軟件進(jìn)行基因變異位點(diǎn)分析。(3)參考OMIM、HGMD、ClinVar等多種數(shù)據(jù)庫對(duì)變異位點(diǎn)進(jìn)行致病性評(píng)估。

1.2.5生物信息學(xué)分析 對(duì)除Ⅲ1以外的其他家系成員進(jìn)行Sanger測(cè)序，驗(yàn)證WGS確定可疑致病基因及突變位點(diǎn)，并對(duì)發(fā)現(xiàn)的可疑基因變異在HGMD中查看是否為已報(bào)道致病突變，在1000 Genome(http://browser.1000genomes.org/index.html)、EVS(http://evs.gs.washington.edu/EVS/)和ExAC(http://exac.broadinstitute.org/)數(shù)據(jù)庫中查看變異在人群中的基因頻率；采用Polyphen-2和SIFT軟件預(yù)測(cè)c.1285dupT對(duì)蛋白功能的影響；采用dbscSNV和SPIDEX軟件預(yù)測(cè)分析c.129+1G>A對(duì)蛋白質(zhì)翻譯的影響；結(jié)合家系圖與先證者進(jìn)行共分離分析。

2 結(jié)果

2.1 全色盲家系成員臨床特征

該家系共3代10位成員，其中全色盲患者2例，分別為Ⅲ1及Ⅲ2，其他家系成員表型均正常，符合常染色體隱性遺傳(圖1)。Ⅲ1，女，14歲，視力右眼-4.25/-2.75×180→0.3，左眼-3.50/-3.50×175→0.3；Ⅲ2，男，5歲，視力右眼+3.75/-1.75×30→0.2+，左眼+1.25/-1.75×160→0.3-。2例患兒均自幼視力低下、畏光，隨著年齡增長癥狀無明顯變化?；颊呔鶠橹行陌甲⒁暎匆娧矍蛘痤?，眼球運(yùn)動(dòng)正常，雙眼眼前節(jié)正常，玻璃體透明。Ⅲ1雙眼視盤色稍淡，視網(wǎng)膜呈豹紋狀，動(dòng)脈稍細(xì)，黃斑顳側(cè)、赤道及赤道前視網(wǎng)膜可見斑片狀萎縮灶，赤道及赤道前視網(wǎng)膜可見明顯色素沉著，黃斑中心凹反光可見；SD-OCT檢查顯示雙眼黃斑區(qū)外界膜及橢圓體帶反射信號(hào)欠規(guī)則；FERG檢查示雙眼暗視0.01刺激ERG b波、暗視3.0和暗視10.0刺激下ERG a、b波振幅均輕度下降，明視3.0刺激下ERG a、b波振幅嚴(yán)重下降，30 Hz ERG各波記錄不到；FM100孟塞爾色覺檢查示雙眼為全色盲。Ⅲ2雙眼視盤色澤尚可，視網(wǎng)膜動(dòng)、靜脈及后極部視網(wǎng)膜未見明顯異常，赤道及赤道前視網(wǎng)膜可見明顯色素沉著，黃斑中心凹反光可見；SD-OCT、FERG檢查結(jié)果與Ⅲ1表現(xiàn)一致，色盲檢查圖檢查提示為全色盲(圖2～5)。

圖1 先證者家系圖 CNGB3基因突變位點(diǎn)c.129+1G>A和CNGB3 c.1285dupT在該家系中患兒、攜帶者和正常表型成員之間共分離 □：正常男性；○：正常女性；·：男性攜帶者；⊙：女性攜帶者；■：男性患者；●：女性患者；：先證者Figure 1 Pedigree of the family with achromatopsia The compound heterozygous mutations，c.129+1G>A and c.1285dupT,in CNGB3 were segregated among patients,carriers and unaffected family members □:normal male；○:normal female；·:male carrier；⊙:female carrier；■:male patient；●:female patient;:proband

圖2 Ⅲ1和Ⅲ2雙眼免擴(kuò)瞳眼底照相及全景眼底照相 Ⅲ1雙眼視盤色稍淡，視網(wǎng)膜動(dòng)脈稍細(xì)，后極部視網(wǎng)膜呈豹紋狀；可見后極部、赤道及赤道前斑片狀萎縮灶及色素沉著。Ⅲ2雙眼視盤色澤尚可，視網(wǎng)膜動(dòng)靜脈未見明顯改變；赤道及赤道前視網(wǎng)膜可見明顯色素沉著 A：Ⅲ1右眼眼底彩色照相和全景眼底照相 B：Ⅲ1左眼眼底彩色照相和全景眼底照相 C：Ⅲ2右眼眼底彩色照相和全景眼底照相 D：Ⅲ2左眼眼底彩色照相和全景眼底照相Figure 2 Fundus color photography and ultra widefield fundus color photography of Ⅲ1 and Ⅲ2 Fundus color photography of both eyes of Ⅲ1 showed that optic nerve heads were pale,and retinal arteries were thinned,and the retina of the posterior pole turned into leopard-like.Ultra widefield fundus color photography of Ⅲ1 displayed patchy atrophy in the temporal lateral retina of macula and pigmentary mottling at the posterior pole and the equator and in the preequatorial retina.Fundus color photography of both eyes of Ⅲ2 showed normal fundus in both eyes,and pigmentary mottling could be seen at the equator and in the preequatorial retina A:Images of the right eye of Ⅲ1 B:Images of the left eye of Ⅲ1 C:Images of the right eye of Ⅲ2 D:Images of the left eye of Ⅲ2

圖3 Ⅲ1和Ⅲ2雙眼黃斑區(qū)SD-OCT檢查 Ⅲ1和Ⅲ2雙眼黃斑區(qū)外界膜及橢圓體帶反射信號(hào)欠規(guī)則 A：Ⅲ1右眼 B：Ⅲ1左眼 C：Ⅲ2右眼 D：Ⅲ2左眼Figure 3 The SD-OCT findings in macula of Ⅲ1 and Ⅲ2 Reflection bands of external membrane and ellipsoid line were irregular in the two patients A:The right eye of Ⅲ1 B:The left eye of Ⅲ1 C:The right eye of Ⅲ2 D:The left eye of Ⅲ2

圖4 Ⅲ1雙眼FM100孟塞爾色覺檢查 右眼檢查總錯(cuò)誤得分為776，左眼為880，雙眼均不能分辨紅、綠和藍(lán)色 A：右眼 B：左眼Figure 4 Farnsworth Munsell 100 hue test results of both eyes of Ⅲ1 The total error scores of her right and left eyes were 776 and 880,respectively,which meant that the eyes could not discriminate red,green and blue A:Right eye B:Left eye

圖5 Ⅲ1和Ⅲ2雙眼FERG表現(xiàn) A：Ⅲ1雙眼FERG波形 A1為右眼暗視0.01、3.0和10.0 ERG波形；A2為左眼暗視0.01、3.0和10.0 ERG波形；A3為右眼暗視3.0振蕩電位；A4為左眼暗視3.0振蕩電位；A5為右眼明視3.0 ERG波形；A6為左眼明視3.0 ERG波形；A7為右眼明視3.0閃爍光ERG；A8為左眼明視3.0閃爍光ERG B：患者Ⅲ2雙眼FERG B1為右眼暗視0.01 ERG；B2為左眼暗視0.01 ERG；B3為右眼暗視3.0 ERG；B4為左眼暗視3.0 ERG；B5為右眼暗視10.0 ERG；B6為左眼暗視10.0 ERG；B7為右眼暗視3.0閃爍光ERG；B8為左眼暗視3.0閃爍光ERG；B9為右眼明視3.0 ERG；B10為左眼明視3.0 ERG；B11為右眼明視3.0閃爍光ERG；B12為左眼明視3.0閃爍光ERGFigure 5 The FERG findings of Ⅲ1 and Ⅲ2 A:FERG findings of Ⅲ1 A1 was a-and b-waves of scotopic 0.01,3.0 and 10.0 ERG of the right eye;A2 was a-and b-waves of scotopic 0.01,3.0 and 10.0 ERG of the left eye;A3 was wavelets of scotopic 3.0 oscillatory potentials of the right eye;A4 was wavelets of scotopic 3.0 oscillatory potentials of the left eye;A5 was a-and b-waves of photopic 3.0 ERG of the right eye;A6 was a-and b-waves of photopic 3.0 ERG of the left eye;A7 was wavelets of photopic 30Hz ERG of the right eye;and A8 was wavelets of photopic 30Hz ERG of the left eye B：FERG findings of Ⅲ2 B1 was a-and b-waves of scotopic 0.01 ERG of the right eye;B2 was a-and b-waves of scotopic 0.01 ERG of the left eye;B3 was a-and b-waves of scotopic 3.0 ERG of the right eye;B4 was a-and b-waves of scotopic 3.0 ERG of the left eye;B5 was a-and b-waves of scotopic 10.0 ERG of the right eye;B6 was the a-and b-waves of scotopic 10.0 ERG of the left eye;B7 was wavelets of scotopic 30 HZ ERG of the right eye;B8 was wavelets of scotopic 30 HZ ERG of the right eye;B9 was a- and b-waves of photopic 3.0 ERG of the right eye;B10 was a-and b-waves of photopic 3.0 ERG of the left eye;B11 was wavelets photopic 30Hz ERG of the right eye;and B12 was wavelets photopic 30Hz ERG of the left eye

2.2 全色盲家系CNGB3基因檢查

WGS測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ⅲ1和Ⅲ2在CNGB3基因上存在c.129+1G>A和c.1285dupT的復(fù)合雜合突變。Sanger測(cè)序驗(yàn)證證實(shí)Ⅲ1和Ⅲ2存在CNGB3基因c.129+1G>A和c.1285dupT復(fù)合雜合突變(圖6)。

圖6 CNGB3基因突變位點(diǎn) CNGB3基因在全色盲家系Ⅲ1及Ⅲ2存在c.129+1G>A和c.1285dupT復(fù)合雜合突變，家系中表型正常成員Ⅰ4、Ⅱ3和Ⅱ4僅存在雜合突變c.129+1G>A，Ⅰ1和Ⅱ2僅存在雜合突變c.1285dupTFigure 6 Mutations of CNGB3 gene In this pedigree,both Ⅲ1 and Ⅲ2 carried both CNGB3 c.129+1G>A and CNGB3 c.1285dupT,whileⅠ4,Ⅱ3 and Ⅱ4 carried CNGB3 c.129+1G>A，andⅠ1 and Ⅱ2 carried CNGB3 c.1285dupT

2.3 基因突變致病性和共分離分析

經(jīng)過生物信息學(xué)軟件分析CNGB3基因c.129+1G>A和c.1285dupT均為致病突變。CNGB3的突變c.129+1G>A在1號(hào)外顯子后的內(nèi)含子的第1個(gè)堿基，其在千人漢族人群及千人東亞人群中的突變頻率為0。CNGB3突變c.1285dupT在11號(hào)外顯子上，其在千人漢族人群及千人東亞人群中的突變頻率為0。

DNA樣本測(cè)序表明，CNGB3基因的雜合突變c.129+1G>A遺傳自祖母Ⅰ4，雜合突變c.1285dupT遺傳自外祖父Ⅰ2。家系中表型正常者Ⅰ4、Ⅱ3和Ⅱ4僅攜帶雜合突變c.129+1G>A，Ⅰ1和Ⅱ2僅攜帶雜合突變c.1285dupT。家系成員Ⅰ2、Ⅰ3和Ⅱ1中2個(gè)突變都不存在。該家系符合常染色體隱性遺傳規(guī)律和家系共分離(圖1)。

3 討論

目前已發(fā)現(xiàn)全色盲的致病基因有6個(gè)，其中CNGB3基因?yàn)樽畛Ｒ姷闹虏』騕8]。迄止目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，全色盲患者CNGB3基因突變的致病方式至少包括114種復(fù)合雜合突變、32種純合突變、1種雜合突變及其他方式[5,8-11]。本家系中Ⅲ1和Ⅲ2均存在CNGB3基因c.129+1G>A和c.1285dupT復(fù)合雜合突變，根據(jù)《ACMG遺傳變異分類標(biāo)準(zhǔn)中文版專家共識(shí)指南》，該復(fù)合雜合突變?yōu)樵撊ぜ蚁档闹虏⊥蛔?，且本研究發(fā)現(xiàn)的CNGB3基因c.129+1G>A和c.1285dupT復(fù)合雜合突變不同于已報(bào)道的114種復(fù)合雜合突變，為新發(fā)致病突變。

CNGB3基因定位于8q21-22，由18個(gè)外顯子組成，編碼809個(gè)氨基酸[1]。視錐細(xì)胞CNG陽離子通道位于光級(jí)聯(lián)傳導(dǎo)通路的末端，直接被cGMP激活，控制光感受器細(xì)胞外節(jié)質(zhì)膜的離子流，在光激發(fā)紅、綠、藍(lán)敏感的視錐細(xì)胞產(chǎn)生的生物電反應(yīng)方面發(fā)揮重要作用[1]，該通道的β亞單位即為CNGB3基因編碼的蛋白之一，CNGB3基因的多種突變均可導(dǎo)致視錐細(xì)胞的光傳導(dǎo)通路異常，導(dǎo)致全色盲的發(fā)生[1]。本研究發(fā)現(xiàn)的CNGB3基因剪切位點(diǎn)雜合突變c.129+1G>A使第1個(gè)內(nèi)含子無法正常剪切，從而導(dǎo)致蛋白翻譯提前終止，使視錐細(xì)胞CNG陽離子通道的β亞單位不能正常合成，最終對(duì)視錐細(xì)胞的光傳導(dǎo)通路產(chǎn)生影響，這種影響會(huì)像其他突變一樣導(dǎo)致全色盲的發(fā)生。雖然CNGB3基因c.129+1G>A純合突變會(huì)導(dǎo)致視錐、視桿細(xì)胞營養(yǎng)不良[12]，但同源染色體中僅存在1個(gè)該突變，是否會(huì)導(dǎo)致全色盲以及通過何種機(jī)制導(dǎo)致全色盲還有待進(jìn)一步研究。本研究發(fā)現(xiàn)的另1個(gè)突變c.1285dupT在編碼區(qū)的第1 285位處多了1個(gè)核苷酸T，造成移碼突變，蛋白翻譯提前終止，最終產(chǎn)生1個(gè)只有460個(gè)氨基酸的錯(cuò)誤蛋白產(chǎn)物。雖然在Mayer等[11]的研究中該突變?yōu)槠渲?個(gè)家系的致病突變，并且無論是CNGB3基因c.1285dupT純合突變還是c.1148delC和c.1285dupT復(fù)合雜合突變均可致病，但僅1條同源染色體攜帶致病基因而另1條同源染色體為野生型是否會(huì)導(dǎo)致全色盲，以及致病基因?qū)е氯さ臋C(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

由于本研究家系中的致病突變攜帶者無臨床表現(xiàn)，因此我們推斷CNGB3基因c.129+1G>A或c.1285dupT分別與野生型雜合并不具備致病性，因?yàn)閿y帶者還有1個(gè)野生型等位基因可以用來合成正常蛋白。當(dāng)CNGB3基因同時(shí)存在c.129+1G>A和c.1285dupT突變，2個(gè)等位基因都無法產(chǎn)生功能正常的蛋白時(shí)即會(huì)致病。

雖然Ⅲ1和Ⅲ2全色盲的診斷明確，但要對(duì)其進(jìn)行分類非常困難。根據(jù)既往研究，全色盲分為完全型和不完全型[1-4]。部分完全型全色盲患者會(huì)在視網(wǎng)膜中周部出現(xiàn)視網(wǎng)膜色素上皮異常，可表現(xiàn)為色素增生或萎縮。全色盲患者FERG顯示視錐細(xì)胞反應(yīng)記錄不到而視桿細(xì)胞反應(yīng)基本正常[1-4]。本家系的患者表現(xiàn)為視錐系統(tǒng)功能嚴(yán)重下降，而視桿系統(tǒng)功能輕度下降，因此本研究認(rèn)為雖然2例患兒ERG的表現(xiàn)與文獻(xiàn)報(bào)道的ERG表現(xiàn)并不完全相符[1-4]，但仍符合全色盲的ERG表現(xiàn)。Ⅲ1和Ⅲ2的雙眼BCVA分別為0.3和>0.2，除眼底赤道部及赤道前視網(wǎng)膜有色素沉著，Ⅲ1還存在黃斑顳側(cè)、赤道及赤道前視網(wǎng)膜斑片狀萎縮灶，導(dǎo)致很難對(duì)其進(jìn)行分類，既往研究發(fā)現(xiàn)完全型全色盲BCVA一般低于0.1[1-4]，中周部視網(wǎng)膜色素上皮異常往往出現(xiàn)在完全型全色盲者，而本家系患者視力和視網(wǎng)膜色素沉著部位均不能歸為完全型全色盲，其機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

本家系2例患兒因視力低下和畏光就診，眼部檢查均提示其視錐系統(tǒng)功能異常，雖然色盲圖檢查Ⅲ1為色盲，但就診時(shí)未能確定究竟是視錐細(xì)胞營養(yǎng)不良還是全色盲。為了進(jìn)一步進(jìn)行鑒別診斷，本研究首先采用包含441個(gè)致病基因的遺傳眼病捕獲芯片進(jìn)行靶向捕獲富集高通量測(cè)序以進(jìn)行基因診斷，雖然選取的panel包含所有已知的眼部遺傳疾病的致病基因，但未能獲得本家系的有意義的致病基因。為找到致病突變，本研究進(jìn)一步通過WGS確定了致病突變。

本研究發(fā)現(xiàn)了全色盲患者1個(gè)新的突變位點(diǎn)及1種新的致病方式，補(bǔ)充了全色盲的基因突變譜。但本研究仍存在以下局限性：(1)僅調(diào)查了1個(gè)家系，研究的外推性欠佳；(2)本研究既采用了免擴(kuò)瞳眼底照相，也采用了全景眼底照相，但在實(shí)際工作中免擴(kuò)瞳眼底照相加拼圖可以替代全景眼底照相；(3)本家系在進(jìn)行基因檢測(cè)時(shí)未先采用僅針對(duì)眼底遺傳性疾病的靶向基因測(cè)序，而直接采用了包含441個(gè)致病基因的遺傳眼病捕獲芯片進(jìn)行靶向捕獲富集高通量測(cè)序，且在測(cè)序未得到理想結(jié)果時(shí)又未先進(jìn)行全基因外顯子組測(cè)序，而直接進(jìn)行了WGS，這未能很好地遵循眼遺傳病基因檢測(cè)流程，如果本研究最初選取的是更精準(zhǔn)的眼底遺傳疾病的panel，或先對(duì)有疑問的位點(diǎn)單獨(dú)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行測(cè)序，也許實(shí)驗(yàn)過程會(huì)更優(yōu)化、更經(jīng)濟(jì)，也更符合遺傳疾病研究的最優(yōu)診斷路徑，不僅能增強(qiáng)檢測(cè)的實(shí)效性，還會(huì)降低檢測(cè)費(fèi)用。

雖然本研究存在一些不足，但是本研究發(fā)現(xiàn)了全色盲CNGB3基因1個(gè)新的致病突變位點(diǎn)及1個(gè)新的復(fù)合雜合突變方式，擴(kuò)大了CNGB3基因的突變譜，對(duì)更深入地了解全色盲的發(fā)病機(jī)制提供了有價(jià)值的信息，同時(shí)也為將來全色盲的靶向基因治療及患者家族成員的優(yōu)生優(yōu)育選擇提供了一定的依據(jù)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突