激光照射頻次和單次照射時長對眼部組織的損傷作用評估

張宇飛 危冬昱 王偉 劉大銘 任澤 李向前 陳濤 張作明

1空軍軍醫(yī)大學航空航天臨床醫(yī)學中心 航空航天醫(yī)學教育部重點實驗室，西安 710032；2海軍軍醫(yī)大學海軍特色醫(yī)學中心，上海 200433；3空軍軍醫(yī)大學基礎醫(yī)學院，西安 710032

激光已廣泛用于各個領域，除工業(yè)和醫(yī)療用途外，軍事等許多特種領域也將激光作為一種重要的工具[1]。由于激光具有相當高的能量，使用不當會對人的視覺系統(tǒng)造成不同程度的損傷，如角膜灼傷、晶狀體混濁、視網(wǎng)膜光損傷等，不同的激光波長和能量以及照射方式對視網(wǎng)膜的損傷程度不同[2]。但是，目前關于激光應用的各種安全防護標準還不夠完善。在軍事領域，激光可作為引導系統(tǒng)對飛行員的飛行作業(yè)進行遠距離引導，此時在照射區(qū)域內(nèi)是彌散的多光譜激光，與常用的束狀光不同。在飛行中，飛行員需要尋找到該光區(qū)，并根據(jù)光區(qū)內(nèi)的激光光束確立最佳著陸下滑角度和下滑速率，即飛行員在每次降落過程都將在激光暴露下持續(xù)飛行一段時間。這種情況下的激光暴露是否會對視覺系統(tǒng)造成損傷或?qū)е鹿ぷ髂芰Φ慕档投＜帮w行安全是航空醫(yī)學須待闡明的問題，目前缺少相關的實驗證據(jù)和相關安全標準。本研究評估不同激光照射頻次和單次照射時長對視覺功能的影響，為相關標準的制定提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1實驗動物及分組 選取SPF級雄性豚鼠36只，體質(zhì)量250～300 g(購自空軍軍醫(yī)大學實驗動物中心)[實驗動物使用許可證：SYXK(軍)2017-0045。實驗動物生產(chǎn)許可證：SCXK(軍)2017-0021]。所有豚鼠進行常規(guī)喂養(yǎng)，提供充足飲食，適當補充維生素C，12 h/12 h明暗循環(huán)光照。實驗動物的飼養(yǎng)和使用符合視覺與眼科研究協(xié)會制定的科研動物使用規(guī)范，研究方案經(jīng)第四軍醫(yī)大學實驗動物中心福利與倫理委員會審核批準(批文號：20181203)。

采用隨機數(shù)字表法、依據(jù)激光照射頻次和單次照射時長不同將豚鼠隨機分為高頻短時(high-frequency-short-time，HFST)組、高頻長時(high-frequency-long-time，HFLT)組、中頻短時(medium-frequency-short-time，MFST)組、中頻長時(medium-frequency-long-time，MFLT)組、低頻短時(low-frequency-short-time，LFST)組和低頻長時(low-frequency-long-time，LFLT)組。高、中、低頻分別定義為激光照射15次、10次和5次，激光照射長時和短時分別定義為60 s/次和30 s/次。各組照射頻次以及時長根據(jù)飛行訓練大綱要求的訓練次數(shù)以及飛機著陸所需時間進行換算制定。

1.1.2主要試劑及儀器 復方托吡卡胺滴眼液、加替沙星眼用凝膠(沈陽興齊制藥有限公司)；鹽酸奧布卡因滴眼液、左氧氟沙星滴眼液[日本參天制藥(中國)有限公司]；維生素C片(西安利君制藥有限公司)。Schirmer淚液試紙條(天津晶明新技術開發(fā)有限公司)；激光引導光源(中國科學院自制)；視覺電生理記錄儀(德國Roland 公司)；眼底圖像記錄系統(tǒng)(加拿大 Optoprobe公司)；裂隙燈顯微鏡(蘇州六六視覺科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1豚鼠眼激光照射 激光引導器在距離豚鼠眼部約0.5 m處(利用照度計對激光照度測量后進行距離調(diào)整，直至豚鼠眼部位置照度為500 lx后固定激光引導器以及豚鼠的位置)對豚鼠眼進行照射。豚鼠右眼用復方托吡卡胺滴眼液點眼擴瞳，在清醒狀態(tài)下按照分組方案進行500 lx激光照射，每次照射間隔10 min，左眼不接受任何干預作為對照眼。

1.2.2基礎淚液分泌試驗檢測豚鼠淚液分泌量 于激光照射后12 h采用基礎淚液分泌試驗(SchirmerⅠtest，SⅠt)檢測豚鼠淚液分泌量。將Schirmer淚液試紙寬度裁剪為寬約1.5 mm后，將前端約2 mm處折疊成直角，夾在豚鼠下眼瞼內(nèi)側1/3處結膜囊內(nèi)，另一端垂掛在下眼瞼外部，輕閉雙眼5 min，取出試紙條，放置2 min后觀察并記錄試紙條浸濕長度。

1.2.3裂隙燈顯微鏡下觀察豚鼠晶狀體混濁情況 于激光照射后12 h采用裂隙燈顯微鏡斜照法觀察豚鼠雙眼晶狀體混濁程度。晶狀體混濁評分標準：晶狀體形態(tài)正常且透明為0分；晶狀體輕度混濁為1分；晶狀體明顯混濁為2分；晶狀體為白色或出血為3分。

1.2.4眼底照相法評估眼底變化 于激光照射后12 h采用戊巴比妥鈉將豚鼠麻醉后固定于操作臺，眼表涂抹加替沙星眼用凝膠保護角膜。將眼底照相鏡頭對準動物瞳孔，調(diào)節(jié)成像焦距，移動操作臺至視盤位于鏡頭視野中央，待成像清晰時拍照。觀察視盤結構是否正常、眼底是否有滲出及出血。

1.2.5視網(wǎng)膜電圖檢查評估豚鼠視網(wǎng)膜功能 于激光照射后12 h采用羅蘭電生理操作系統(tǒng)按標準化操作流程[4]記錄視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram，ERG)。檢測前豚鼠在暗環(huán)境下暗適應12 h，采用質(zhì)量分數(shù)1%戊巴比妥鈉和50 μl質(zhì)量分數(shù)50%陸眠寧腹腔內(nèi)注射進行麻醉，劑量為3 ml/kg，采用復方托吡卡胺滴眼液點眼擴瞳，采用鹽酸奧布卡因滴眼液點眼行角膜表面麻醉，用棉簽輕拭多余水分。將豚鼠置于操作臺，作用電極為Ag-AgCl角膜環(huán)狀電極，置于角膜表面，參考電極為不銹鋼針狀電極，刺于頰部皮下，地電極為不銹鋼針狀電極，刺入尾部皮下[4]。紅光下記錄暗適應3.0條件下暗視ERG反應。記錄后用左氧氟沙星滴眼液點眼，分析暗適應3.0條件下ERG a波及b波振幅值。

1.2.6視網(wǎng)膜組織病理學檢查 采用頸椎脫臼法處死豚鼠，以墨汁在眼球12：00方向進行標記，摘取眼球并保留一定長度的視神經(jīng)，置于眼球固定液(Division液)中固定48 h，脫水包埋。包埋時將眼球標本的角鞏膜緣貼于金屬盒底面，并將染料標記點置于頂端。沿眼球矢狀位進行連續(xù)切片，切片厚度為4 μm，選取通過視神經(jīng)的切片進行撈片，70 ℃烤片4 h，蘇木精-伊紅染色。光學顯微鏡400倍視野下選取距離視神經(jīng)約500 μm處垂直外核層，用顯微測量軟件測量視網(wǎng)膜外核層厚度，重復測量3次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計學軟件(美國SPSS公司)進行統(tǒng)計分析。采用Shapiro-Wilk檢驗對計量資料的數(shù)據(jù)進行正態(tài)分布檢驗，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)資料采用mean±SD表示，采用Levene檢驗對各組數(shù)據(jù)進行方差齊性檢驗；偏態(tài)分布的數(shù)據(jù)資料采用M(Q1，Q3)表示。實驗眼與對照眼間ERG a、b波振幅和視網(wǎng)膜外核層厚度差異比較采用配對t檢驗，2個組間淚液分泌量差異比較采用Wilcoxon符號秩檢驗；6個不同激光照射組間ERG a、b波振幅及視網(wǎng)膜外核層厚度總體差異比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Tukey檢驗；6個不同激光照射組間淚液分泌量總體差異比較采用Kruskal-WallisH檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 實驗眼與對照眼豚鼠淚液分泌量比較

激光照射后12 h，HFST組、HFLT組、MFST組、MFLT組、LFST組和LFLT組豚鼠實驗眼與對照眼間淚液分泌量比較差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)(表1)。

表1 各組對照眼與實驗眼淚液分泌量比較[M(Q1,Q3),mm/5min]Table 1 Comparison of tear secretion between control eyes and experimental eyes in various groups[M(Q1,Q3),mm/5min]眼別各組淚液分泌量HFST組(n=6)HFLT組(n=6)MFST組(n=6)MFLT組(n=6)LFST組(n=6)LFLT組(n=6)對照眼8.25(7.50,8.75)8.75(8.00,9.00)8.75(7.62,9.12)8.50(8.00,9.50)8.50(7.62,9.12)8.50(7.50,9.00)實驗眼8.00(7.37,9.00)8.75(8.25,9.00)8.50(7.75,9.50)9.00(8.50,9.50)8.00(7.37,8.75)8.25(7.75,8.75)Z值0.7070.0000.5771.3000.6380.333P值0.4081.0000.5640.1940.5240.739 注:(Wilcoxon符號秩檢驗) HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(Wilcoxon sign rank test) HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

2.2 不同激光輻照組間實驗眼淚液分泌量比較

激光照射后12 h，各組間豚鼠實驗眼淚液分泌量總體比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=5.502，P=0.240)(表2)。

表2 各組豚鼠實驗眼淚液分泌量比較[M(Q1,Q3),mm/5min]Table 2 Comparison of tear secretion of experimental eyes among various groups[M(Q1,Q3),mm/5min]組別樣本量淚液分泌量HFST組68.00(7.37,9.00)HFLT組68.75(8.25,9.00)MFST組68.50(7.75,9.50)MFLT組69.00(8.50,9.50)LFST組68.00(7.37,8.75)LFLT組68.25(7.75,8.75)χ2值5.502P值0.240 注:(Kruskal-Wallis H 檢驗) HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(Kruskal-Wallis H test) HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

2.3 不同激光輻照組豚鼠晶狀體表現(xiàn)

激光輻照后12 h，各組豚鼠晶狀體均透明，晶狀體混濁度評分均為0分(圖1)。

圖1 激光照射后12 h各組豚鼠晶狀體表現(xiàn) 各組豚鼠激光照射眼和對照眼晶狀體均透明HFST：高頻短時；HFLT：高頻長時；MFST：中頻短時；MFLT：中頻長時；LFST：低頻短時；LFLT：低頻長時Figure 1 Performance of lens of guinea pigs among various groups at 12 hours after laser irradiation The lenses of both eyes of the guinea pigs were clear in various groupsHFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

2.4 不同激光輻照組豚鼠視網(wǎng)膜表現(xiàn)

激光照射后12 h，各組豚鼠激光照射眼和對照眼眼底可見視盤結構清晰，未見視網(wǎng)膜出血和滲出(圖2)。

圖2 激光照射后12 h各組豚鼠眼底照片 各組豚鼠雙眼視網(wǎng)膜和視盤形態(tài)正常HFST：高頻短時；HFLT：高頻長時；MFST：中頻短時；MFLT：中頻長時；LFST：低頻短時；LFLT：低頻長時Figure 2 Fundus images of guinea pig eyes among various groups at 12 hours after laser irradiation The retina and optic disc of the both eyes of guinea pigs were normal in various groupsHFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

2.5 各組內(nèi)實驗眼與對照眼間ERG a、b波振幅比較

不同激光輻照組豚鼠對照眼與實驗眼間ERG a波振幅值差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)。

HFST組和HFLT組中豚鼠實驗眼暗視3.0ERG反應b波振幅值低于對照眼，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)，其他各組豚鼠實驗眼與對照眼間暗視3.0ERG反應b波振幅值差異均無統(tǒng)計學意義(均P>0.05)(圖3，表3，4)。

圖3 激光照射后12 h各組豚鼠雙眼暗視3.0ERG反應典型波形HFST：高頻短時；HFLT：高頻長時；MFST：中頻短時；MFLT：中頻長時；LFST：低頻短時；LFLT：低頻長時Figure 3 Scotopic 3.0 ERG of both eyes of experimental animals at 12 hours after laser irradiationHFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

表3 各組實驗眼與對照眼間ERG a波振幅值比較(mean±SD,μV)Table 3 Comparison of ERG a-wave amplitude between control eyes and experimental eyes in each group(mean±SD,μV)眼別各組ERG a波振幅HFST組(n=6)HFLT組(n=6)MFST組(n=6)MFLT組(n=6)LFST組(n=6)LFLT組(n=6)對照眼51.18±21.4947.85±20.3962.43±22.6458.62±24.3262.33±14.2760.50±10.67實驗眼41.01±16.0938.68±12.3146.42±21.2833.70±8.6067.83±9.4761.66±5.64t值0.7301.6921.6482.1860.6950.214P值0.4980.1520.1600.0810.5390.839 注:(配對t檢驗) ERG:視網(wǎng)膜電圖;HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(Paired t test) ERG:electroretinogram;HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

表4 各組實驗眼與對照眼間ERG b波振幅值比較(mean±SD,μV)Table 4 Comparison of ERG b-wave amplitude between control eyes and experimental eyes in each group(mean±SD,μV)眼別各組ERG b波振幅HFST組(n=6)HFLT組(n=6)MFST組(n=6)MFLT組(n=6)LFST組(n=6)LFLT組(n=6)對照眼125.00±15.17121.32±31.76118.03±45.94140.65±32.77124.33±2.62125.33±2.21實驗眼96.45±21.5786.38±29.79112.28±29.43114.02±54.21117.83±3.71123.83±8.35t值3.6265.0190.3221.3661.2100.229P值0.0150.0040.7600.2300.2800.777 注:(配對t檢驗) ERG:視網(wǎng)膜電圖;HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(Paired t test) ERG:electroretinogram;HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

2.6 不同激光輻照組間豚鼠實驗眼ERG波形變化

激光照射后12 h，HFST組、HFLT組、MFST組、MFLT組、LFST組和LFLT組間豚鼠實驗眼ERG a波振幅值總體比較差異有統(tǒng)計學意義(F=6.269，P<0.01)，其中高頻照射組ERG a波幅值低于低頻照射組，差異均有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。各組豚鼠實驗眼ERG b波振幅值總體比較差異無統(tǒng)計學意義(F=1.358，P=0.268)(表5)。

表5 各組間實驗眼ERG a、b波振幅值比較(mean±SD,μV)Table 5 Comparison of ERG a-,b-wave amplitudes of experimental eyes among various groups(mean±SD,μV)組別樣本量a波振幅b波振幅HFST組641.01±16.09ab96.45±21.56HFLT組638.68±12.31ab86.38±29.78MFST組646.42±21.28112.28±29.42MFLT組633.70±8.60114.01±54.20LFST組667.83±9.47117.83±9.10LFLT組661.66±5.64123.83±8.35F值6.2691.358P值<0.010.268 注:與LFST組比較,aP<0.05;與LFLT組比較,bP<0.05(單因素方差分析,Tukey檢驗). ERG:視網(wǎng)膜電圖;HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:Compared with the LFST group,aP<0.05;Compared with the LFLT group,bP<0.05(One-way ANOVA,Tukey test). ERG:elec-troretinogram;HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequen-cy-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-fre-quency-long-time

2.7 不同激光輻照組豚鼠視網(wǎng)膜組織形態(tài)學變化

激光照射后12 h，各組豚鼠視網(wǎng)膜結構清晰，細胞形態(tài)正常，排列緊密。距離視神經(jīng)500 μm處視網(wǎng)膜外核層厚度測量結果比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)(圖4，表6，7)。

圖4 各組豚鼠視網(wǎng)膜形態(tài)學變化(HE ×400，標尺=30 μm) 各組豚鼠實驗眼和對照眼視網(wǎng)膜結構均正常HFST：高頻短時；HFLT：高頻長時；MFST：中頻短時；MFLT：中頻長時；LFST：低頻短時；LFLT：低頻長時Figure 4 Morphological findings of binocular retina in each group(HE ×400,bar=30 μm) The morphology of the retinas of both experimental eyes and control eyes in various groups was normalHFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

表6 各組豚鼠對照眼與實驗眼間視網(wǎng)膜外核層厚度比較(mean±SD,μm)Table 6 Comparison of retinal outer nuclear layer thickness between control eyes and experimental eyes in each group(mean±SD,μm)眼別各組視網(wǎng)膜外核層厚度HFST組(n=6)HFLT組(n=6)MFST組(n=6)MFLT組(n=6)LFST組(n=6)LFLT組(n=6)對照眼28.95±5.5827.08±1.1928.05±1.5827.12±2.2427.12±2.0128.54±2.23實驗眼26.62±2.5828.10±1.5728.86±1.8226.60±3.1928.16±1.2227.23±2.65t值1.4791.3410.6830.4982.2811.528P值0.1990.2380.5250.6400.0850.201 注:(配對t檢驗) HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(Paired t test) HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medi-um-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

表7 各組間豚鼠實驗眼視網(wǎng)膜外核層厚度比較(mean±SD,μm)Table 7 Comparison of retinal outer nuclear layer thickness of experimental eyes among various groups(mean±SD,μm)組別樣本量視網(wǎng)膜外核層厚度HFST組626.62±2.58HFLT組628.10±1.57MFST組628.86±1.82MFLT組626.60±3.19LFST組628.16±1.22LFLT組627.23±2.65F值0.952P值0.463 注:(單因素方差分析) HFST:高頻短時;HFLT:高頻長時;MFST:中頻短時;MFLT:中頻長時;LFST:低頻短時;LFLT:低頻長時 Note:(One-way ANOVA) HFST:high-frequency-short-time;HFLT:high-frequency-long-time;MFST:medium-frequency-short-time;MFLT:medium-frequency-long-time;LFST:low-frequency-short-time;LFLT:low-frequency-long-time

3 討論

本研究結果表明500 lx的激光照射增加到15次時，雖然視網(wǎng)膜形態(tài)并未發(fā)生明顯異常，但照射眼視網(wǎng)膜功能輕度下降，主要表現(xiàn)為暗視3.0ERG反應b波振幅值下降，高頻照射眼暗視3.0ERG反應a波振幅值較低頻照射眼降低。由于人眼中的色素分布以及各組織的含水量不同，使得激光照射對眼不同部位有不同的損害作用[6-8]。既往研究表明，高強度光照容易導致視網(wǎng)膜光損傷，損傷程度呈閾值效應且與能量存在劑量效應，尤其是可見光對視網(wǎng)膜的破壞性最大，可表現(xiàn)為視網(wǎng)膜外核層變薄和視覺電生理反應下降[9-11];但針對照射頻次的研究目前仍少見。本研究所用激光是可見光，當光強度超過視網(wǎng)膜負荷時，會誘導視網(wǎng)膜內(nèi)發(fā)生氧化應激反應以及離子分布和蛋白的改變，視網(wǎng)膜內(nèi)細胞結構發(fā)生破壞，導致視網(wǎng)膜光損傷[12-14]。研究發(fā)現(xiàn)，高強度光照能夠通過一系列信號通路引起視網(wǎng)膜細胞的凋亡并影響細胞的自噬作用，視網(wǎng)膜細胞的生理功能發(fā)生紊亂[15-17]。本研究所用激光照度遠低于常用視網(wǎng)膜光損傷動物模型的光照度，可能屬于閾下激光刺激所致的視網(wǎng)膜功能下降，而視網(wǎng)膜形態(tài)并未發(fā)生明顯改變。

本研究結果表明，這種閾下激光所致視網(wǎng)膜功能下降主要與激光照射頻次有關。研究表明，中等強度光預刺激對視網(wǎng)膜光感受器細胞光損傷具有保護作用[18-19]，而短期內(nèi)較高強度的閾下光照刺激無法激發(fā)視網(wǎng)膜光感受器細胞對較強光照的耐受，可能會導致視網(wǎng)膜光感受器細胞功能的生理性紊亂。單次照射時長無論是30 s還是60 s，感光細胞中的視色素都只發(fā)生一次廣泛的分解與合成，而2次激光刺激間隔10 min足以使視網(wǎng)膜視色素重新合成。短時間內(nèi)視色素頻繁而廣泛的分解和合成增加了視網(wǎng)膜內(nèi)氧化應激反應水平，最終導致視網(wǎng)膜功能下降。除此之外，這種閾下激光的視網(wǎng)膜損傷也可能與瞬時型神經(jīng)節(jié)細胞的作用有關，而與持續(xù)型神經(jīng)節(jié)細胞的關系不大。與此同時，有研究表明間歇光照比連續(xù)光照導致更大程度的光感受細胞損傷,視紫紅質(zhì)等物質(zhì)的下降亦較連續(xù)光照組為甚[2]。

綜上所述，在500 lx照度的激光照射條件下，單次照射時長<1 min、10次以下的照射頻率相對未照射眼來說對視覺功能和眼部組織是安全的，但是超過10次以上的照射頻率可能會損害視覺功能，而超過15次的激光照射頻率則會導致明顯的視功能降低。高頻率激光照射相較于低頻率照射所導致的視功能降低幅度更大，意味著500 lx照度的激光照射對視功能的影響存在頻率相關性。因此對于此類激光的照射防護標準應當在控制照射時間的同時，加強對照射次數(shù)的限制。

利益沖突所有作者均聲明不存在任何利益沖突

作者貢獻聲明本課題為第三作者單位的聯(lián)合項目，項目中視覺研究部分由所有作者共同參與完成。張作明、陳濤、王偉參與選題、研究設計、項目指導、文章科學內(nèi)容修改和最終定稿；張宇飛、危冬昱、任澤、李向前、劉大銘參與研究設計、研究實施、文章寫作和修改