ACTL6A在宮頸癌中的表達(dá)及意義

牛麗娟 劉俊霞 苗立坤

（1.漯河市郾城區(qū)人民醫(yī)院，河南 漯河 462300；2.漯河市中心醫(yī)院，河南 漯河 462000）

宮頸癌是全球第四大最常見的女性惡性腫瘤，鱗狀細(xì)胞癌和腺癌是最常見的組織學(xué)亞型，分別占子宮頸癌的70%和25%左右。盡管過去十年中在預(yù)防、篩查、診斷和治療宮頸癌方面取得了進(jìn)步，但該病發(fā)病率和致死率仍然很高。因此，早期針對(duì)宮頸癌特定的分子標(biāo)記物進(jìn)行測(cè)定尤其重要[1]。肌動(dòng)蛋白樣蛋白6A（Actin-like 6A，ACTL6A），也稱為BAF53a/Arp4/INO80K，是一種肌動(dòng)蛋白樣蛋白，是ATP依賴的SWI / SNF樣BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物的成員，該復(fù)合物編碼肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白家族[2]。研究顯示ACTL6A與各種細(xì)胞過程有關(guān)，包括染色質(zhì)重塑、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、囊泡運(yùn)輸和核遷移[3]。最近一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，ACTL6A與神經(jīng)祖細(xì)胞的分化和增殖有關(guān)[4]，而且在鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖中也起重要作用，參與表皮和鱗狀細(xì)胞癌的分化過程[5]。但是，ACTL6A在宮頸癌中的作用尚未見報(bào)道。

本研究采用免疫組化法檢測(cè)宮頸癌及相應(yīng)癌旁組織中ACTL6A的表達(dá)情況，分析其與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，以期為乳腺癌早期診斷及預(yù)后評(píng)估提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年1月至2015年1月在我院手術(shù)切除并保存的93例宮頸癌癌組織和癌旁組織（距離癌組織≧1 cm）石蠟標(biāo)本進(jìn)行研究。所有患者均經(jīng)病理確診，術(shù)前均未接受化療和放療，年齡25~83歲，中位年齡58歲。研究實(shí)施前均告知并簽署知情同意書，并獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色測(cè)定組織ACTL6A的表達(dá)

常規(guī)切片、脫蠟、水化、及抗原修復(fù)后，用Tris緩沖鹽水（TBS，pH7.6）洗滌，并以80%甲醛浸泡20 min阻斷過氧化物酶活性，再用TBS洗滌兩次，滴加ACTL6A兔抗人抗體（1: 50，Santa Cruz Biotechnology）4℃下孵育過夜（8 h）；TBS洗滌兩次，滴加稀釋度為1：200的二抗（抗山羊抗體，Santa Cruz Biotechnology）30 min，TBS洗滌兩次，滴加DAB，并在室溫下放置5 min后洗滌、蘇木精復(fù)染，然后脫水、透明、封片、鏡檢。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。ACTL6A主要表達(dá)于細(xì)胞核，染色為黃色顆粒即陽(yáng)性細(xì)胞。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

由兩位病理科醫(yī)師結(jié)合陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度做出判斷。陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞<1%為0分，1%-24%為1分，25%-49%為2分，50-74%為3分，75-100%為4分；染色強(qiáng)度記分：無(wú)染色細(xì)胞為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，兩者相乘≥3分為陽(yáng)性。總積分0-2分：-，3-4分：+，5-8分：++，9-12分：+++。-/+低表達(dá)，++/+++高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，采用X2檢驗(yàn)，應(yīng)用Kaplan-Meier生存曲線和log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織和癌旁組織中ACTL6A的表達(dá)差異

癌組織和癌旁組織ACTL6A蛋白表達(dá)水平呈現(xiàn)明顯差異（F=11.278，P<0.05），其中宮頸癌癌組織ACTL6A陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織（63.5% vs 27.9%，X2=9.126，P<0.05），見圖1。

圖1 免疫組化測(cè)定ACTL6A蛋白表達(dá)（×100）

表1 ACTL6A蛋白的表達(dá)率（例（%），n=93）

2.2 ACTL6A蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

ACTL6A蛋白高表達(dá)與宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分解、TNM分期相關(guān)，而與患者年齡、腫瘤大小無(wú)關(guān)，見表2。

2.3 ACTL6A與宮頸癌生存的相關(guān)分析

所有患者均接受門診或電話隨訪，隨訪時(shí)間3-60個(gè)月。在宮頸癌癌組織中，ACTL6A蛋白高表達(dá)患者總生存明顯低于低表達(dá)患者（X2=7.126，P=0.038），見圖2。

2.4 多因素Cox回歸分析

Cox逐步多因素分析顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期和ACTL6A均是宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響指標(biāo)，見表3。

3 討論

宮頸癌是全球女性中第四大常見癌癥，發(fā)病率和致死率較高，目前臨床上主要還是采用手術(shù)、放療、化學(xué)療法或聯(lián)合療法進(jìn)行治療，但臨床效果不明顯。ACTL6A是ATP依賴的SWI/SNF樣BAF染色質(zhì)重塑復(fù)合物的成員，在調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)移、染色質(zhì)重塑和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用。

圖2 生存曲線

ACTL6A在祖細(xì)胞和干細(xì)胞中的表達(dá)升高，并且在促進(jìn)細(xì)胞自我更新和抑制分化中起重要作用；同時(shí)也是多種癌癥中潛在的致癌基因，在橫紋肌肉瘤、肝細(xì)胞癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和結(jié)腸癌等多種癌組織中高表達(dá)[6]。本研究中，宮頸癌癌組織的ACTL6A陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，說明ACTL6A高表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生存在一定的聯(lián)系。而且，研究結(jié)果顯示ACTL6A蛋白高表達(dá)與宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分解、TNM分期相關(guān)，其中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)G2+G3期、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期中ACTL6A表達(dá)水平較高，說明ACTL6A參與宮頸癌的進(jìn)展，并與癌細(xì)胞的遷移和浸潤(rùn)相關(guān)。

表2 ACTL6A蛋白表達(dá)與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系（例（%））

表3 多因素Cox回歸分析

研究發(fā)現(xiàn)，ACTL6A的過表達(dá)促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的遷移和侵襲，說明ACTL6A在體外可促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展[8]。而且Xiao等研究發(fā)現(xiàn)，ACTL6A在肝細(xì)胞癌細(xì)胞和組織中明顯上調(diào)，這種高水平ACTL6A與侵襲性臨床病理特征相關(guān)，是肝癌患者總體生存和獨(dú)立不良預(yù)后因素，同時(shí)ACTL6A異位表達(dá)在體外顯著促進(jìn)HCC細(xì)胞遷移、侵襲[9]。

本研究多因素Cox回歸分析顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、TNM分期和ACTL6A均是宮頸癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響指標(biāo)，說明ACTL6A參與了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，宮頸癌癌組織中ACTL6A的表達(dá)可作為判斷宮頸癌病理類型的參考指標(biāo)。而且在宮頸癌癌組織中，ACTL6A蛋白高表達(dá)患者與低表達(dá)患者相比，總生存較差，提示ACTL6A可以反映宮頸癌患者預(yù)后，并可以作為宮頸癌治療的新的靶點(diǎn)。

總之，ACTL6A與宮頸癌的發(fā)生和進(jìn)展關(guān)系密切，是判斷宮頸癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)，并可能成為宮頸癌治療的新靶點(diǎn)。