異甘草素通過(guò)調(diào)節(jié)Nrf2/HO-1氧化應(yīng)激通路抑制ROS生成保護(hù)阿霉素誘導(dǎo)的藥物性胰腺炎

袁晨晨，朱擎天，沈沁浩，許杏萌，許 堯，楊 琦，李百?gòu)?qiáng)，路國(guó)濤，李維勤

袁晨晨，許堯，楊琦，李百?gòu)?qiáng)，李維勤，南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬金陵醫(yī)院(中國(guó)人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院)全軍普通外科研究所重癥醫(yī)學(xué)科江蘇省南京市 210002

朱擎天，沈沁浩，許杏萌，路國(guó)濤，揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科/胰腺中心 江蘇省揚(yáng)州市225001

0 引言

藥物性急性胰腺炎(drug-induced acute pancreatitis，DAP)是藥物誘發(fā)的一種消化系統(tǒng)急性炎癥性疾病.在急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)病因中藥物引起的占2.8%-3.6%[1，2]，其中近80%為輕到中度病例[2]，預(yù)后較好.過(guò)去幾十年期間，世界衛(wèi)生組織(world health organization，WHO)報(bào)告了超過(guò)525種不同類別的藥物可能會(huì)引起AP的副作用[3]，其中絕大多數(shù)數(shù)據(jù)來(lái)自病例報(bào)告，只有31種明確與AP之間的因果關(guān)系[4]，其余仍有待研究證實(shí).阿霉素(doxorubicin，DOX)是一種高效廣譜的蒽環(huán)類非特異性抗腫瘤藥物，可在不同生長(zhǎng)階段抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，已被廣泛應(yīng)用于血液腫瘤和各種實(shí)體腫瘤的臨床化療[5].有研究回顧了145例接受經(jīng)動(dòng)脈阿霉素化學(xué)栓塞治療的肝細(xì)胞癌患者，其中7例患者(0.4%)在化學(xué)栓塞后發(fā)生持續(xù)性腹痛及血淀粉酶升高，診斷為DAP.其中4例患者出現(xiàn)了AP相關(guān)并發(fā)癥，包括胰腺組織壞死(3例)和假性囊腫形成(1例)[6].此外有多篇病例報(bào)告報(bào)道了以DOX為基礎(chǔ)的藥物洗脫珠經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(TACE)治療肝癌患者并發(fā)AP[7，8].但尚無(wú)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究闡明DOX是否可以引起DAP，及造成的損傷嚴(yán)重程度如何.且DAP的治療以停藥及支持治療為主，尚無(wú)特異性的治療藥物[9].

異甘草素(isoliquiritigenin，ISL)是從天然草藥甘草根中提取的一種類黃酮化合物[10].ISL具有廣泛的藥理作用，包括抗腫瘤、抗炎、抗氧化應(yīng)激等活性[11-13].本研究團(tuán)隊(duì)先前研究證實(shí)，ISL通過(guò)調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激通路保護(hù)雨蛙素誘導(dǎo)的小鼠AP模型[14].然而，ISL對(duì)DOX引起DAP的作用國(guó)內(nèi)外尚無(wú)研究報(bào)道.在本研究中，我們旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)DOX引起DAP的損傷及嚴(yán)重程度，闡明ISL對(duì)DAP的影響，并探討其潛在的機(jī)制.

1 材料和方法

1.1 材料 材料、試劑與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:24只雄性8周齡ICR小鼠體重25-30 g，購(gòu)自南京江寧青龍山動(dòng)物繁育基地.實(shí)驗(yàn)前，所有小鼠均飼養(yǎng)于SPF設(shè)施中，給予實(shí)驗(yàn)特定干預(yù)前自由攝食標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物飼料和水，環(huán)境溫度控制范圍(25 ℃±2 ℃)，循環(huán)照明(12 h光照/12 h黑暗)條件.ICR小鼠健康狀況符合國(guó)家普通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康標(biāo)準(zhǔn).實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)倫理審查委員會(huì)審查批準(zhǔn)進(jìn)行(批件號(hào):2020JLHKYLWDWLS-00311).DOX (Doxorubicin，貨號(hào):HY-15142)購(gòu)自中國(guó)MCE(MedChemExpress)公司，ISL (Isoliquiritigenin，CAS號(hào):961-29-5)購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司.Dihydroethidium (DHE，貨號(hào):GDP1018)和4，6-Diamidino-2-Phenylindole，Dihydrochloride (DAPI，貨號(hào):GDP1012)染色試劑購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司.抗核因子紅系2相關(guān)因子2 (Nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)抗體(貨號(hào):ab31163)，抗血紅素加氧酶-1 (Heme Oxygenase-1，HO-1)抗體(貨號(hào):ab68477)，抗胰腺alpha amylase抗體(貨號(hào):ab199132)均購(gòu)自美國(guó)abcam公司，內(nèi)參基因GAPDH抗體(貨號(hào):G9545)購(gòu)自SigmaAldrich上海貿(mào)易有限公司.二抗和DAB顯色劑均購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司.光學(xué)顯微鏡和熒光顯微鏡購(gòu)自日本奧林巴斯.WB多功能成像儀(Tanon-5200)購(gòu)自上海天能科技有限公司.

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型的建立及分組:如圖1A示，24只雄性ICR

小鼠根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為三組:對(duì)照組(Control組，腹腔注射等量生理鹽水)，DOX誘導(dǎo)的DAP模型組(DOX-DAP組，于第1 d和第3 d分別給予兩次腹腔注射DOX，每次注射劑量為10 mg/kg/只，第二次腹腔注射后的48 h處死小鼠)和ISL治療組(DOX+ISL組，隔日腹腔注射DOX 10 mg/kg/只的同時(shí)，提前一天每日給予ISL灌胃100 mg/kg/只，共灌胃給藥ISL五次)，每組8只.造模后5 d結(jié)束實(shí)驗(yàn)進(jìn)行取材，所有動(dòng)物處死前均用5%水合氯醛(0.01 mL/g)腹腔注射麻醉.立即留取小鼠胰腺組織，4%多聚甲醛固定部分組織進(jìn)行病理染色及免疫組化染色分析，其余組織置于-80 ℃保存，用于免疫熒光染色分析及Western blot檢測(cè).

1.2.2 胰腺組織HE染色及病理評(píng)分:胰腺組織經(jīng)4%多聚甲醛固定48 h后，脫水，打蠟和包埋制作成5 μm切片，在60 ℃下烘烤.使用蘇木精-伊紅(H&E)染色組織切片.隨后依次進(jìn)行梯度酒精脫水，二甲苯透明，在顯微鏡下進(jìn)行組織學(xué)觀察并拍照.組織的病理學(xué)評(píng)分和分析由2個(gè)獨(dú)立的病理科醫(yī)師采用盲法進(jìn)行，胰腺病理?yè)p傷評(píng)分依據(jù)Schmidt法[15]從組織水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和腺泡細(xì)胞壞死三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)估.

1.2.3 胰腺組織alpha淀粉酶免疫組化染色:5 μm胰腺組織切片經(jīng)脫蠟，梯度酒精脫水，EDTA抗原修復(fù)緩沖液煮沸，進(jìn)行胰腺alpha淀粉酶的免疫組織化學(xué)染色.經(jīng)過(guò)自然冷卻后，3%過(guò)氧化氫溶液室溫孵育15 min.切片與alpha amylase抗體(1:200稀釋)在4 ℃共同孵育過(guò)夜.采用生物素標(biāo)記的二抗(1:200稀釋度)孵育1 h.最后用蘇木精復(fù)染，在顯微鏡下觀察玻片并拍照，應(yīng)用Image J軟件對(duì)陽(yáng)性染色區(qū)域進(jìn)行半定量分析.

1.2.4 胰腺組織ROS免疫熒光染色:用二氫乙錠(dihydroethidium，DHE)熒光探針檢測(cè)胰腺組織中ROS的含量.-80 ℃保存的胰腺組織，經(jīng)冰凍切片機(jī)制成5 μm切片，用免疫組織化學(xué)筆在切片組織周圍畫(huà)一個(gè)圈，防止染色溶液流出.滴加DHE探針染液室溫振蕩15 min，隨后玻片置于pH=7.4的PBS中洗滌3次，每次振蕩5 min.室溫下DAPI溶液染核振蕩10 min后，再次PBS振蕩洗滌3次，封片.熒光顯微鏡下觀察玻片并拍照，使用Image J軟件對(duì)ROS紅色熒光陽(yáng)性染色區(qū)域進(jìn)行半定量分析.

1.2.5 Western blot檢測(cè):在含RIPA裂解液和蛋白酶抑制劑的混合物中制備胰腺組織勻漿液樣品.BCA試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度.取等量(30 mg)蛋白進(jìn)行10% SDS-PAGE凝膠電泳分離并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，5%的脫脂牛奶在室溫下封閉2 h，4 ℃孵育抗Nrf2抗體(1:1000稀釋)，抗HO-1抗體(1:1000稀釋)，抗GAPDH抗體(1:5000稀釋)過(guò)夜.隔天TBST洗膜3次，室溫孵育山羊抗鼠抗體或山羊抗兔抗辣根過(guò)氧化物酶抗體(1:10000稀度) 2 h后TBST洗膜3次，ECL化學(xué)發(fā)光底物液檢測(cè)，天能-5200多功能成像儀曝光.使用Image J軟件半定量分析圖像強(qiáng)度.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism 8.01軟件進(jìn)行分析和制圖，計(jì)量資料以mean±SD表示，柱狀圖數(shù)據(jù)均以mean±SD表示.兩組間比較采用t檢驗(yàn)，兩因素的ANOVA進(jìn)行多重比較.統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性用aP＜0.05，bP＜0.01或cP＜0.001表示.

2 結(jié)果

2.1 DOX引起小鼠胰腺組織病理?yè)p傷且其可被ISL顯著減輕 為了研究DOX給藥是否可以引起藥物性的急性胰腺炎癥以及ISL治療對(duì)其的影響，根據(jù)圖1A所示實(shí)驗(yàn)方案，我們?cè)u(píng)估了胰腺的組織病理學(xué)損傷程度.HE染色結(jié)果顯示，Control組的胰腺組織形態(tài)基本正常，DOX腹腔注射后可引起小鼠急性胰腺損傷，胰腺組織總的病理學(xué)評(píng)分顯著升高(P＜0.001)，其特征表現(xiàn)以組織水腫為主(P＜0.001)，伴有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(P＜0.01)，同時(shí)很少見(jiàn)腺泡細(xì)胞壞死，腺泡細(xì)胞壞死評(píng)分DOX-DAP組相較于Control組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.與DOX-DAP組相比，給予ISL灌胃治療后，胰腺的組織學(xué)損傷明顯減輕，總的病理學(xué)評(píng)分明顯降低(P＜0.05)，僅表現(xiàn)為輕度水腫，極少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和無(wú)腺泡細(xì)胞壞死，組織水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)評(píng)分也明顯降低(P＜0.05)，腺泡細(xì)胞壞死評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖1B-F示).

2.2 DOX促使小鼠胰腺組織淀粉酶異常釋放，ISL治療恢復(fù)其正常生理狀態(tài) 為了評(píng)估DOX給藥后及ISL治療后胰腺組織淀粉酶變化水平，我們對(duì)胰腺組織的病理切片進(jìn)行了alpha淀粉酶的免疫組化染色.結(jié)果(圖2A-B)顯示，與Control組相比，DOX給藥后胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá)明顯降低(P＜0.01)，提示胰腺組織淀粉酶早期釋放入血，腺泡細(xì)胞受到損傷酶原合成功能障礙.與DOXDAP組相比，ISL治療后胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá)顯著升高(P＜0.05)，淀粉酶異常釋放減少，腺泡細(xì)胞功能恢復(fù)穩(wěn)態(tài).

2.3 ISL減輕DOX導(dǎo)致的小鼠胰腺組織ROS蓄積，增加小鼠胰腺組織抗氧化應(yīng)激水平 ROS的聚集及其介導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷在急性胰腺炎中起關(guān)鍵作用，為了闡明ISL保護(hù)DOX引起的DAP的潛在機(jī)制，我們進(jìn)一步檢測(cè)了胰腺組織ROS的產(chǎn)生以及抗氧化應(yīng)激損傷相關(guān)蛋白(Nrf2和HO-1)的表達(dá)水平.免疫熒光(圖3A-B)與Western blot結(jié)果(圖4A-B)顯示，與Control組相比，DOX給藥后胰腺組織ROS產(chǎn)生水平明顯升高(P＜0.001)，胰腺組織中Nrf2蛋白和HO-1蛋白表達(dá)水平輕度升高(P＜0.001).與DOX-DAP組相比，ISL治療后胰腺組織ROS水平顯著降低(P＜0.001)，胰腺組織中Nrf2蛋白和HO-1蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.001)，提示ISL給藥通過(guò)激活Nrf2/HO-1抗氧化應(yīng)激通路，增加Nrf2及下游抗氧化蛋白HO-1的表達(dá)，減少組織ROS蓄積引起的氧化應(yīng)激損傷，發(fā)揮保護(hù)DOX引起的DAP的作用.

3 討論

圖1 異甘草素減輕阿霉素引起的小鼠胰腺組織病理?yè)p傷嚴(yán)重程度.A:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案及分組; B:胰腺組織的HE染色圖像，放大倍數(shù)為100x和400x.C-F:胰腺組織的病理學(xué)評(píng)分.每組n=8.統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性用aP＜0.05，bP＜0.01或cP＜0.001表示.DOX:阿霉素; ISL:異甘草素; DAP:藥物性急性胰腺炎; ip:腹腔注射; ig:灌胃.

DOX已成為抗癌治療的基石，但是其臨床應(yīng)用受到嚴(yán)重副作用的限制，主要是劑量依賴性不可逆的心臟毒性作用[16].除此之外，消化系統(tǒng)的毒性作用也屢見(jiàn)不鮮，多篇病例報(bào)道研究了DOX引起急性胰腺炎的藥物副作用[7，8，17]，但目前缺乏實(shí)驗(yàn)性證據(jù)證實(shí).DOX殺傷細(xì)胞的作用機(jī)制主要是可逆地與拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ和Ⅱ結(jié)合，導(dǎo)致DNA斷裂，染色質(zhì)損傷[18].此外，線粒體也是DOX的主要毒性靶點(diǎn)，線粒體內(nèi)膜富含心磷脂，與DOX有較高的親和力.線粒體是產(chǎn)生氧自由基的主要場(chǎng)所，細(xì)胞中ROS大量積累，破壞線粒體膜的通透性，影響線粒體膜電位的維持[19-21].這些因素共同作用引起氧化應(yīng)激損傷和細(xì)胞毒性.依據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道DOX在動(dòng)物體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)[22]，以及參考既往研究報(bào)道DOX誘導(dǎo)的小鼠心肌損傷動(dòng)物模型[23，24]的給藥方式與劑量，設(shè)計(jì)了本研究DOX的給藥方案.本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)首次證明了腹腔注射DOX能夠誘導(dǎo)小鼠胰腺腺泡細(xì)胞損傷，導(dǎo)致DOX相關(guān)的DAP發(fā)生，病理上主要表現(xiàn)為胰腺組織水腫，伴有不同程度炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腺泡細(xì)胞壞死較少見(jiàn).血清生化淀粉酶水平對(duì)于AP的診斷至關(guān)重要，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中雨蛙素誘導(dǎo)的經(jīng)典小鼠AP模型(連續(xù)7-10次腹腔注射給藥，50 μg/kg/h)，血清淀粉酶脂肪酶于6 h升高，12 h達(dá)峰值，24 h消退恢復(fù)接近正常[14].本研究中DOX采用隔日腹腔注射給藥，與雨蛙素的連續(xù)腹腔給藥不同，其血清淀粉酶顯著變化的時(shí)間點(diǎn)不容易采集，淀粉酶急性變化的窗口期很難把握，同時(shí)多次取血增加小鼠的異常死亡.本研究中缺少血清生化淀粉酶的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是研究的不足，生化酶學(xué)的動(dòng)態(tài)變化還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)闡明.為了探究DOX損傷后胰腺組織淀粉酶變化水平，我們對(duì)胰腺組織病理切片進(jìn)行了alpha淀粉酶免疫組化染色，DOX-DAP組胰腺組織淀粉酶表達(dá)降低，酶原合成功能障礙，進(jìn)一步證實(shí)了DOX引起DAP發(fā)生，腺泡細(xì)胞損傷和功能障礙，淀粉酶異常釋放.為了進(jìn)一步探究DOX引起胰腺組織損傷的機(jī)制，我們進(jìn)行了ROS免疫熒光染色，結(jié)果顯示DOX作用后的胰腺組織ROS大量積累，提示DOX的胰腺毒性作用與其導(dǎo)致的ROS氧化應(yīng)激損傷相關(guān).

圖2 異甘草素增加阿霉素作用的小鼠胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá).A:胰腺組織alpha淀粉酶免疫組化.放大倍數(shù)為100x和400x.B:alpha淀粉酶免疫組化半定量分析.每組n=8.統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性用bP＜0.01或cP＜0.001表示.DOX:阿霉素; ISL:異甘草素; DAP:藥物性急性胰腺炎.

氧化應(yīng)激是細(xì)胞損傷的重要途徑之一[25].臨床和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，氧化應(yīng)激存在于AP的發(fā)病早期，被認(rèn)為是AP的經(jīng)典發(fā)病機(jī)制之一[26].在各種AP動(dòng)物模型中，抗氧化治療也已被證明可以有效減少腺泡細(xì)胞壞死和減輕胰腺組織損傷的嚴(yán)重程度[27，28].Nrf2/HO-1通路是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)的中樞調(diào)節(jié)因子.Nrf2是一種細(xì)胞內(nèi)抗氧化轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)入細(xì)胞核后與下游HO-1蛋白相互作用，激活氧化應(yīng)激通路[29，30].ISL是一種天然類黃酮化合物，提取自天然草藥甘草的水溶物中，具有廣泛的抗炎，抗腫瘤和抗氧化作用[31，32].本團(tuán)隊(duì)前期研究證實(shí)，在兩種小鼠AP模型中，ISL可降低血清淀粉酶和脂肪酶水平，并以劑量依賴的方式減輕胰腺組織的組織病理學(xué)表現(xiàn)，降低氧化應(yīng)激損傷，增加Nrf2/HO-1通路蛋白的表達(dá)，減輕小鼠AP.給予Nrf2抑制劑(ML385)或HO-1抑制劑(Znpp)阻斷Nrf2/HO-1通路后，未能觀察ISL對(duì)小鼠AP的保護(hù)作用.在L-精氨酸誘導(dǎo)的SAP模型中，ISL可減輕胰腺組織損傷和胰腺炎相關(guān)性肺損傷的嚴(yán)重程度[14].但是，ISL對(duì)DOX引起DAP的作用及機(jī)制尚不清楚.與前期研究結(jié)果一致的是，DOX作用后的胰腺組織WB檢測(cè)Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)輕度升高，考慮可能是組織自身保護(hù)機(jī)制引起的適應(yīng)性變化，但是其升高水平不足以抵抗急性胰腺損傷.經(jīng)灌胃給予ISL治療后，顯著降低DOX引起的胰腺組織病理?yè)p傷嚴(yán)重程度，恢復(fù)組織alpha淀粉酶表達(dá)水平，維持腺泡細(xì)胞穩(wěn)態(tài).作用機(jī)制上，ISL治療后，降低胰腺組織ROS的產(chǎn)生和積聚，進(jìn)一步激活Nrf2/HO-1通路，增加Nrf2及下游抗氧化蛋白HO-1的表達(dá)，減少氧化應(yīng)激損傷，從而保護(hù)DOX引起的DAP.

4 結(jié)論

總的來(lái)說(shuō)，我們的研究證明了DOX誘導(dǎo)小鼠DAP的發(fā)生，表現(xiàn)為胰腺組織水腫，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)且伴隨組織ROS積聚和氧化應(yīng)激損傷.ISL能顯著減輕DOX導(dǎo)致的胰腺組織病理?yè)p傷，調(diào)節(jié)Nrf2/HO-1氧化應(yīng)激通路抑制組織ROS生成，保護(hù)DOX相關(guān)的DAP，提示ISL可作為臨床治療DAP的潛在藥物.

圖3 異甘草素減少阿霉素導(dǎo)致的小鼠胰腺組織ROS蓄積.A:胰腺組織的DHE免疫熒光圖像.ROS生成通過(guò)熒光標(biāo)記的DHE染色測(cè)量，放大倍數(shù):200x.B:DHE熒光的光密度半定量分析.每組n=8.cP＜0.001表示統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著性差異.DOX:阿霉素; ISL:異甘草素; DAP:藥物性急性胰腺炎; ROS:活性氧.

圖4 異甘草素激活Nrf2/HO-1氧化應(yīng)激通路.A:Western blot檢測(cè)各組胰腺組織中Nrf2蛋白和HO-1蛋白表達(dá).B:Nrf2蛋白和HO-1蛋白表達(dá)的半定量分析.每組n=8.cP＜0.001表示統(tǒng)計(jì)學(xué)具有顯著性差異.DOX:阿霉素; ISL:異甘草素; DAP:藥物性急性胰腺炎; Nrf2:核因子紅系2相關(guān)因子2; HO-1:血紅素加氧酶-1.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

藥物性急性胰腺炎是藥物臨床應(yīng)用中常見(jiàn)的消化系統(tǒng)副作用，大量研究?jī)H限于病例報(bào)道，缺乏動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其因果關(guān)系.藥物性急性胰腺炎(drug-induced acute pancreatitis，DAP)的治療以停藥及支持治療為主，尚無(wú)特異性的治療藥物.明確藥物引起動(dòng)物體內(nèi)胰腺病理?yè)p傷的實(shí)驗(yàn)性證據(jù)，開(kāi)發(fā)針對(duì)性治療藥物，對(duì)于預(yù)防和治療DAP具有重要意義.

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

多篇病例報(bào)道阿霉素(doxorubicin，DOX)引起急性胰腺炎的藥物副作用，但尚無(wú)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，且缺乏特異性的治療藥物.異甘草素(isoliquiritigenin，ISL)具有抗炎、抗氧化等多種藥理活性，但是ISL對(duì)DOX引起DAP的作用及機(jī)制尚不清楚.

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

證實(shí)DOX可引起DAP的病理?yè)p傷，并闡明ISL保護(hù)DAP的作用及機(jī)制.

實(shí)驗(yàn)方法

將雄性25-30 g ICR小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(Control組，腹腔注射等量生理鹽水)，DOX誘導(dǎo)的DAP模型組(DOXDAP組，隔日腹腔注射DOX 10 mg/kg/只)和ISL治療組(DOX+ISL組，隔日腹腔注射DOX 10 mg/kg/只，同時(shí)提前一天每日給予ISL灌胃100 mg/kg/只)，每組8只.造模后5 d取材進(jìn)行胰腺組織病理檢測(cè)及評(píng)分; 免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá); 免疫熒光法檢測(cè)胰腺組織ROS生成; Western blot法檢測(cè)胰腺組織Nrf2和HO-1蛋白表達(dá).

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與Control組相比，DOX-DAP組小鼠胰腺組織呈現(xiàn)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等特征性病理?yè)p傷，胰腺組織病理學(xué)評(píng)分顯著升高(P＜0.001)，胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01).與DOX-DAP組相比，ISL治療組的胰腺組織病理評(píng)分顯著降低(P＜0.05)，胰腺組織alpha淀粉酶表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05).ROS熒光染色及Western blot檢測(cè)顯示，與Control組相比，DOX-DAP組小鼠胰腺組織ROS生成顯著升高(P＜0.001)，Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平輕度升高(P＜0.001).與DOX-DAP組相比，ISL治療組的胰腺組織ROS水平顯著降低(P＜0.001)，Nrf2和HO-1蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.001).

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

DOX能夠引起小鼠胰腺出現(xiàn)以組織水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)為主要特征的病理?yè)p傷，ISL通過(guò)增強(qiáng)胰腺組織抗氧化應(yīng)激水平對(duì)DOX引起的DAP具有保護(hù)作用.

展望前景

警惕DOX臨床應(yīng)用中的胰腺損傷副作用，ISL或可成為DAP預(yù)防與治療的新方法.